食品肉毒杆菌检测

食品中肉毒杆菌检测--科标检测
肉毒杆菌是一种生长在缺氧环境下的致病菌，全称肉毒梭状杆菌，在罐头食品及密封腌渍食物中具有极强的生存能力，它在繁殖过程中所分泌的肉毒毒素具有极强的毒性，是KCN 毒性的一万倍。

纯化结晶的肉毒毒素1mg 能杀死2亿只小鼠，对人的致死剂量约0.1μg 。

它通过阻断人体神经接头，导致全身麻痹、瘫痪，严重时能引起人呼吸肌麻痹，导致无法呼吸，最终死亡。

目前报道新西兰恒天然浓缩乳清蛋白粉大批量被肉毒杆菌污染，目前报道新西兰恒天然浓缩乳清蛋白粉大批量被肉毒杆菌污染，多家产品被多家产品被卷入其中，科标化工分析检测中心为了我国奶粉质量安全，现开展食品中肉毒杆菌检测。

科标化工分析检测中心可依照ISO 、ASTM 、DIN 、GB 、SN 等标准完成食品、微生物、饲料、药品、纺织品、农业、高分子材料、生物产品、建筑材料以及微生物产品理化性能、力学性能、电气性能等测试。

电气性能等测试。

中心通过了中国国家认证认可监督管理委员会和中国合格中心通过了中国国家认证认可监督管理委员会和中国合格评定国家认可委员会的二合一（CMA 、CNAS ）实验室认证认可，能出具权威的第三方检测报告。

食品中肉毒杆菌检测(PCR 检测方法)
一、实验原理
科标化工分析检测中心结合国标GB/T4789.12-2003食品中卫生微生物学检验肉毒杆菌及内毒素检验和SN/T 2525-2010食品中肉毒杆菌的PCR 检测方法对食品中肉毒杆菌进行检验。

将样品经增菌后划平板分离单菌落，挑取可疑菌落到胰蛋白胨葡萄糖酵母浸膏肉汤(TPGY)培养基培养，培养基培养，对培养物用对培养物用DNA 提取试剂盒抽提DNA ，进行PCR 扩增，用琼脂糖凝胶电泳检验PCR 产物中是否含有肉毒杆菌的的特征条带，从而对食品中是否污染肉毒杆菌进行快速检测。

二、仪器和试剂
Heraeus Multifuge X1R Bio-RAD 高速台式冷冻离心机，Bio-RADALS1296ALS1296ALS1296PCR PCR 仪器，Tanon-3500凝胶成像分析系统，YQX-Ⅱ厌氧培养箱，恒温水浴锅。

三、试验方法
1、样品的增菌培养
取庖肉培养基2管和TPGY 培养基2管，10min 煮沸10min~15min ~15min （为了排除溶解于培养基中的氧，切勿摇动），迅速冷却。

每15ml 1g 培养基中接种1g~2g ~2g 固体食品或1ml~2ml 液体食品（缓慢地将接种物接入肉汤液面下）。

将样品接种2管庖肉培养基管庖肉培养基（（35±1℃下培养）和2管TPGY 培养基（28下培养）±1℃下培养），均厌氧培养，均厌氧培养5天。

观察培养物的浊度、产气、肉粒的消化和产生的气味。

若有生长继续以下操作，若无生长，则继续培养10天。

2、培养物分离
取2ml 培养液置于无菌试管中，加入等量无菌无水乙醇，混匀，放置1h 。

用接种环取2
环经处理过的培养物接种到厌氧卵黄琼脂上，35±1℃下厌氧培养48h。

挑取可疑菌落接种到TPGY培养基，35±1℃下厌氧培养24h。

3、DNA提取、扩增
取1.4mlTPGY培养物转移到离心管中，13000r/min离心2min，弃去上清液。

沉淀加入500µl生理盐水，震荡重悬30s，13000r/min离心2min，弃去上清液。

沉淀中直接加入50µlDNA 提取液充分混匀，沸水浴10min，13000r/min离心3min，取上清液4µl进行PCR扩增。

扩增的DNA跑琼脂糖凝胶电泳，电泳结果用凝胶成像系统记录。

四、结果判定
阴性对照和空白对照均未出现条带，阳性对照出现预期大小的扩增条带，待测样品出现预期大小的扩增条带则判定为PCR结果阳性，科标化工分析检测中心报告“检出某型
（A,B,E,F）肉毒杆菌”。

待测样品未出现预期大小的扩增条带则判定为PCR结果为阴性，科标化工分析检测中心报告“未检出某型（A,B,E,F）肉毒杆菌”。

附图
1、PCR扩增仪
2、凝胶成像系统
3、厌氧培养箱
4、PCR扩增图谱。