三氧化二砷对K562及其多药耐药细胞系K562／A02细胞的诱导凋亡研究

Ｐ７ Ｉ０表达阳性 的 白血病 细胞 往往对 多种不 同化学 结 构 和作用靶点的药物 同时 发生而 药 。我们 观察 了三 氧化二 砷 寸 （ Ｏ ） Ａ ３ 对体外 培养 的人 急性红 白血病细 胞 系 Ｋ ６ ５２及其 多 药耐药细胞 系 Ｋ ６１０ ５２Ａ ２细胞 的凋亡诱 导作 用 ， 以探 讨 Ａ 是嘎 对多药耐药 白血病细胞 的作用
８ 流式细胞 术检测 Ｐ７ １０表达 取经 Ａ
作用后 的各 组
验前无药传代 ３改
３ 哪 作用 法测定 Ａ 对 Ｋ６ ５ ２及 Ｋ ６／０ 细胞 的生 长抑 制 ５ ２Ａ ２
Ｋ ６Ｊ ０ 细胞 ｌ ，０ｇＬ多聚甲醛溶 液固定 细胞 ， ５ ２Ａ ２ １ ／ 与小 鼠抗 Ｍ Ｋ１ Ｒ一 ６单抗和藻红蛋 白（ Ｅ 标记兔 抗 鼠二抗 ３ Ｐ） ７℃作用 ３ ０
维普资讯
２０ ０ ２年 １月第 ２ ３
ＶＪ３Ｎ ｏ２．ｏ
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研 究 报 告 ・
三氧化二砷对 Ｋ ６ ５２及其 多药耐 药细胞 系 Ｋ６ｔ０ ５ ２Ａ ２细胞 的诱 导 凋 亡研 究
邹俊 晖 潘祥 林 冯 长伟 郭娟娟
公 司提供 ） 要求 操作。
１ 药 品
０【
公 司 干 Ｈ ｎｓ 冲液 中 ， ， ／ ２ 细 胞 株及 细胞 培 捧 Ｋ ６ ５ ２受 其 多药 耐药 细 胞 系 Ｋ ６ ／ ５２
（ Ｈ ７５ ， ｐ ）体积分数 为 ９ ％的甘油 ， ￣ ｌ ｙ ｒ ９０ ，７ － ， ０ ４ｎ ／ ｒ ］ ｏ ３ Ｌｌ ℃水浴 １ｈ 。在 ３Ｏ岫 激 发波 长和 ４０岫 发散波 长下 用荧 ６ ４
ｒｎｌ 焦磷 酸钠 ］０ ， 复用 嗳头 吹打并 振荡 ， ｍ ｏＬ ／ １０ 反 室温 作 用 ３ ｉ， 心 取 上 清 液 ， 后 加 人半 咣 无冬 酶 ３底 物 Ａ － ０ｍｔ 离 ｔ 而 Ｃ
Ｄ Ｖ － ＭＣ Ｉ Ｅ ＤＡ （ ）１ 和 Ｈ ｐｓ 冲液 ［ ｍ ｄｌ ｅｅ ０ ｅｅ 缓 柏 ｍ Ｌ Ｈ ｐｓ
材 料和 方 法
７ 半胱天冬酶 ３ 括性测定
按 半胱天冬酶 ３ 活性 检浸 试剂 Ｉ
盒（ ， Ｍ ｇ ｅ １ ａ ａｉ 生物工程有限公 司产品 ， ￣ｒ ｎ 深圳 晶美生物工程 有 限公 司提供 ） 要求进行 ：具体 为 ： ｌ６ 取 ０ 细胞 ， 人细胞裂 解 加
液［０ｍ ｒｌ ｒ－ Ｃ （Ｈ ７ ５ １ ｍ ｌ ａ ２ ０ｔ ａＨ ０ １ ｒ ／ Ｔｉ Ｈ １ ｐ ｊ ０ｍ ｏ ＬＮｉ Ｐ ４Ｎ２ Ｐ ｄ ￣Ｌ ｓ ／ ｌ （ Ｈ７５ ．３ ｍ ／ ａ Ｉ体 积分 数 为 １ Ｔ ｔｎｘ １０ １ ｐ ． ） １０ｍ ｄ ＬＮ Ｃ ， ％ ｒｏ 一０ ，０ ｉ
细胞ｌ 牛长抑翎率 （ ＝（ 一 婪１ ×１ ％ ％ 】 ） ０ ０
｜ ｝
ｌ ｎ 接种 于古 １岫 ＬＡ ｌ ／ｄ ｊ ｏ 的培养液 中共 同孵育 ２ ， ４ｈ取 其中 ｌ 细胞 ，Ｂ 缓 冲液充 分洗 涤后 ． ＰＳ 加人 １Ｉ 体积分数 为 ｄ Ｉ １ ％的 ＴｉｎＸ １０溶 液裂解 细胞 ， ｒｏ －０ ｔ 加人浓硝 酸与 浓高氯 酸处 理， 加热至近 于 ， 解 于 １ ５ｍ ］ Ｃ 、０ ＬＫ １１ 硫 溶 ． ｏ ＬＨ １１０ Ｃ、０ｄＥ ／ 脲溶液中 ， 加入 ０５ｍ 二 巯基丙 醇 ， ｍ 甲苯 ． 心后取 上层 ． ｌ １ｌ 离 液用气相色谱法检 测。
光分光光度 计 （ 日立一５ ８０型 ） 检测 荧 光 强度 ． 录 所得 的 ＾ 记
值
Ａ ２细胞 （ ０ 中国 医学科 学 院 、 国梆 和 医科大 学血 液学研 究 中 所提供 ） 置于含体积分数为 １ ％小牛 ＿ 的 Ｒ Ｍ ６０培养 ０ 血清 Ｐ Ｉ１４
液中 ． ３ 在 ７℃ 、 积分数 为 ５ 体 ％的 Ｇ 孵箱 中培 养 。Ｋ ， ｑ 抛 Ａ ２ 胞的培养基中另外加人 阿霉素 （】 Ｌ ， 于每次实 ０细 ｍ ）并
１ 统 计学 处理 ０ 采用两样本均数 比较的 ｆ 检验 。
结 果
４ 细 胞凋 亡的诱导
取对 数生 长期的 Ｋ ６ ５２和 Ｋ ６／ ０ ５ ２Ａ ２细
胞 以 ２ ０， 培养于含 ０ ５ １０ ２０ ５０￣ ｌ ｏ ×ｌ５ｍｊ ． ， ． ｍｏ ＬＡ ３的培 ／ 养基中 ， 收集 ＾ 是嘎 作用不同 问的各组细胞 ： ５ 流式细胞 术榆 测细胞 凋 亡 收集 各组 细胞 ｌ 个 用体 积分数为 ７ ％的乙 醇 ４℃下 固定 过夜 ， ０ 离心 并 重悬 于 １ｎ ｄ Ｐ Ｓ加 １ｎ Ｃ缓 冲液 （ ｏ Ｌ Ｎ２ｌＯ ， ． ｍ ｌ Ｂ ， ｄＰ ０ ２ｍ ｌ ａｔ ￣０ Ｉ ｏ Ｌ柠 檬 ／ Ｐ ／ 酸 ，Ｈ ８０ ． ｐ ．）置室 温 】 ｉ， ０ｍｎ离心去上清 ． ＩｄＥＲ ａ Ｏ 加 、 Ａ２ Ｏ
将 Ｋ６ ５２受 Ｋ ６／０ ５２Ａ ２细胞 以 ２×ｌ ｍ 浓度接 种于 ９ ／ ｌ ６
ｍｎ流式细胞仪计数 ． ｉ， 并用 Ｆ Ｃｃｎ Ａ Ｓａ 软件分析结果 。
９ 细胞内氧化 砷含量的测 定 Ｋ６ ５２和 Ｋ６ ／０ 细胞以 ５× ５ ２Ａ ２
孔培养板上 ， ｆ Ａ 以 ０５ １０ １５ ２０ ２ ５和 ３ ０ｔ ｏ １加 ． ， ，． ， ａ ｌ ｎ／ 人培养体 系中 ， 个浓度 每 殳４个平行孔。培养 ７ ２ｈ后每孔 加 人 ５ ＬＭ ｒｌ ， Ｔ Ｏ 继续培养 ４ｈ １ ｏ ｒｎ离心 ， ． ｏｏｒ ａ ／ｉ 去上清液 ， 每孔加人二 甲璀 １ １ １混 匀后 用 自动酶标仪 测定 渡长 Ⅲ砜 ５ Ｊ． ０ ５０ｎ ７ ｍ处的吸 光度 （ ）计算 细胞 生长抑 制率 ： Ａ，