细菌革兰氏染色实验报告

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细菌革兰氏染色实验报告
实验细菌的革兰氏染色
实验八、细菌革兰氏染色实验
一、实验目的和内容
目的:1.熟悉油镜的使用与保养。

2.掌握细菌革兰氏染色法的原理及实验操作。

3.了解革兰氏染色实验在细菌分类鉴定上的重要性。

内容:1.学习显微镜(油镜)的使用和保养。

2.学习细菌革兰氏染色实验。

3.用油镜观察枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌染色装片并判断其结果。

二、实验原理
革兰氏染色法是1884年由丹麦病理学家C(Gram所创立的。

革兰氏染色法可将所有的细菌区分为革兰氏阳性菌(G+)和革兰氏阴性菌(G-)两大类,是细菌学上最常用的鉴别性染色法。

染色前必须先固定细菌,其目的有二:一是杀死细菌,使细胞质凝固,菌体粘附于玻片上;二是增加其对染料的亲和力。

常用的有加热和化学固定两种方法。

固定时应尽量维持细胞原有形态,防止细胞膨胀或收缩。

三、实验材料和用具
(1)菌种:培养12-16h的苏云金杆菌(Bacillus thuringiensis)或者枯草杆菌(Bacillus subtilis),培养24小时的青枯假单胞杆菌。

(2)染色液和试剂:吕氏碱性美蓝染液(或草酸铵结晶紫染液),石炭酸复红染液、结晶紫、鲁哥尔碘液、95 %酒精、复染剂(蕃红)、二甲苯、香柏油。

(3)器材:废液缸、洗瓶、载玻片、接种杯、酒精灯、打火机、记号笔、擦镜纸、显微镜。

四、实验步骤:
?涂片:取干净载玻片一块,在载玻片的加一滴蒸馏水,按无菌操作法取菌涂片,做成菌液。

干燥(可过火3—4次)制成薄的涂面,注意取菌不要太多,过火速度要快。

? 初染:在做好的涂面上滴加草酸铵结晶紫染液,染1 min,倾去染液,流水冲洗至无色。

? 媒染:先用新配的碘液冲去残水,而后用其覆盖涂面1 min,后水洗。

? 脱色:除去残水后,滴加95 %酒精进行脱色约15,20 sec,后立即用流水冲洗。

? 复染:(来自: 写论文网:细菌革兰氏染色实验报告)滴加复染剂——番红染色液,染3,5 min,水洗后用吸水纸吸干。

? 镜检:先低倍观察,再高倍观察,并找出适当的视野后,将高倍镜转出,在涂片上加香柏油一滴,将油镜头浸入油滴中仔细调焦观察染色结果并绘图。

五、实验小结
(1)简述革兰氏染色实验的一般步骤。

(2)哪些环节会影响革兰色染色结果的正确性,其中最关键的
环节是什么,
(3)革兰氏染色时,初染前能加碘液吗,乙醇脱色后复染之前,革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌应分别是什么颜色,
(4)将实验结果填入下表并绘所观察到的细菌简图
实验结果:
?注意事项 1、革兰氏染色成败的关键是酒精脱色。

如脱色过度,革兰氏阳性菌也可被脱色而染成阴性菌;如脱色时间过短,革兰氏阴性菌也会被染成革兰氏阳性菌。

脱色时间的长短还受涂片厚薄及乙醇用量多少等因素的影响,难以严格规定,需要多加练习;
2、选用幼龄的细菌。

G+菌培养12h-16h,E.coli培养24h。

若菌龄太老,由于
菌体死亡或自溶常使革兰氏阳性菌转呈阴性反应。

篇二:革兰氏染色实验报告
革兰氏染色法的原理及其练习
摘要:革兰氏染色反应是细菌重要的鉴别特征,所以学习微生物学,进行革兰
氏染色实验是很重要的。

为保证染色结果的正确性,采用规范的的染色操作方法是十分必要。

本实验主要对大肠杆菌(Escherichia coli)、金黄色葡萄球菌(Staphyloccocus aureus
Rosenbach)、枯草杆菌 (Bacillus subtilis)进行革兰氏染色,观察它们的染
色特征,辨别是革兰氏阴性还是阳性,从而掌握其染色方法。

染色方法与过程很清晰,但实验结果中金黄色葡萄球菌(S.aureus Rosenbach)多组呈现假阴性。

本实验的主要目的是熟悉
并掌握革兰氏染色方法及原理,但要想做出很好的染色得多加练习。

本实验还
可以锻炼显微镜操作技术和无菌操作技术。

关键词:革兰氏染色大肠杆菌(E.coli) 金黄色葡萄球菌(S. aureus
Rosenbach) 枯草杆菌(B.subtilis)
引言
革兰氏染色是微生物学中最重要的鉴别染色方法,它可以直接将细菌分为革兰
氏阴性和革兰氏阳性。

革兰氏染色法可将细菌分为革兰氏阳性(G+)和革兰氏阴性
(G-)两种类型,这是由这两种细菌细胞壁结构组成与结构的差异所决定的。

经过一定的染色过程后,革兰氏阳性的细菌会因为细胞壁肽聚糖的含量高,脂质含量低而保持第一次染色的蓝紫色。

革兰氏阴性细菌细胞壁的脂质含量高,乙醇处理时脂质溶解,蓝色被洗脱,复染后变为红色。

革兰氏染色原理很简单,染色时需注意要注意使用处在活跃生长期的细菌,涂片不宜过厚,严格控制脱色时间。

大肠杆菌(E.coli)是革兰氏阴性细菌,金黄色葡萄球菌(S. aureus
Rosenbach)与枯草杆菌 (B.subtilis)都是革兰氏阳性细菌,染色后在显微镜下容易区别。

同时它们的形态各异,可以根据具体颜色和形态差异来判断染色是否成功。

本实验还涉及到高倍油镜的使用。

使用油镜与用一般的镜头不同,具体使用在实验方法中描述。

1.1材料
1.1.1菌种
大肠杆菌16小时牛肉膏蛋白胨琼脂斜面培养物,金黄色葡萄球菌16小时牛肉膏蛋白胨琼脂斜面培养物,枯草杆菌16小时牛肉膏蛋白胨琼脂斜面培养物。

1.1.2 溶液与试剂
无菌生理盐水,草酸铵结晶紫染液,卢戈氏碘液,95%乙醇,番红复染夜,香柏油,二甲苯
1.1.3仪器
酒精灯,载玻片,显微镜,双层瓶,接种环,滴管等
1.2 方法
1.2.1 制片:取活跃生长期菌种按常规方法涂片(不要太厚)、干燥和固定。

1.2.2染色
(1)初染:滴加草酸结晶紫染液覆盖涂菌部位,染色2min,水洗至流出水无色。

(2)媒染:用卢戈氏染液冲去残留水迹,再用碘液覆盖1min,倾去碘液,水洗至流出水无色。

(3)脱色:将玻片上的水用吸水纸吸取,用滴管流加95%乙醇脱色(持续20秒),稍后立即洗去乙醇。

(4)复染:将玻片上的水用吸水纸吸去,用番红复染液染色2min,水洗,吸去残水烤干。

1.2.3 镜检
分别用香柏油覆盖涂菌部位,先用低倍镜找到菌,换用
色情况。

观察结束后,用二甲苯擦洗镜头。

的物镜观察染
2(实验结果与分析
2.2 结果分析
大肠杆菌竟革兰氏染色后呈现红色,3个图片上都是红色,因此大肠杆菌应该是革兰氏阴性细菌,与事实相符,染色成功。

金黄色葡萄球菌比较难染色,从结果中可以分析,前两个涂片的菌种可能培养的时间太长了。

因为老龄的革兰氏阳性细菌会被染成红色而造成假阴性,老龄的G+细菌细胞壁老化,不能在乙醇处理的时候使肽聚糖网孔收缩而使碘-结晶紫复合物滞留在细胞壁,从而在复染时被染红。

枯草杆菌染色结果很好,蓝紫色很明显,染色成功。

1.3.3 小结
1、获得本实验成功的关键:固定时烘烤要适度,太轻会在冲洗时冲走细菌,过度会破坏细菌形态;脱色的时间要严格控制,脱色不够造成假阳性,脱色过度会出现假阴性;选用新培养的菌种,涂片时不能太厚。

这些问题在实验过程中几乎都有出现,尤其是对于初学者,特别需要注意。

2、革兰氏染色可以迅速将细菌分为阴性和阳性,是很重要的染色方法,也是相当复杂的染色方法。

通过练习革兰氏染色,既掌握了一般的染色方法,又为以后技术要求更高的染色,观察,鉴别奠定了基础。

篇三:微生物实验3之革兰氏染色
华中科技大学微生物学实验报告
班级: 生物制药1101班日期: 2013 年 3 月 16 日
指导教师:邬建国实验组别: 启明七组
姓名: 何明组员姓名: 张玉涛、王远馨
实验名称: 革兰氏染色
一、实验目的
1.学习并掌握革兰氏染色的方法。

2.简单进行样品的革兰氏染色辨别样品中细菌类别
二、实验原理
1.革兰氏染色法是细菌学中广泛使用的一种鉴别染色法,细菌先经碱性染料结晶
紫染色,再经碘液媒染后,用酒精脱色,在一定条件下有的细菌紫色不被脱去,有的可被脱去,因此可把细菌分为两大类,前者叫做革兰氏阳性菌(G+),后者为革兰氏阴性菌(G-)。

2为观察方便,脱色后再用一种红色染料,如碱性番红等进行复染。

阳性菌仍带
紫色,阴性菌则被染上红色。

有芽孢的杆菌和绝大多数球菌,以及所有的放线菌
和真菌都成革兰氏正反应;弧菌,螺旋体和大多数致病性的无芽孢杆菌都成负反
应。

3.革兰式阳性菌和革兰氏阴性菌在化学组成和生理性质上有很多差别,染色反应
不一样,染色与细菌细胞壁的化学组成及结构有关。

4.阳性菌菌体等电点较阴性菌低,在相同pH条件下染色,阳性菌吸附碱性染

较多,因此不易脱去,阴性菌则相反。

三、实验材料
菌种:大肠杆菌、金黄色葡萄球菌;检测样品:含活菌酸奶
染料:草酸铵结晶紫液、路哥氏碘液、95%乙醇、番红液
其他:显微镜、载玻片、接种环、酒精灯、无菌生理盐水、香柏油、二甲苯
四、实验方法
(一)涂片?干燥?固定?草酸铵结晶紫染色(1min)?水洗?路哥氏碘液媒染(1min)?水洗?95%乙醇脱色(30s)?水洗?番红复染(5min)?水洗?干燥?镜检。

关键点:1.严格掌握乙醇脱色程度,如脱色过度,则阳性菌被误染为阴性菌;
而脱色不够时,阴性菌被误染为阳性菌;2.菌龄也影响染色结果,如阳性菌培养时间很长,或已死亡及部分自行溶解了,都常呈阴性反应。

(二)黑曲霉菌属于真菌,细胞较大,可用水片进行观察,,先在载玻片上滴一滴水,接种,盖上载玻片,即可拿到显微镜下观察.
五、实验结果与分析
1.对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌分别进行革兰氏染色(拍照,注明放大倍数)
大肠杆菌放大倍数40x 金黄色葡萄球菌,放大倍数100x,油浴
2.对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌混合涂片进行革兰氏染色(拍照,注明放大倍数)
3.酸奶中乳酸菌的革兰氏染色(拍照,注明放大倍数)
4.黑曲霉菌水片观察
六、思考题
1.你的实验结果与课本中所述是否一致,如果不一致,试分析原因。

答:金黄色葡萄球菌的实验结果与课本描述基本相似,但是用显微镜观察时没有发现大肠杆菌,原因可能是:
?接种时培养基已被大面积划花,菌种很少甚至没有,我们取出的可能只是琼脂;?固定时加热过快,大肠杆菌结构被破坏或冲洗过猛,可能在冲洗时被水冲走,导致最终没有观察到理想结果。

酸奶中乳酸菌实验,理论上应有至少5种乳酸菌,但是实验结果只有两种,可能原因是所选视野不合适,高倍镜下观察到的细胞数目有限,或者是固定过热,使样本被破坏。

2.当你对一株未知菌进行革兰氏染色时,怎样才能确保你的操作正确,结果可靠,如酸奶中乳酸菌的染色。

答:首先需要用碱性染料染色,染色后再水洗,接着脱色,最
后用酸性染料染色。

七、实验感悟
1.试验过程中操作一定要小心谨慎,既要把握好染色的时间长短,因为过长与过短都不利于观察,又要吃透原理,这样才不会在实验中出现大的错误;
2. 灭菌过程中一定不要漏掉某些必需的灭菌操作,要时刻注意接种的菌种不恩能够被其它杂菌污染,所以接种的试管口要经常对着酒精灯消毒,并且双手在接种前也要涂抹酒精消毒;
3.染色脱色后用显微镜能观察到不同的菌落有不一样的颜色和形貌,要善于思考为什么不同种类的细菌要用不同的染色剂,哪些类型的可以用同一种,善于归纳总结,这样有助于自身基本实验素质的提高。

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