七年级下册生物期末试卷及答案

实验一大孔吸附树脂分离技术在生物制药中的应用（对应教材8.4）一、目的要求⑴了解黄酮类等化合物的特性；⑵掌握黄酮类药物的提取分离技术与方法；⑶掌握大孔吸附树脂分离黄酮类化合物的方法；⑷掌握黄酮类药物制备工艺。

二、实验原理大孔吸附树脂（macroporous absorption resin）属于功能高分子材料，是近30余年来发展起来的一类有机高聚物吸附剂，是吸附树脂的一种，由聚合单体和交联剂、致孔剂、分散剂等添加剂经聚合反应制备而成。

聚合物形成后，致孔剂被除去，在树脂中留下了大大小小、形状各异、互相贯通的孔穴。

因此大孔吸附树脂在干燥状态下其内部具有较高的孔隙率，且孔径较大，在100～1000nm 之间，故称为大孔吸附树脂。

大孔树脂的表面积较大、交换速度较快、机械强度高、抗污染能力强、热稳定好，在水溶液和非水溶液中都能使用。

大孔吸附树脂具有很好的吸附性能，它理化性质稳定，不溶于酸、碱及有机溶媒，对有机物选择性较好，不受无机盐类及强离子低分子化合物存在的影响，可以通过物理吸附从水溶液中有选择地吸附有机物质。

大孔树脂是吸附性和筛选性原理相结合的分离材料，基于此原理，有机化合物根据吸附力的不同及分子量的大小，在大孔吸附树脂上经一定的溶剂洗脱而分开。

由于大孔吸附树脂的固有特性，它能富集、分离不同母核结构的药物，可用于单一或复方的分离与纯化。

但大孔吸附树脂型号很多，性能用途各异，而中药成分又极其复杂，尤其是复方中药，因此必须根据功能主治明确其有效成分的类别和性质，根据“相似相溶”的原则，即一般非极性吸附剂适用于从极性溶液(如水)中吸附非极性有机物；而高极性吸附剂适用于从非极性溶液中吸附极性溶质；中等极性吸附剂，不但能够从非水介质中吸附极性物质，同时它们具有一定的疏水性，所以也能从极性溶液中吸附非极性物质。

三、实验器材试剂：大孔吸附树脂D101，乙醇，白头翁，正丁醇，醋酸，乙醚，蒸馏水，丙酮，活性炭等仪器：烧杯，漏斗，三角烧瓶，索氏提取器，电子天平，恒温水浴锅，硅胶，色谱柱，待回流液1份回流四、实验步骤1.大孔吸附树脂的预处理取100g D101型大孔吸附树脂，于500ml索氏提取器中用150ml乙醇回流3h，待回流液1份加3份水无浑浊时，取出树脂沥干乙醇，放入蒸馏水中，浸泡待用。

2.皂苷的提取去粉碎后的白头翁药材粗粉5g，加入20ml工业酒精回流1h左右，过滤，浓缩至5-10ml，活性炭脱色过滤（可省略），5ml乙醚沉淀，过滤，沉淀用少许水溶解，上柱。

3.色谱分离取一玻璃柱，检查柱子，湿法装入10-12g处理好的大孔吸附树脂，上端加入少许棉花，去总皂苷液上柱，用分别用30ml水、20ml 20%乙醇、20ml 50%乙醇、30ml 95%乙醇洗脱。

收集各洗脱液。

各洗脱液于水浴加热浓缩至1ml左右点样用。

4.薄层色谱鉴定展开剂：正丁醇-醋酸-水（4:1:1）；显色：10%硫酸乙醇105℃显色。

注意事项：配制展开剂时要充分摇匀；加乙醚时边搅拌边加，是沉淀完全。

五、结果与分析记录实验条件、现象、图谱、斑点颜色、各试剂用量等。

思考题：1.大孔吸附树脂法提取分离皂苷的原理是什么？有何特点？2.为什么要进行树脂的预处理？实验二银杏中生物活性成分黄酮的提取和测定（对应教材8.7）一、目的要求⑴掌握银杏黄酮提取制备原理和方法；⑵掌握银杏黄酮性质测定方法；⑶掌握银杏黄酮提取制备工艺。

二、实验原理（略）通过实验，学生分析总结。

三、实验器材试剂：银杏叶，芸香叶苷，亚硝酸钠，硝酸铝，氢氧化钠等仪器：紫外分光光度计，粉碎机，烘箱，电子天平，恒温水浴锅，搅拌器，冷凝管，温度计，真空泵，容量瓶等四、实验步骤1.银杏黄酮提取（1）银杏叶干燥，粉碎，筛分，精确称取20目的叶片10g。

（2）将其和35ml 70%乙醇加入到100ml圆底烧瓶50-70℃回流1-2h。

（3）将粗提取液过滤、抽滤，再用70%乙醇定容至50ml。

（4）定容液中黄酮类化合物用紫外分光光度计测定2.银杏黄酮的测定（1）标准溶液的配制精确称取芸香叶苷5mg，臵于50ml容量瓶中，加入适量60%乙醇，在水浴上加热溶解，自然冷却，用60%乙醇稀释至刻度，摇匀。

（2）标准曲线的制作取10ml 容量瓶6只，分别准确吸取标准液1.0ml、2.0ml、3.0ml、4.0ml、5.0ml、臵于10ml容量瓶中，另一容量瓶中不加标准溶液（配制空白液，作参比）。

然后各加入30%乙醇补至5ml，加入5%亚硝酸钠溶液0.3ml，摇匀，放臵6min，再加10%硝酸铝溶液0.3ml，摇匀，再放臵6min，加4%NaOH溶液4ml，用水稀释到10ml，放臵20min。

在紫外-可见分光光度计上，先取两个2cm比色皿加空白溶液，调零。

取出一个比色皿，分别加入不同浓度的溶液，在波长510nm 处测定吸光度，以黄酮含量为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。

（3）未知液中黄酮含量的测定吸取2ml未知液代替标准溶液，其它步骤同上，测定吸光度。

由未知液的吸光度在标准曲线上查2ml未知液中黄酮的含量。

五、结果与分析思考题：1.回流提取法的原理是什么？2.分光光度发测定的原理是什么？3.如果提取时间延长对最终黄酮的含量测定有什么影响？实验三大黄中蒽醌类化合物的提取分离（对应教材8.11）一、目的要求⑴掌握蒽醌及蒽醌衍生物的理化性质及提取分离方法。

；⑵掌握柱层析等分离方法的操作过程、蒽醌类成分的各类检识方法；⑶了解蒽醌类化合物的提取制备工艺。

二、实验原理大黄种类繁多，优质大黄是蓼科植物掌叶大黄（RheumPalmatum.L）、大黄R.officinale Baill）及唐古特大黄（R.tanguticum Maxiim et Regll）的根茎及根。

蒽醌类化合物在植物体内主要以苷的形式存在，其中有大黄酸-葡萄糖苷；大黄素甲醚-葡萄糖苷；芦荟大黄素-葡萄糖苷；大黄素-葡萄糖苷；大黄酸双葡萄糖苷等。

此外尚含鞣质类成分如葡萄糖没食子鞣质，儿茶鞣质、没食子酸等。

大黄中还含有属于双蒽酮的番泻苷A及番泻苷B。

蒽苷内服后有致泻、清热解毒作用，尤其是大黄酸葡萄糖苷有较强的致泻作用。

游离的羟基蒽醌如大黄酸、大黄素有明显的抗菌活性。

大黄中蒽醌类化合物有结合态和游离态两种形式存在，为得到游离蒽醌类化合物，先酸水解，使蒽醌类化合物以苷元的形式游离出来。

1．大黄酸（Rhein）本品黄色针状结晶（升华法），熔点321～322℃，330℃分解。

几乎不溶于水，溶于碱、乙醇、苯、三氯甲烷、乙醚和石油醚。

2．大黄素（Emodin）本品系橙黄色长结晶（丙酮），C15H10O5，在有机溶媒的溶解度情况如下（25Cw ／w）：四氯化碳0.01％；苯0.041％；三氯甲烷0.071％；乙醚0.14％，几乎不溶于水，溶于乙醇及氢氧化钠，碳酸钠，氨水溶液中。

3．大黄素甲醚（Physcion）砖红色单斜状结晶，溶点207～209℃。

溶于苯、三氯甲烷、甲苯、乙醇、冰醋酸、不溶于乙醚和丙酮。

4．大黄酚（Chrysophanol）本品六方形或单斜形结晶（乙醇或苯），熔点196℃；升华，几乎不溶于水，略溶于冷乙醇，易溶于沸乙醇，溶于苯、三氯甲烷、乙醚及丙酮等。

5．芦荟大黄素（Aloe emodin）橙色针状结晶（甲苯），熔点223～224℃。

易溶于热乙醚。

在乙醚及苯中呈黄色，氨水及硫酸中呈绯红色。

A:大黄酸；B:大黄素；C:芦荟大黄素；D:大黄酚；E:大黄素-6-甲醚 三、实验器材试剂：大黄粗粉，石油醚，甲酸，浓氨水，氢氧化钠，碳酸钠，羧甲基纤维素钠等。

仪器：萃取装臵，色谱缸，点样毛细管，紫外分析仪，电吹风，烘箱，天平，量筒等。

四、实验步骤 1.提取2. pH 梯度萃取（不做，供参考）OO OHOHCOOHOOHOHCH 2OHOO OHOHCH 3OHOOHOHCH 33OO OHOHH 3CABCD E3.薄层色谱鉴别点样：总蒽醌产品及其样品展开剂：石油醚-乙酸乙酯（9:1）显色：可见光下显黄色斑点；紫外灯下显亮黄色斑点；臵层析缸中氨熏蒸10分钟，斑点为红色；氨熏蒸后于365nm下，观察斑点颜色；3%氢氧化钠或者碳酸钠溶液喷后显示红色斑点。

五、结果与分析1.记录实验条件、过程和反应现象。

2.计算各个成分的Rf值。

3.记录图谱和斑点的颜色。

思考题：1.将五种成分按照极性大小顺序排列？2.如何鉴别出各斑点是什么化合物，应如何进行？实验四芦丁的提取与鉴定（对应教材8.3）一、目的要求⑴了解芦丁的提取制备原理；⑵掌握不同的提取分离方法；⑶掌握芦丁的鉴别方法。

二、实验原理槐花米系豆科槐属植物槐树（Sophora japonica L）的花蕾，自古用作止血药物。

治疗吐血，痔疮便血、子宫出血、鼻血等症，所含主要成分为芸香苷，又称芦丁（Rutin，维生素P），其含量高达12～16%，有调节毛细血管渗透性之作用，临床用作毛细血管止血药，如复方芦丁，也作为高血压的辅助治疗药物。

芦丁（芸香苷，rutin），淡黄色针晶，水中结晶者含3分结晶水，C27H30O16·3H2O。

100mmHg和110℃加热12小时后，变为无水物，无水物于25℃变棕，115～7℃软化，214～5℃发泡分解，1g芦丁溶于约300ml冷水，200ml沸水，7ml沸甲醇，溶于吡啶，甲酰胺和碱液，微溶于乙醇、丙酮、乙酸乙酯，不溶于氯仿，二硫化碳、乙醚、苯和石油醚。

O HOOH OOHOH glu rha芦丁O三、实验器材试剂：硼砂，槐花，石灰乳，蒸馏水，正丁醇，醋酸，乙醇，三氯化铝，α-萘酚，浓硫酸，镁粉，盐酸，羧甲基纤维素钠，硅胶等仪器：烧杯，滤纸，纱布，电炉，圆底烧瓶，三角烧瓶，玻璃棒，电子天平，抽滤瓶，布氏漏斗，紫外分析仪，试管，冰箱等四、实验步骤1. 水提取法称取槐花米粗粉（20g），在500ml烧杯中加入水250ml，加热30min，补充失去的水分，用4层纱布趁热过滤，滤渣重复提取一次。

合并滤液，放臵冰箱中析晶，待全部析出后减压抽滤，用去离子水洗芦丁结晶，抽干，放臵空气中自然风干得粗芦丁，称重。

2. 碱提酸沉法称取槐花米粗粉（20g），在500ml烧杯中加入水250ml，硼砂1g[注1]在加热至沸腾时，投入槐花米，继续直火煮沸2~3分钟，在搅拌下小心加入石灰乳，调至8.5~9[注2]保持微沸30分钟，趁热用尼龙布挤过滤，取滤液。

滤液在60~70℃下用浓盐酸调pH至4[注3]，静臵6小时以上析出沉淀。

抽滤，用水洗3-4次，放臵空气中自然风干得粗芦丁，称重。

注1：硼砂因能与芦丁结合，起保护邻二酚羟基，不被氧化破坏的作用，实验证明，提取时加入硼砂，产品质量要好些。

注2：加石灰乳既能达到碱溶解提取芦丁的目的，还可以除去槐花米中大量的粘液质和酸性树脂（形成钙盐沉淀），但pH不能过高和长时间煮沸，因为会导致芦丁的降解。