六六六、滴滴涕残留量的测定——气相色谱法

色谱分离分析方法测定粮食中的六六六、滴滴涕残留量
一、气相色谱分离分析方法
1、目的：（1）熟悉粮食样品中六六六、滴滴涕提取方法
（2）掌握气相色谱法测定六六六、滴滴涕的原理和方法
2、原理：利用电子捕获检测器对于负电极强的化合物具有较高的灵敏度这一特点，可分别测出微量的六六六和滴滴涕，也可同时分别测定不同异构体和代谢物。

出峰顺序为α-666，β-666，γ-666，δ-666，р,р′-DDE，ο,р′DDT，р,р′-DDD，р,р′-DDT。

六六六、滴滴涕及异构体或代谢物含量按下式计算
X=[A1×1000]／[m1(V2／V1)×1000]
式中X—样品中六六六、滴滴涕及其异构体或代谢物的单一含量，㎎/㎏；
A1—被测定用样液中六六六或滴滴涕及其异构体或代谢物的单一含量，µg；
V1—样品净化液体积，ml；
V2—样液进样体积，µL；
m1—样品质量，g。

结果的表述报告取平行测定的算术平均值的两位有效数字。

3、仪器及试剂：组织捣碎机、电动振荡器、旋转浓缩蒸发器、吹氮浓缩器、具有电子捕获检测器（ECD）的GC①
丙酮、正己烷、石油醚（沸程30~60℃）、笨、硫酸、无水硫酸钠、20g/L H2SO4(aq)、六六六、滴滴涕标准溶液②，六六六、滴滴涕标准使用液③
使用的试剂一般为分析纯，有机溶剂需经重蒸馏。

4、步骤及记录
（1）提取：称取约200g具有代表性的样品（适用于生的计烹调加工过的蔬菜、水果或谷类、豆类、肉类、蛋类），加适量水于捣碎机捣碎，混匀。

称取匀浆2.00~5.00g于50ml 具塞锥形瓶中，加10~15ml丙酮，在振荡器上振荡30min，过滤于100ml分液漏斗中，残渣用丙酮洗涤4次，每次4ml，用少许丙酮洗涤漏斗和滤纸，合并滤液，加入20ml石油醚，摇动数次，放气。

振荡1min，然后加入20ml 20g/L NaSO4(aq)，振摇1min静置分层，弃去下层水溶液。

用滤纸擦干分液漏斗颈内外的水，然后将石油醚液经盛有约10g无水硫酸钠的漏斗缓缓放出，滤入50ml三角瓶中，再以少量石油醚分三次洗涤原分液漏斗、滤纸和漏斗，洗液并入滤液中，将石油醚浓缩，移入10ml具塞试管中，定容至5.0ml或10.0ml。

（2）、净化：将5.0ml提取液加0.50ml浓硫酸，盖上试管塞振摇数次后，打开塞子放气，然后振摇30s，于1600r/min离心15min，上层清液供气相色谱法分析用。

（3）、测量：电子捕获检测器的线性范围窄，为了便于定量，选择样品进样量使之适合各组分的线性范围。

根据样品中六六六、滴滴涕存在形式，相应的绘制各组分的标准曲线，从而计算出样品中的含量。

5、注意事项
①气相色谱参考条件：色谱柱为玻璃柱，内装涂以OV-17(15g/L)和QF-1(20g/L)的混合固定液的80~100目硅藻土，NL电子捕获检测器内径3~4㎐长1.2~2m 气化室温度215℃色谱柱温度195℃检测器温度225℃
载气N2流速90ml/min 纸速0.5㎑/min
②六六六、滴滴涕标准溶液的配制：准确称取α-666、β-666、γ-666、δ-666、р,р′-DDE、ο,р′DDT、р,р′-DDD、р,р′-DDT各10.0㎎溶于苯，分别移入100ml 容量瓶中，加苯至刻度并摇匀，每ml含农药100.0µg，作为储备溶液存于冰箱中。

③六六六、滴滴涕标准使用液：将上述标准储备液用己烷稀释至适宜浓度，一般为
0.01µg/ml。

二、薄层色谱分离分析方法
1、目的：（1）熟悉薄层色谱法的操作程序；
（2）掌握薄层色谱法测定六六六、滴滴涕残留量的原理方法。

2、原理：样品中六六六、滴滴涕经有机溶液提取并经硫酸处理，除去干扰物质，浓缩，点样展开后，用硝酸银显色，经紫外线照射生成棕黑色斑点，与标准比较定量。

X=[A1×1000]／[m（V2／V1）×1000]
式中X——样品中六六六、滴滴涕及其异构体或代谢物的单一含量，㎎/㎏；
A1——被测定用样液中六六六或滴滴涕及其异构体或代谢物的单一含量，µg；
V1——样品净化液体积，ml；
V2——样液进样体积，µL；
m——样品质量，g。

结果的表述报告取平行测定的算术平均值的两位有效数字。

3、仪器及体积：薄层板涂布器、玻璃板（5㎑×20㎑）、展开槽（长25㎑，宽6㎑，高4㎑）、玻璃喷雾器、紫外线杀菌灯15W、微量注射器或血色素吸管、氧化铝G（薄层色谱用）
10g/LAgNO3（aq）、AgNO3显色液①、六六六、滴滴涕标准使用液②。

提取和净化所用仪器和试同气相色谱法。

4、步骤及记录：
（1）提取：同气相色谱法。

（2）净化：将10ml提取液浓缩至1ml，加0.1ml浓H2SO4，盖上试管塞振摇数次，打开塞子放气，再振摇0.5min，于1600r/min离心15min，上层清液供薄层色谱分析。

（3）薄层板的制备：称取氧化铝4.5g，加1mlAgNO3(aq)及6mlH20，研磨至糊状，立即涂在3块薄层板上，涂层厚度0.25㎐，于100℃烘0.5h，置于干燥器中，避光保存。

（4）点样：离薄层板底端2㎑处，用针划一标记。

在薄层板上点1~10µL样液和六六六、滴滴涕标准溶液，一块板可点3~4个。

中间点标准溶液，两边点样品溶液。

也可用滤纸移样法点样。

（5）展开③：在展开槽中预先倒入10ml丙酮-己烷（1+99）或丙酮-石油醚（1+99）。

将经过点样的薄层板放入槽内，当溶剂前沿距离原点10~12㎑时取出，自然挥发干。

（6）显色④：开后的薄层板喷以10mlAgNO3显色液，干燥后距紫外灯8㎑处照10~20min，六六六、滴滴涕等全部显现棕黑斑点。

（7）数据记录与处理。

5、注意事项：
①AgNO3显色液的配制：称取AgNO30.050g溶于数滴H2O中，加苯氧乙醇10ml，加
30%（体积分数）H2O2（aq）10µL，混合后储于棕色瓶中，放冰箱内保存。

②六六六、滴滴涕标准使用液的配制：各吸取六六六、滴滴涕标准溶液2.0ml，分别
移入10ml容量瓶中，各加苯至刻度，混匀。

每ml含农药20µg。

③依比移值大小，斑点出现的顺序为р,р′-DDE，ο,р′DDT，р,р′-DDT，α
-666，р,р′-DDD，γ-666，β-666，δ-666。

④食品中六六六残留量以α-666、β-666、γ-666、δ-666四种异构体总和计，滴滴
涕残留量以р,р′-DDE，ο,р′DDT，р,р′-DDD，р,р′-DDT的总和计。