关于高效液相色谱法测定急支滴丸中柚皮苷的含量

关于高效液相色谱法测定急支滴丸中
柚皮苷的含量
【摘要】目的建立急支滴丸中枳壳主要成分柚皮苷含量的测定方法。

方法
采用高效液相色谱法，Kromasil C18 (4.6 mm×200 mm，5 μm)色谱柱，以甲醇-1%醋酸溶液(40∶60)为流动相，流速为1.0 mL/min，检测波长为283 nm。

结果柚皮苷在0.07～0.35 μg之间具有良好的线性关系，r＝0.999 8，精密度试验RSD
＝0.3%，稳定性试验RSD＝2.3%，重复性试验RSD＝1.29%，平均回收率为98.9%。

结论该方法精确度、回收率高，稳定性、重复性好。

【关键词】急支滴丸；高效液相色谱法；柚皮苷；含量测定
Content Determination of Naringin in Jizhi Droppills by HPLC BAI Qing-yunJiangxi Yichun College， Yichun 336000， China Abstract：Objective To establish HPLC method for the determination of naringin in Jizhi droppills. Methods Kromasil C18 (4.6 mm×200 mm， 5 μm) was used. The mobile phase was consisted of acetonitrile- 1% acetate solution (40∶60). The flow rate was 1.0 mL/min. The UV detection wavelength was at 283 nm. Results The linear range for naringin was 0.07～0.35 μg， r ＝0.999 8. The RSD of precision test was 0.3%. The RSD of stability test was 2.3%. The RSD of repeatability test was 1.29%. The average recovery was 98.9%. Conclusion The method of precision and recovery was high，
and stability and repeatability was good.
Key words：Jizhi droppills；HPLC；naringin；content determination
急支滴丸是由急支糖浆改变剂型而来。

急支糖浆为《中华人民共和国药典》所载成方，由四季青、鱼腥草、金荞麦、枳壳等组成，临床用于急性支气管炎、感冒咳嗽、夜间阵发性咳喘、慢性支气管炎急性发作以及咳痰不爽等症。

为了控制改变剂型后的质量，我们采用高效液相色谱法对其主要成分柚皮苷进行了含量测定，现报道如下。

1 仪器与试药
Agilent 1100 Series型高效液相色谱仪，二极管阵列紫外检测器(德国产)，电子天平。

甲醇为色谱纯，醋酸为分析纯。

急支滴丸(黑龙江中医药研究院制剂室提供)，柚皮苷对照品(中国药品生物制品检定所提供，批号110722-200309，供含量测定用，纯度为99.22%)。

2 方法与结果
2.1 色谱条件及系统适用性试验
色谱柱：Kromasil C18(4.6 mm×200 mm，5 μm)，以甲醇-1%醋酸溶液(40∶60)为流动相，流速为1.0 mL/min，检测波长为283 nm，理论塔板数按柚皮苷峰计算应不低于3 000[1]。

色谱图见图1。

2.2 对照品溶液的制备
精密称定适量柚皮苷对照品，加甲醇制成35 μg/mL溶液即得。

2.3 供试品溶液的制备
将急支滴丸研成粉末，精密称定0.170 0 g，置于50 mL容量瓶中，加稀乙醇至刻度，摇匀，3 000 r/min离心，取上清液即得。

2.4 阴性对照品溶液的制备
按“2.3”项下方法制备缺枳壳的阴性对照品溶液。

2.5 标准曲线绘制
取柚皮苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成35 μg/mL的溶液。

分别精密吸取2、4、6、8、10 μL，按“2.1”项下色谱条件，注入液相色谱仪测定。

以进样量为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线，得线性回归方程：Y＝610.714 2X＋5.150 0，r＝0.999 8。

结果表明，柚皮苷在0.07～0.35 μg范围内与峰面积积分值线性关系良好。

2.6 精密度试验
精密吸取对照品溶液5 μL，按“2.1”项下色谱条件进样测定，连续5次测定峰面积积分值。

结果RSD＝0.3%，表明本方法精密度良好。

2.7 稳定性试验
精密称取急支滴丸0.170 3 g，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件设定时间进样5次，每次精密进样10 μL。

结果RSD＝
2.3%，表明供试品溶液在24 h内稳定。

2.8 重复性试验
分别精密称取同一批号急支滴丸5份，按“2.3”项下方法依法制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件进样测定，每份连续进样2次。

结果RSD＝
1.29%，表明重复性良好。

2.9 加样回收率试验
分别精密称取同一批号急支滴丸5份，每份约0.170 0 g，精密称定，分别加入柚皮苷对照品0.064 2 mg，混匀后，按照“2.3”项下方法制备供试品溶液溶液，按“2.1”项下色谱条件进样测定，结果见表1。

5份供试品的平均回收率为98.9%，SX＝1.753 5，RSD＝1.8%。

表1 加样回收率试验结果（略）
2.10 样品测定
取本品10批，按照“2.3”项下方法制备溶液，按“2.1”项下色谱条件进样测定，结果见表2。

表2 柚皮苷含量测定结果（略）
3 讨论
流动相系统参照文献[1-2]。

选择几种不同比例的溶剂体系：乙腈-水-磷酸、甲醇-1%醋酸溶液、甲醇-水、甲醇-水-醋酸，根据分离情况，最终选择甲醇-1%醋酸溶液(40∶60)为流动相。

根据供试品测定结果，10批供试品中柚皮苷含量的平均值为5.198 9 mg/g，考虑到投料药材不同及工艺的波动，按2005年版《中华人民共和国药典》(一部)规定，枳壳中柚皮苷含量不得低于4.0%，以此限度计算，制剂中柚皮苷含量应按降幅20%计为本品限定值，则其含量应不低于4.159 1 mg/g，按每丸0.05 g计算，则每丸含枳壳以柚皮苷计应不低于0.2 mg。

本试验为急支滴丸质量标准提供了可行的量化指标。

【参考文献】
1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[S].北京：化学工业出版社，2005.155.
[2] 马玲，陆宇，赵杰.高效液相色谱测定康儿灵颗粒中柚皮苷的含量[J].时珍国医国药，2005，16(5)：383－384.。