抗核小体抗体、抗C1q抗体和抗双链DNA抗体在狼疮肾炎诊断中的意义

抗核小体抗体、抗C1q抗体和抗双链DNA抗体在狼疮肾炎
诊断中的意义
尹芳蕊;庞春艳;吕凤凤;张文兰;赵剑波;王永福
【摘要】Objective:To investigate the clinical and laboratory characteristics of lupus nephritis(LN) patients by detecting the anti-nucleosome antibodies, anti-C1q antibodies and anti-double stranded antibodies(anti-ds DNA), and to clarify the risk factors of LN in the patients with systemic lupus erythematosus(SLE),and the significance of three kinds of antibodies in diagnosis of LN.Methods:A total of 120 SLE patients were selected and divided into LN group(n=60) and non-LN group(n=60).The ANAS data of 120 patients were retrospectively analyzed,the levels of anti-C1q antibodies were measured.The clinical symptoms and laboratory data of the patients with positive anti-dsDNA,-nucleosome and-C1q antibodies (3-pos group)and negative three kinds of antibodies(non 3-pos group) were analyzed in LN group.Results:The positive rate of anti-C1q antibody of the patients in LN group (40.00%) was higher than that in non-LN group (21.67%) (χ2=4.728, P=0.03).The positi ve rate of anti-dsDNA antibody in LN group was 66.67%, and it was 46.67% in non-LN group;the positive rates of the patients had significant difference between two groups
(χ2=4.887, P=0.027).The positive rate of anti-nucleosome antibody in LN group was 58.33%, and it was 40.00% in non-LN group;the positive rates of the patients had significant difference between two groups (χ2=4.034,
P=0.045).The positive rates of U1-snRNP, SmD1 and other antibodies Jo-1,
SSA/Ro60kD, SSA/Ro52kD, SSB, ScL-70, CENP-B,and P0 had no significant differences between two groups(P>0.05).The levels of C3 and C4 and hemoglobinin of the patients in 3-pos group were higher than those innon 3-pos group (P<0.05);the age,the levels of immunoglobulin protein and C-reactive protein (CRP), and erythrocyte sedimentation rate (ESR), white blood cell (WBC) and platelet had no statistically significant differences between 3-pos and non 3-pos groups(P>0.05).The clinical symptoms were not statistically significant in 3-pos and non 3-pos groups
(P>0.05).Conclusion:The anti-nucleosome, anti-C1q and anti-dsDNA antibodies are the risk factors of SLE complicated with LN;the positive antibodies can improve the diagnostic rate of LN.The 3-pos patients have more severe damage in complements and blood system with higher renal disease activities.%目的:通过抗核小体抗体、抗C1q抗体和抗双链DNA(dsDNA)抗体检测,观察3种抗体阳性的狼疮肾炎(LN) 患者实验室检查和临床特征,阐明系统性红斑狼疮(SLE)并发LN的危险因素及3种抗体在LN诊断中的意义.方法:选择SLE患者120例,其中LN组60例,非LN组60例,回顾性分析2组患者抗核抗体谱及抗C1q抗体的差异;比较LN组患者抗核小体抗体、抗C1q抗体和抗dsDNA抗体3种抗体阳性的LN患者(三阳性LN组)和非抗体阳性的LN患者(非三阳性LN 组)的临床表现及实验室检查的差异.结果:LN组患者抗C1q抗体阳性率为40.00%,非LN组患者抗C1q抗体阳性率为21.67%,2组患者抗C1q抗体阳性率比较差异有统计学意义(χ2=4.728,P=0.03);LN组患者抗dsDNA抗体阳性率为66.67%,非LN组患者抗dsDNA抗体阳性率为46.67%,2组患者抗dsDNA抗体阳性率比较差异有统计学意义(χ2=4.887,P=0.027);LN组患者抗核小体抗体阳性率为58.33%,非LN组患者抗核小体抗体阳性率为40.00%,2组患者抗核小体抗体阳性率比较差
异有统计学意义(χ2=4.034,P=0.045);其余抗体U1-snRNP、SmD1、Jo-1、SSA/Ro60kD、SSA/Ro52kD、SSB、scl-70、CENP-B和P0抗体阳性率组间比较差异均无统计学意义(P>0.05).三阳性LN组与非三阳性LN组患者年龄及免疫球蛋白、C反应蛋白(CRP)、血沉、白细胞和血小板检测结果比较差异均无统计学意义(P>0.05),三阳性LN组患者补体C3、补体C4和血红蛋白水平较非三阳性LN 组降低(P<0.05).三阳性LN组和非三阳性LN组患者不同临床症状发生率比较差异无统计学意义(P>0.05). 结论:抗核小体抗体、抗C1q抗体和抗dsDNA抗体是SLE 并发LN的危险因素,三抗体阳性可提高LN的诊断率,三阳性LN组患者补体和血液系统方面损害更严重,肾疾病活动度更高.
【期刊名称】《吉林大学学报（医学版）》
【年(卷),期】2017(043)004
【总页数】5页(P757-761)
【关键词】抗C1q抗体;抗双链DNA抗体;抗核小体抗体;狼疮肾炎
【作者】尹芳蕊;庞春艳;吕凤凤;张文兰;赵剑波;王永福
【作者单位】包头医学院第一附属医院风湿免疫科包头医学院风湿免疫研究所,内蒙古包头014010;内蒙古自治区自体免疫学重点实验室,内蒙古包头014010;包头医学院第一附属医院风湿免疫科包头医学院风湿免疫研究所,内蒙古包头014010;内蒙古自治区自体免疫学重点实验室,内蒙古包头014010;包头医学院第一附属医院风湿免疫科包头医学院风湿免疫研究所,内蒙古包头014010;内蒙古自治区自体免疫学重点实验室,内蒙古包头014010;包头医学院第一附属医院风湿免疫科包头医学院风湿免疫研究所,内蒙古包头014010;包头医学院第一附属医院风湿免疫科包头医学院风湿免疫研究所,内蒙古包头014010;包头医学院第一附属医院风湿免
疫科包头医学院风湿免疫研究所,内蒙古包头014010;内蒙古自治区自体免疫学重点实验室,内蒙古包头014010
【正文语种】中文
【中图分类】R593.24;R692.3
系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus，SLE)是一种全身结缔组织的自身免疫性疾病，伴发多种自身抗体阳性和多系统损伤，其中肾脏受累较常见。

研究[1]表明：SLE患者并发狼疮肾炎(lupus nephritis,LN)的概率约为60%,肾脏的受
累程度将直接影响SLE的预后，部分患者发展为终末期肾脏病，最终导致患者死亡，因此早期诊断和治疗尤为关键。

肾组织活检是LN诊断金标准，但其具有操体侵入性，给患者带来巨大痛苦[2]，寻找常规的血清学指标来探讨SLE并发LN的
危险因素，早期诊断和干预LN，将会提升患者的生活质量和生存率。

抗核抗体谱存在于多种自身免疫性疾病中，具有无种属、无器官的特异性，是目前自身免疫性疾病筛查的常规检测，其中抗双链抗体在SLE患者中有较高特异性[3]，同时LN患者体内抗双链DNA(dsDNA)抗体也呈高表达，但抗dsDNA抗体阴性
也会并发LN[4],提示LN的发生有其他因素参与；C1q 是补体经典激活途径中的
重要成分，研究[5-6]表明：C1q 不但可以与C1q 抗体作用，也可与抗-DNA抗体有交叉作用，形成免疫复合物沉积于肾脏，加重SLE 患者的肾脏损害。

因此，寻
找多种自身抗体同时联合检测可以避免单项检测结果出现的漏诊误诊，多种自身抗体在患者体内同时阳性的临床和实验室意义国内外尚无报道。

本研究通过对比内蒙古自治区包头地区SLE和LN患者抗核抗体谱的区别，寻找SLE并发LN的危险因素，同时初步探讨多种自身抗体在LN患者体内同时阳性的临床及实验室意义。

1.1 一般资料选择2013年6月—2015年6月包头医学院第一附属医院风湿免疫科住院的SLE患者120例，分为非LN组和LN组。

其中非LN组60例，男性8
例，女性52例，平均年龄(44.47±9.43)岁，患者均符合1997年美国风湿病协会(American College of Rheumatology,ACR)制定的SLE的分类诊断标准；LN组60例，男性6例，女性54例，平均年龄(45.77±10.80)岁,除满足SLE的诊断标准，还需符合LN诊断标准(以下3项中有1项符合即可入选)：①尿沉渣管型，血红蛋白、红细胞、颗粒或混合管型；②肾组织病理活检诊断为LN；③持续性蛋白尿>0.5 g·24 h-1。

2组患者性别构成和年龄比较差异无统计学意义 (P>0.05)，具有可比性。

1.2 试剂和检测方法抗C1q 抗体检测采用酶联免疫吸附法(试剂盒购自德国ORGENTEC diagnostika GMBH公司)，将样品稀释液进行1∶100的配比，稀释血清，在C1q酶标板上加入稀释血清、质控血清、标准品，每孔加入100 μL，在温室中孵育30 min，洗涤3次; 加入酶标二抗，温室孵育15 min，洗涤3次，加入底物在温室黑暗处孵育15 min，加入终止液，测定波长为450 nm，检测值≥ 10 U·mL-1 为抗C1q 抗体阳性。

抗核抗体谱检测采用线性免疫印迹法，包括抗dsDNA、U1-snRNP、SmD1、Jo-1、SSA/Ro60kD、SSA/Ro52kD、SSB、scl-70、Histone、Nucleosome、CENP-B、P0和Jo-1，其抗体检测试剂盒均购自德国胡曼生化诊断责任公司，检测过程严格按照试剂盒说明书进行，实验结果与印迹膜条带上cut-off质控条带对比，条带显色比cut-off显色深的判定为阳性。

白细胞、血红蛋白和血小板检测采用优利特血常规仪。

血清中CRP、IgA、IgM、IgG、补体C3和补体C4水平采用专用试剂和西门子特种蛋白自动分析仪进行检测, 检测方法为散射速率免疫比浊法，检测过程中所有操作步骤和方法严格按照操作规程和说明书进行。

1.3 统计学分析采用SPSS 17.0统计软件进行统计学分析。

抗体阳性率和患者临床症状发生率以百分率表示，组间比较采用χ2检验；血清中补体C3、补体C4、免疫球蛋白、C反应蛋白(CRP)、血沉、白细胞和血小板水平以表示，组间比较采
用t检验。

以P<0.05为差异有统计学意义。

2.1 2组患者实验室免疫学指标 LN组患者抗C1q抗体、抗dsDNA抗体和抗核小体抗体阳性率分别为40.00%、66.67%和58.33%，而非LN组患者分别为
21.67%、46.67%和40.00%，组间比较差异有统计学意义(χ2=4.728，P=0.03；χ2=4.887；P=0.027，χ2=4.034， P=0.045)。

LN组患者根据上述3种抗体阳
性率分为三阳性LN组(17例)和非三阳性LN组(43例)；其余抗体(U1-snRNP、SmD1、Jo-1、SSA/Ro60kD、SSA/Ro52kD、SSB、scl-70、CENP-B和P0抗体)阳性率组间比较差异均无统计学意义(P>0.05)。

见表1。

2.2 三阳性LN组和非三阳性LN组SLE患者实验室指标三阳性LN组和非三阳性LN组SLE患者年龄及血清中免疫球蛋白、CRP、血沉、白细胞和血小板水平比较差异均无统计学意义(P>0.05)，而三阳性LN组患者补体C3、补体C4和血红蛋
白水平较非三阳性LN组降低(P<0.05)。

见表2。

2.3 三阳性LN组和非三阳性LN组患者的临床症状三阳性LN组和非三阳性LN
组患者的浮肿、发热、关节疼痛、面部红斑、口腔溃疡、光过敏和中枢神经系统损伤等临床症状发生率比较差异均无统计学意义(P>0.05)。

见表3。

SLE是一种多系统、多器官受累的特异性自身免疫性疾病，体内有大量致病性自身抗体和免疫复合物产生，常见于年轻女性，主要病理特征是全身组织慢性损伤[7]。

通过免疫复合物的沉积和多种活性介质的直接作用造成组织和脏器损伤，其中肾脏受累是最初的表现[8-9]。

因此，寻找与LN诊断密切相关的血清学指标非常重要。

本研究结果显示：LN组患者抗C1q抗体、抗dsDNA抗体和抗核小体抗体阳性率均高于非LN组患者，差异有统计学意义，此结论与国内外研究[10-11]一致。

抗dsDNA抗体是SLE高度特异性抗体，与双链DNA形成免疫复合物沉积于肾脏，引起肾损伤，其抗体滴度随疾病的活动或缓解而变化。

核小体是染色体的基本结构单位，本身由中心粒组成，含组蛋白二聚体，抗核小体抗体的靶抗原为核小体复合
物，抗原抗体结合后形成免疫复合物，诱发免疫反应，损伤肾组织，导致LN的发生[12]。

C1q是补体经典途径第一补体成分C1的一个亚基，是补体经典途径激活的始动因素，抗C1q 抗体是针对C1q分子胶原样区的IgG 型自身抗体，其与抗
原结合，刺激机体免疫系统产生更多抗体，研究[13-14]表明：抗C1q抗体与成人LN及其疾病活动度有关联。

血沉、免疫球蛋白(IgA、IgG和IgM)、补体(C3和C4)和CRP是LN患者常见的
实验室检测指标，本研究结果显示：三阳性LN组较非三阳性LN组患者补体C3、补体C4水平降低，差异有统计学意义。

正常情况下机体形成的少量免疫复合物会被补体激活的巨噬细胞吞噬清除，当大量免疫复合物形成并累及到肾脏，经典途径、旁路途径及凝集素途径被激活，补体功能异常，C3、C4大量损失而导致血清水平降低[15]，低血清补体可反映LN患者疾病活动度[16]，3种抗体全阳性的SLE患
者血清补体水平更低，预示其疾病活动度高,肾脏的损伤更严重。

研究[17]表明：
抗C1q抗体和抗dsDNA抗体双阳性患者的肾脏疾病活动性明显高于2种抗体均
阴性或仅抗C1q抗体阳性的患者组，且预后较差，双抗体阳性更能反映SLE患者肾脏疾病的活动度。

本组患者IgG、IgA、IgM、血沉和CRP水平比较差异无统计学意义。

CRP是血清中与风湿性疾病相关的一种急性期反应蛋白，因其与肺炎球
菌菌体的C黏多糖起沉淀反应而得名，在自身免疫性疾病中与血沉一起作为反应
炎性活动度的指标，协助诊断、监测疾病活动度及判断预后，CRP 比血沉更敏感，与炎性关系更密切。

研究[18-19]表明：单纯SLE患者血清CRP水平多正常或轻
度升高，CRP与器官受累无相关性，与本研究结果相一致。

部分LN患者血液系统异常，一方面由于患者体内产生抗红细胞、抗白细胞和抗血小板抗体，破坏血细胞；另一方面由于大量的免疫复合物形成，破坏肾组织致使促红素(EPO)生成减少，造血原料缺乏，三系减少，引起贫血。

但大部分贫血的病理生理机制尚不十分清楚。

本研究结果显示：三阳性LN组患者的血红蛋白水平比非
三阳性LN组患者降低，差异有统计学意义；三阳性LN组患者的白细胞和血小板水平较非三阳性LN组患者降低，但差异无统计学意义。

综上所述，抗核小体抗体、抗C1q抗体和抗dsDNA抗体三者联合检测可提高LN 的检出率，其效果明显优于单项检测，且3种抗体均阳性LN患者在补体和血液系统方面损害更严重，肾疾病活动度更高，本研究结果为LN患者早期诊断和治疗提供了依据。

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