正交实验法优化黄芩中总黄酮的提取工艺研究

正交实验法优化黄芩中总黄酮的提取工艺研究
发表时间：2020-01-09T09:24:09.513Z 来源：《医师在线》2019年22期作者：于琦[导读] 探讨优化黄芩中总黄酮的提取工艺方法 [摘要]目的：探讨优化黄芩中总黄酮的提取工艺方法。

方法：开展正交实验，以乙醇回流提取法为支撑，将总黄酮获得率设为评估指标，对乙醇浓度、料液比、提取时间3因素规划三个水平进行实验，探析最优的提取工艺。

结果：最优的提取条件为70%乙醇，料液比为1:9，提取时间是每次3h。

结论：乙醇回流提取法适用于黄芩中总黄酮的提取领域。

[关键词]黄芩；总黄酮；正交实验；提取工艺；工艺优化黄芩是唇形科黄芩属的数年生药用草本植物，截至今日，已从黄芩中发现了二百余种化合物，其中有20.0%以上为黄酮类化合物，很多研究指出[1]，黄酮类化合物在黄芩诸多潜在活化物中药用价值最高的成分。

依照黄酮类化合物的理化属性，加强提取工艺方法的研究与优化，是迫切需要研究的问题。

游离的黄酮类化合物和水难溶，故而在提取中多采用醇类进行。

为进一步提升黄芩中总黄酮的提取率，笔
者采用正交实验法，具体内容如下：
1材料和方法
1.1药物和试剂：黄芩、亚硝酸钠、氢氧化钠及乙醇等。

仪器有循环水真空泵、光度计、恒温水浴锅及超声清洗锅。

1.2方法
1.2.1制取对照品溶液与绘制标准曲线
精确测量芦丁对照品，采用70%乙醇溶解并定容后，获得0.2㎎/ml的芦丁标准溶液,准确吸取芦丁标准溶液0、0.4、0.8、1.2、1.6、2.0、2.4ml，分别安置于5ml EP管内，分别加入70%乙醇到2.4ml。

加入0.25ml 5%亚硝酸钠后，摇匀静置5min后，加入08ml 1mol/L氢氧化钠，再加入0.32ml 70%的乙醇，在510nm波长位置检测吸光度，将吸光度(T) 、芦丁浓度(f)分别设为纵。

横坐标，绘制其对应的标准曲线。

1.2.2配制供试品溶液与检测总黄酮的获得率
粉碎黄芩药材，精确量取重量不同的样品，继而依照不同的料液比加入适量无水乙醇，在不同提取时间条件下分别进行加热回流及提取，离心、过滤处理。

将所获得的滤液放置于容量瓶（250ml）内，采用相对应体积分数的乙醇进行定容，摇匀，就可以获得[不知道是什么还是写错了？]样品溶液。

在测定总黄酮提取率过程中，需加入0.25ml 5%亚硝酸钠后，摇匀静置5min后，加入8[是0.8？]ml 1mol/L氢氧化钠，再加入0.32ml 70%的乙醇，在510nm波长位置检测吸光度。

依照标准曲线，能测算出黄芩提取液中总黄酮的获得率。

1.2.3正交实验因素
因为黄芩内的黄酮类化合物难溶水易溶于有机溶剂。

依照提取工艺的现实要求，设定3个主要因素，及料液比、乙醇浓度及提取时间，将总黄酮获得率设为指标开展正交试验。

1.2.4检验性实验
精确称取3份相同批次黄芩粉末，依照以上正交实验最佳优化工艺条件予以加热回流提取处理，依照“1.2.2”中方法操作检测黄芩总黄酮对应的获得率。

2结果
1.2.1芦丁的标准曲线
经回归处理后获得如下标准曲线方程：Y=0.005X+0.0884，相关系数R2=0.9981，这提示芦丁浓度在0~200μg/ml区间内和吸光度值之间有良好的线性相关性（图1）。

图1 芦丁标准曲线图
1.2.2正交试验
对正交实验设计结果和极差整体分析后，发现料液比的极差最大，其次为乙醇浓度，最后是提取时间；极差越大，提示该因素对总黄酮获得率形成的影响越大，所以在应用乙醇回流提取法时，建议将总黄酮的获得率设为评价指标。

对各因素水平分析（表1 K值分析）[2]，发现乙醇浓度因素是K2＞K3＞K1，料液比为K1＞K2＞K13，提取时间为K3＞K2＞K1。

综合以上分析的内容，可以确定最佳提取工艺条件是A2B1C3。

即对应的是70%乙醇，料液比为1:9，提取时间是每次3h。

表1 极差结果分析结果统计。