深度烧伤后增生性瘢痕和瘢痕疙瘩中...

深度烧伤后增生性
瘢痕和瘢痕疙瘩中的神经再生
研究生：宋烨
导师：岑瑛教授
中文摘要
研究目的：探讨人类深度烧伤后增生性瘢痕和瘢痕疙瘩中神经再生的情况，为新的ｌ临床治疗思路提供理论依据。

研究方法：本研究采用随机对照实验，对临床和病理诊断均为增生性瘢痕和瘢痕疙瘩的病人进行研究。

通过抗Ｓ－１００蛋白和抗神经微丝蛋白（ＮＦ）的抗体，将所切取的瘢痕进行免疫组化ＬＳＡＢ法双标染色。

再将标本通过图像采集分析系统进行测定，得到Ｓ－１００和ＮＦ的平均积分光密度值。

实验结果进行方差分析和独立变量的Ｔ检验，以Ｐ＜０．０５作为差异显著性标准。

研究结果：１．增生性瘢痕组与瘢痕疙瘩组各自均随着时间推移，Ｓ－１００和ＮＦ的表达逐渐增加，在３—５月时间段内增长的速率较高，至１８月以后，增生速率逐渐变慢。

２．３—５月时间段和６—１２月时间段相比较，６—１２月时间段和＞１２月时间段相比较，增生性瘢痕组Ｓ一１００和ＮＦ的表达，ｐ＜０．０５，差异有显著性。

瘢痕疙瘩组也存在类似的差异。

３．增生性瘢痕组Ｓ－１００和ＮＦ的表达在各时间段均高于瘢痕疙瘩组。

但在３—５月时问段内二者ｐ＞０．０５，无统计学意义。

在６月及以上时间段内ｐ＜０，０５，差异有显著性。

４．所有瘢痕中，男性与女性Ｓ－１００和ＮＦ的表达在最初的３－６月时间段内几乎是一致的。

但在１２月以后，两组中男性的表达
有高于女性的倾向。

研究结论：１．Ｓ－１００与ＮＦ能准确反映病理性瘢痕中神经再生情况。

２．深度烧伤后增生性瘢痕与瘢痕疙瘩中的神经再生随时间增加而增多，以３—５月最为明显，至１８个月后趋于平稳。

３．深度烧伤后增生性瘢痕和瘢痕疙瘩在不同的时间段各自存在差异。

４，深度烧伤后增生性瘢痕中神经的再生多于瘢痕疙瘩，以５个月后较为明显。

５．不同性别患者神经再生存在差异，其原因不详。

关键词：深度烧伤瘢痕神经再生Ｓ－１００蛋白神经微丝
２
ＴｈｅＮｅｒｖｅＲｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｏｆＨｙｐｅｒｔｒｏｐｈｉｃＳｃａｒｓａｎｄＫｅｌｏｉｄｓａｆｔｅｒＤｅｅｐＢｕｒｎｓ
Ｐｏｓｔｇｒａｄｕａｔｅ：ＳｏｎｇＹｅ
ＡｃａｄｅｍｉｃＳｕｐｅｒｖｉｓｏｒ：Ｐｒｏｆ．ＣｅｕＹｉｎｇ
Ａｂｓｔｒａｃｔ
Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：ＴｏｓｔｕｄｙｔｈｅｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｏｆｎｅｒｖｅｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｏｆｈｕｍａｎｈｙｐｅｒｔｒｏｐｈｉｃｓｃａｒｓａｎｄｋｅｌｏｉｄｓａｆｔｅｒｄｅｅｐｂｕｍｓＳＯａｓｔｏｓｕｐｐｏｒｔｔｈｅｎＣＷｃｌｉｎｉｅａｌｔｒｅａｔｍｅｎｔ．
Ｍｅｔｈｏｄ：Ｆｉｆｔｙ—ｔｈｒｅｅｓａｍｐｌｅｓｔｈａｔｗｅｒｅｄｉａｇｎｏｓｅｄａｓｈｙｐｅｒｔｒｏｐｈｉｃｓｅａｌｓｏｒｋｅｌｏｉｄｓａｆｔｅｒｄｅｅｐｂｕｍｓｂｙｃｌｉｎｉｃａｌａｎｄｐａｔｈｏｌｏｇｉｃｒｅｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎｓ，Ｗｅ
ａｎｄａｎｔｉ—ｎｅｕｒｏｆｉｌａｍｅｎｔ（ＮＦ）ｉｎｔｗｏ—ｌａｂｅｌｕｓｅａｎｔｉ·Ｓ－１００
ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙｔｏｄｅｆｉｎｅｔｈｅｎｅｒｖｅｓｉｎｓｃａｒｓ．Ｔｈｅｎ．ｗｅｍｅａｓｕｒｅｄｔｈｅＭｅａｎＩｎｔｅｇｒａｔｅｄＯｐｔｉｃａｌＤｅｎｓｉｔｙ（ＭＩＯＤ）ｏｆＳ－１００ａｎｄＮＦａｎｄａｎａｌｙｚｅｄｔｈｅｍ．
Ｒｅｓｕｌｔｓ：１．Ｉｎｈｙｐｅｒｔｒｏｐｈｉｃｓｃａｒｓｏｒｋｅｌｏｉｄｓ，ｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＳ－１００ａｎｄＮＦｗａｓｇｒｏｗｉｎｇｇｒａｄｕａｌｌｙ．ＴｈｅｓｐｅｅｄＷａｓｈｉｇｈｄｕｒｉｎｇ３－５ｍｏｔｈｓｐｏｓｔｂｕｒｎｅｄａｎｄｓｌｏｗｅｄｄｏｗｎａｆｔｅｒ１８ｍｏｕｔｈｓｐｏｓｔｂｕｒｎｅｄ．２．ＴｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＳ－１００ａｎｄＮＦｉｎｈｙｐｅ血ｏｐｈｉｃＳＣａｒＳｉｓｍｏｒｅｔｈａｎｔｈａｔｉｎｋｅｌｏｉｄｓ．Ｂｕｔｄｕｒｉｎｇ３－５ｍｏｎｔｈｓｐｏｓｔｂｕｒｎｅｄ，ｔｈｅｒｅｗａｓｎｏｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ（Ｐ＞ｏ．０５）．Ｗｈｉｌｅａｆｔｅｒ６ｍｏｎｔｈｓｐｏｓｔｂｕｒｎｅｄ，ｔｈｅｒｅｗａｓｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ（Ｐ＜０，０５）．３ＴｏｈｙｐｅｒｔｒｏｐｈｉｃＳＣａｒＳａｎｄｋｅｌｏｉｄｓ，ｔｈｅＩＯＤｉｎ３－５ｍｏｎｔｈｓ，６－１２ｍｏｎｔｈｓａｎｄ＞１２ｍｏｎｔｈｓａｒｅｄｉｆｆｅｒｅｎｔ．４．ＩｎｈｙｐｅｒｔｒｏｐｈｉｃＳＣａｒＳａｎｄｋｅｌｏｉｄｓ，ｍａｌｅａｎｄｆｅｍａｌｅｈａｄｔｈｅ
ｓａｍｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｄｕｒｉｎｇ３－５ｍｏｎｔｈｓｐｏｓｔｂｕｒｎｅｄ．Ｈｏｗｅｖｅｒ，ａｆｔｅｒ１２ｍｏｎｔｈｓｐｏｓｔｂｕｒｎｅｄ，ｆｏｒｍａｌｅ，ｂｏｔｈｇｒｏｕｐｓｈａｄａｈｉｇｈｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｔｈａｎｆｅｍａｌｅ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：１．Ｓ—１００ａｎｄＮＦａｒｅｇｏｏｄｍａｒｋｅｒｓｔｏｄｅｆｉｎｅｔｈｅｎｅｒｖｅｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｉｎｓｃａｒｓ．２．ＴｈｅｎｅｒｖｅｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｉｎｈｙｐｅｒｔｒｏｐｈｉｃＳＣａｒＳｏｒｋｅｌｏｉｄｓｗａｓｇｒｏｗｎｗｉｔｈｔｉｍｅｓｇｏｉｎｇｏｎ．Ｂｕｔａｆｔｅｒ１８ｍｏｎｔｈｓｐｏｓｔｂｕｒｎｅｄ，ｔｈｅｓｐｅｅｄｓｓｌｏｗｅ，ｄｄｏｗｎ．３．ＴｈｅｎｅｒｖｅｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｉｎｈｙｐｅｒｔｒｏｐｈｉｃＳＣａｒＳｉｓｍｏｒｅｔｈａｎｋｅｌｏｉｄｓ，ｅｓｐｅｃｉａｌｌｙａｆｔｅｒ５ｍｏｎｔｈｓｐｏｓｔｂｕｒｎｅｄ．４．Ｔｏｈｙｐｅｒｔｒｏｐｈｉｃｓｃａｒａｓａｎｄｋｅｌｏｉｄｓ，ｔｈｅＩＯＤｉｎ３－５ｍｏｎｔｈｓ，６－１２ｍｏｎｔｈｓａｎｄ＞１２ｍｏｎｔｈｓａｒｅｄｉｆｆｅｒｅｎｔ．５．ＴｈｅｒｅｉＳｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｂｅｔｗｅｅｎｍａｌｅａｎｄｆｅｍａｌｅｉｎｎｅｒｖｅｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ．Ｈｏｗｅｖｅｒ，ｗｅｄｏｎ’ｔｋｎｏｗｔｈｅｒｅａｓｏｎ，
ＫｅｙＷｏｒｄｓ：ＤｅｅｐＢｕｒｎｓＳｃａｒＮｅｒｖｅＲｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎＳ－１００ＮＦ
４
刖置
深度烧伤，是指深ＩＩ度和ＩＩＩ度烧伤。

深ＩＩ度烧伤伤及真皮乳头层以下，但仍残留部分网状层。

ＩＩＩ度烧伤除表皮、真皮、及皮肤附件全部毁损外，有时可深及脂肪、肌肉甚至骨骼。

在创面愈合过程中，二者均要遗留不同程度的瘢痕…。

瘢痕有多种病理类型，其中增生性瘢痕和瘢痕疙瘩的病人均有较明显的自发性灼痛与奇痒，尤其是在气温较高或病人情绪激动时更为明显ｆ２】。

对于其原因，多数作者认为是瘢痕局部缺氧ｐＩ、炎性因子的释放等ｎ
皮肤内有广泛而致密的感觉神经末梢和感受器ｆ５】。

在深度烧伤中，这些神经末梢和感受器均被毁损。

近年来越来越多的研究表明，创面愈合过程中有神经再生［６】【７１。

而对于神经纤维在增生性瘢痕和瘢痕疙瘩中的再生及分布情况，则极少有人研究和探讨。

本研究采用随机对照试验，通过对上述两种瘢痕进行抗Ｓ－１００（显示神经髓鞘中的Ｓｅｈｗａｎｎ细胞）和抗神经微丝（ＮＦ）（显示轴突）的免疫组化双标染色，探讨深度烧伤后瘢痕中神经再生情况，为新的临床治疗思路提供理论依据。

材料与方法‘
一、标本来源
四川大学华西医院整形烧伤外科２００２年９月至２００３年１月的住院病人中，选取临床诊断为深度烧伤的增生性瘢痕和瘢痕疙瘩病人。

诊断标准见表１。

所有标本均经过华西医院病理中心盲法证实，去除临床诊断与病理诊断不符的标本。

符合要求的标本共５３例，具体情况见表２。

表１深度烧伤的增生性瘢痕和瘢痕疙瘩的临床诊断标准
表２病例资料
二、主要试剂
兔抗人Ｓ－１００蛋白多克隆抗体（１．５ｍｌ工作液），北京中山公司分装美国Ｚｙｍｅｄ公司产品
鼠抗人神经丝蛋白（广谱）单克隆抗体（１．５ｍｌ工作液），北京中山公司分装美国Ｚｙｍｅｄ公司产品
通用型ＳＰ试剂盒：
Ａ．内源性过氧化物酶阻断剂
Ｂ．封闭用正常山羊／兔血清工作液
Ｃ．生物素标记二抗工作液
Ｄ．通用型生物素标记羊抗兔、大鼠、小鼠和豚鼠ＩｇＧ
北京中山公司生产
ｌＯ％中性缓冲福尔马林液、不同浓度酒精、３％Ｈ２０２、蒸馏水、ＰＢＳ液、Ｔｗｅｅｎ２０ＰＢＳ稀释液、底物缓冲液、链亲和素、碱性磷酸酶．抗碱性磷酸酶抗体（ＡＰＡＡＰ）复合物、苏木素、伊红、ＤＡＢ储备液、ＮＢＴ／ＢＣＩＰ、甲基绿、二甲苯等免疫化试剂由四川大学华西病理中心提供。

另：底物缓冲液配制：检测液２．５ｍｌ
Ｔｒｉｓ—Ｈｃｌ２５０Ｉ＿ｔｌ
５ＭＮａｃｌ５０Ｉ．ｔｌ
Ｍｇｃｌ２１２５Ｉ＿ｔｌ
纯水２０７５９ｌ
三、主要仪器与设备
１．免疫组化设备：石蜡切片机、４。

Ｃ冷藏冰箱、３７。

Ｃ恒温培养箱、烤箱、天平、微波炉、普通光学显微镜
２．图像采集处理系统：Ｅ６００研究显微镜，ＳＰＯＴＣＯＯＬＣＣＤ摄像
头，美国Ｎｉｋｏｎ＆Ｓｐｏｔ公司生产
四、实验方法
１．病例分组
瘢痕标本共５３例，按临床和病理诊断，分为增生性瘢痕组和瘢痕疙瘩组，每一组再以形成时间分为３—５月组、６．１２月和＞１２月组。

２．标本采集
在整形手术时，获取被切除的瘢痕，修剪皮下组织，制成ｌｘｌｘ０．３ｃｍ组织块，立即用１０％缓冲福尔马林室温下固定，在２４小时内常规石蜡包埋。

３．ＨＥ染色
３．１石蜡切片脱蜡到水
（１）二甲苯Ｉ１０分钟
（２）二甲苯ＩＩ１０分钟
（３）无水酒精Ｉ１－２分钟
（４）无水酒精ＩＩ１．２分钟
（５）９５％酒精１分钟
（６）８０％酒精１分钟
（７）７０％酒精１分钟
（８）自来水洗１分钟
蒸馏水洗１分钟
３２染色
（１）苏木素染液５．１５分钟
（２）自来水洗３—５分钟
（３）１％盐酸酒精８—１５秒
（４）自来水洗３５分钟
（５）弱碱性水溶液３０一６０秒
（６）自来水洗１０分钟
（７）蒸馏水洗
（８）伊红染液５．１５分钟
（９）自来水洗
（１０）蒸馏水洗１－２次
３．３脱水、透明、封片
（１）７０％酒精１．２分钟
（２）８０％酒精１—２分钟
（３）９５％酒精１分钟
（４）无水酒精Ｉｌ一５分钟
（５）无水酒精Ⅱ１．５分钟
（６）二甲苯Ｉ１—２分钟
（７）二甲苯ＩＩ１０分钟
（８）中性树胶封片
４．免疫组化双标染色
采用ＬＳＡＢ法双标显示瘢痕中的Ｓ－１００（Ｓｃｈｗａｎｎ细胞）和神经微丝（轴突）。

第一抗体为兔抗人Ｓ－１００蛋白多克隆抗体和鼠抗人神经微丝蛋白单克隆抗体，第二抗体为生物素标记的羊抗兔、羊抗鼠ＩｇＧ（通用型）。

设置阴性对照（用ＰＢＳ液代替一抗，其余条件不变），以排除内源性生物素污染所至的非特异性反应，避免出现假阳性。

以小脑组织作为阳性对照。

具体步骤如下：
４．１石蜡切片脱蜡到水
（１）二甲苯５分钟，２次
（２）１００％酒精５分钟，２次
（３）９５％酒精５分钟
（４）７０％酒精２分钟
（５）蒸馏水洗５分钟，２次
４．２（１）３％Ｈ２０２处理室温，１５分钟（３％Ｈ２０２：３０％的Ｈ２０２ｌ蒸馏水９０ｒａｌ）
（２）蒸馏水洗
（３）ＰＢＳ洗，５分钟，２次
４．３１３％『Ｆ常血清处理，室温或３７。

Ｃ，２０分钟
４．４．（１）用滤纸吸去血清，不洗
（２）直接滴加第一种第一抗体（Ｓ．１００），３７＂Ｃ，３０—６０分钟４．５ＰＢＳ洗，５分钟，２次
４．６滴加生物素一第二抗体（１：１５０—２００１，３７。

Ｃ，３０分钟
４．７ＰＢＳ洗，５分钟，２次
４．８滴加链亲和素（链亲和素：生物素结合的过氧化物酶液：ＰＢＳ＝Ｉ：１：１００，应提前３０分钟配制），３７℃，３０分钟
４．９ＰＢＳ洗，５分钟，２次
４．１０显色，镜下观察进行，ＰＢＳ适时终止显色
ＤＡＢ储备液（２５ｍｇ／ｍｌ，ＰＢＳ配制）５０ｕｌ
１ｘＰＢＳ２．５ｍｌ
３％Ｈ２０２（３０％Ｈ２０２）８ｕｌ（Ｏ．８ｕ１）
４．１ｌ显色终止后，用Ｔｗｅｅｎ２０ＰＢＳ稀释液（Ｔｗｅｅｎ２０：ＰＢＳ＝Ｉ：２００），荡洗切片３次，每次２分钟
４．１２滴加第二种第一抗体（ＮＦ）的稀释液（１：１００稀释），３７。

Ｃ，孵育１２０分钟
Ｏ
图５增生性瘢痕（ＨＥ×２００）
Ｆｉｇ．５Ｈｙｐｅｒｔｒｏｐｈｉｃｓｃａｒ（ＨＥＸ２００）
图６瘢痕疙瘩（ＨＥ×２００）
Ｆｉｇ．６Ｋｅｌｏｉｄ（ＨＥ×２００）
６
图７男，５岁，４个月，增生性瘢痕（ＬＳＡＢ×２００）
Ｆｉｇ．７Ｍａｌｅ，５－ｙｅａｒ－ｏｌｄ，４ｍｏｎｔｈｓ，ｈｙｐｅｒｔｒｏｐｈｉｃｓｃａｒ（ＬＳＡＢ×２００）
圈８女，５２岁，４个月，瘢痕疙瘩（ＬＳＡＢ×２００）Ｆｉｇ．７Ｆｅｍａｌｅ，５２一ｙｅａｒ－ｏｌｄ，４ｍｏｎｔｈｓ，ｋｅｌｏｉｄ（ＬＳＡＢ×２００）
７
图９男，４岁，ｌＯ个月，增生性瘢痕（ＬＳＡＢ×２００）
Ｆｉｇ．７Ｍａｌｅ，４－ｙｅａｒ－ｏｌｄ，１０ｍｏｎｔｈｓ，ｈｙｐｅｒｔｒｏｐｈｉｃｓｃａｒ（ＬＳＡＢ×２００）
图１０男，２０岁，１０个月，瘢痕疙瘩（ＬＳＡＢＸ２００）
Ｆｉｇ７Ｍａｌｅ，２０一ｙｅａｒ－ｏｌｄ，１０ｍｏｎｔｈｓ，ｋｅｌｏｉｄ（ＬＳＡＢｘ２００）
８
图１１男，１９岁，１３个月，增生性瘢痕（ＬＳＡＢ×２００）
Ｆｉｇ１１Ｍａｌｅ，１９一ｙｅａｒ－ｏｌｄ，１０３ｍｏｎｔｈｓ，ｈｙｐｅｒｔｒｏｐｈｉｃＳＣａｒ（ＬＳＡＢ×２００）
幽１２女，３２岁，３年．瘢痕疙瘩（ＬＳＡＢＸ２００）Ｆｉｇ．１２，Ｆｅｍａｌｅ，３２－ｙｅａｒ－ｏｌｄ，３ｙｅａｒｓ，ｋｅｌｏｉｄ（ＬＳＡＢ×２００）
９
讨论
一、ｓ一１００与ＮＦ的表达能准确的检测出深度烧伤后增生性瘢痕和瘢痕疙瘩中神经再生的情况及其分布
长期以来，由于使用重金属浸渍等非特异性染色，瘢痕中的神经纤维未能得到很好的显示［９１［１０ｌ。

本实验采用抗Ｓ－１００和抗神经微丝（ＮＦ）的抗体作为标记物，能够很好的显示瘢痕中再生的神经纤维。

Ｓ－１００蛋白是一种酸性蛋白，定位于胞浆和核，呈弥漫性的阳性反应，主要存在于星形细胞、少突胶质细胞、室管膜细胞和外周神经的Ｓｃｈｗａｎｎ细胞中。

本实验中，被标记的Ｓｃｈｗａｎｎ细胞包绕并伴行于神经纤维轴突。

ＮＦ蛋白属中间丝蛋白家族，定位于神经元的胞浆和胞突，广泛存在于各种神经元。

ＮＦ蛋白的多聚体——神经微丝由胞体组装并转运至轴突，其数量与神经纤维的直径大小相关［５ｌ［８１。

本实验中，被标记的ＮＦ存在于轴突内。

我们使用抗Ｓ－１００和抗ＮＦ抗体作为标记物，能够特异性显示病理状态下的神经再生，此方法优于使用非特异性染色的方法。

二、伤后３－５月，增生性瘢痕和瘢痕疙瘩中神经纤维的生长速度快于６个月及其以后的病理性瘢痕
病理性瘢痕中神经的生长在最初的３．５月非常迅速，这与其生长最为旺盛的时间段相吻合。

我们在实验中同时见到，大量血管与神经伴行生长。

这可以解释临床上此期病员的瘢痕红肿、感觉异常的现象。

本实验中，６个月后神经生长的速度开始减慢，与３．５月内的神经生长有明显差别：１８个月后神经的生长曲线渐趋平缓，这时的瘢痕生长也基本上稳定下来。

本实验与Ａｌｔｕｎ等【７】在伤后４月所观察到的结果相一致。

所以，在临床工作中，伤后３．５月是治疗病理性瘢痕，尤其是增生性瘢痕的最佳时期。

而６个月以后的治疗，只是相对有效。

对于６个月以后瘢痕疙瘩增生速度与神经再生不一致的原因，尚待进一步研究。

三、伤后３－５月内，增生性瘢痕和瘢痕疙瘩神经再生的数量无明显差异
在５个月内，增生性瘢痕和瘢痕疙瘩的Ｓ－１００和ＮＦ表达无明显差异。

在ＨＥ染色的光镜下，瘢痕疙瘩也没有典型的漩涡状、结节状胶原纤维。

此期对瘢痕疙瘩的诊断，更多的是依据临床表现。

神经生长没有差异的原因，可能是瘢痕疙瘩中尚无大量胶原基质堆积，以致阻碍神经的再生【４】。

四、伤后６个月，增生性瘢痕中神经的再生开始高于瘕痕疙瘩
伤后６个月，增生性瘢痕的Ｓ－１００和ＮＦ表达逐渐高于瘢痕疙瘩，即增生性瘢痕的神经再生多于瘢痕疙瘩。

这证明皮肤神经系统在烧伤创面愈合和瘢痕重塑过程中起着调节作用。

异常的瘢痕增生也许与神经的缺失存在一定联系。

其原因，可能与皮肤神经所释放的神经肽对创面愈合起促进作用有关【１２】【“１。

Ａｎｓｅｌ的研究认为，神经肽能刺激角化细胞、朗罕氏细胞、肥大细胞和内皮细胞增生。

其中的Ｐ物质（ＳＰ）能直接激活人类真皮微血管内皮细胞（／－ＩＤＭＥＣ），而ＨＤＭＥＣ能高水平的表达重要的支持分子——血管细胞支持分子１（ＶＣＡＭ一１）【１３］。

反之，瘢痕疙瘩中大量异常增生的胶原纤维阻碍了神经和血管再生入真皮中。

五、不同性别患者的神经再生存在差异
伤后３．５月，不同性别患者神经再生的差异不甚明显。

６个月以后，虽然由于不同性别患者Ｓ－１００和ＮＦ的ＩＯＤ值离散程度太大，无法进行统计学分析，我们仍然可以看到，男性患者的神经再生有多于女性患者
的趋势。

不同性别患者神经再生的差异也许可以用基因的多态性解释㈣，但仍不能排除由于样本量偏少所带来的抽样误差。

这个问题尚待进一步的研究证实。

综上所述，本研究从深度烧伤后增生性瘢痕和瘢痕疙瘩中Ｓ－１００和ＮＦ的阳性表达入手，探讨了深度烧伤后不同瘢痕中神经再生的情况，表明了神经再生随时问增加而增多，至一定水平时趋于平缓的倾向，同时发现不同瘢痕中神经再生存在差异，并与创面愈合情况存在一定联系。

除不同性别患者神经再生的差异有待进一步研究外，对于神经对瘢痕中成纤维细胞增生及凋亡的影响，以及神经肽特异性受体及其拮抗剂的研究等等，都有待今后深入研究。

也许这些研究的成果会为新的治疗提供方向。

结论
本研究采用病例对照实验，通过对５３例深度烧伤后增生性瘢痕和瘢痕疙瘩中Ｓ－１００与ＮＦ免疫组化双标染色，得出以下结论：
１．Ｓ－１００与ＮＦ的表达能准确的检测出深度烧伤后增生性瘢痕与瘢痕疙瘩中神经再生的情况及其分布。

２．深度烧伤后增生性瘢痕与瘢痕疙瘩中的神经再生随时间增加而增多，以３．５月最为明显，至１８个月后趋于平稳。

３．伤后３—５月，增生性瘢痕和瘢痕疙瘩神经再生无明显差别。

４．深度烧伤后增生性瘢痕中神经的再生多于瘢痕疙瘩，以６个月后较为明显。

５．不同性别患者神经再生存在差异，其原因不详。

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皮肤烧伤后的感觉恢复
宋烨综述岑瑛审校
皮肤覆盖在人体表面，是具有多种功能的重要器官。

如抵抗外界较轻的机械作用，保护人体免受外来物质及细菌的侵袭，调节体温和水分，以及参与免疫反应”】。

由于皮肤具有丰富的感觉神经网，所以能够向中枢神经系统（ＣＮＳ）传送诸如痛、温、触等多种刺激信号［２１。

皮肤烧伤引起包括感觉神经在内的皮肤损害，而损害的程度取决于烧伤的深度口１。

皮肤感觉的恢复也因此而不同ｎ
一、感觉神经在皮肤内的分布
外周感觉神经元发出一个轴突，轴突为Ｓｃｈｗａｎｎ细胞包绕，其内为轴浆、微管和神经微丝（ＮＦ）。

轴突末端形成神经末梢，广泛分布于人体的各个靶器官和靶细胞，并与其周围结构一起，形成具特异性功能的感觉神经终末装置（感受器）。

（一）游离神经末梢
皮神经的终末部分，在真皮深层和表皮下分支形成宽广的神经丛，再由表皮下神经丛进一步发出细支穿入表皮，反复分支，终止于上皮细胞间，末端多呈小结状，通常不超过颗粒层。

有些神经纤维的末梢在结缔组织中分支成细网。

其功能主要感受痛觉，也可感受温度、触觉、本体感觉和振动觉。

（二）有被囊的感觉神经末梢
１．彩老劲力Ｃ主要分布于皮肤的真皮乳头内，以无毛皮（如手、足掌处的皮肤）居多，感受触觉，其内富含Ｍｅｒｋｅｌ细胞。

２．力‘岩砂力ｔ主要见于手和足掌面及手指和足趾的皮下组织
中，感受臌觉和振动觉。

３．茬男压霹象二经予皮骚粪疫、旋下缝缀及关节蕤绪缔缀绥中。

当周围的结缔组织受牵拉时，刺激该感受器产生神经冲动，属慢适应枫械感受器。

另外，建发有极丰富的神经分搬，是一种最精细的感受器。

来良真皮神经丛中的神经末梢走向毛囊，在皮脂腺导管下方分支，进入毛囊结缔缀织鞘中嘎
二、不湖深度烧伤后的雅觉恢复
（一）ｌ疫烧羲
由于Ｉ度烧伤仅包括表皮角质层、透明层、颗粮层的损伤，未伤及惑懿神经束稽，敖没有感懿的缺失。

在炎藏期局部有疼痛的感觉，２－３天癍状消退后，感擞完全恢复正常【“。

（二）ＩＩ度烧伤
１．浅Ｈ凌浇伤
由于浅ＩＩ度烧伤伤及熬个表皮和部分真皮乳头层，故无论游离神经末糖还悬蠢疆囊熬感觉襻经寒搂均有不鼷程疫豹擐痿。

特别要据窭数是，位于真皮乳头内的触觉小体，可由于受损而引怒触觉的缺失。

在伤君４掏，爵疆蕊察剿魅觉小体发生逐行毪送变。

轻突终末蓄瘫改交，板层细胞内的酶系统随之改变，最后熄板层细胞复合体本身萎缩ｔ”。

在临床上，由于炎症弓｛怒的尉烈疼痛和痛觉敏感，在１～２周后可全部消必。

伤磁１月，除了触懿，其余感觉恢复至正常。

２，漾Ｕ度烧伤
烧侮漂及真皮巍头以下，毽仍残整部分耀状层。

缝大裁分静感懿耪经末梢都受到了损伤。

感觉缺失的稷度和范围都比浅Ⅱ度烧伤明盟。

痿爱１胃，器顼感鬣鹭有不瓣程囊瓣浚复，侄萁溺簸臻显熹予对照缀。

（三）ＩＩＩ度烧伤
全层皮肤被烧伤，表皮、真皮及皮肤附件全部毁损，有时可深及脂肪、肌肉甚至骨骼、内脏器官等。

故神经末梢也是全部毁损了的。

这部分病人，在伤后早期，创面感觉是缺失的。

经手术植皮或上皮自周围健康皮肤长入所愈合的创面，最初也是无感觉的。

随着时间推移，有部分病人会出现不完全且阈值很高的感觉恢复【１］【４】。

需要特别指出的是，在深ＩＩ度和ⅡＩ度烧伤病人中，相当一部分会出现程度不等的瘢痕。

有些瘢痕会自发的出现灼痛与奇痒，在气温较高或病人情绪激动时尤为明显。

而瘢痕对温度、触觉等刺激信号则不甚敏感‘”。

三、神经的再生
有人认为，深度烧伤后神经纤维不能再生，因而感觉的恢复一定是基于皮下的纤维［６】［７１。

但是，最近越来越多的文献显示，在以不同方式愈合的刨面中，均有神经的再生。

早期对于再生｝电经的研究，多数通过重金属浸渍的方法来完成。

但是这些非特异性的染色方法，并不能很好的显示再生神经。

现在通过免疫组化的方法，对蛋白基因产物９．５（ＰＧ９．５）（神经纤维）、Ｓ一１００（Ｓｃｈｗａｎｎ细胞）以及ＮＦ（轴突）进行特异性染色，以显示皮肤中正常与病理状态下的神经［５】［８】［９］。

（一）植皮后的神经再生，研究结果证实，植皮后在皮肤的真皮和表皮中真皮神经丛和感觉神经末梢都有稀疏的再生，但与瘢痕和正常皮肤相比要少一些。

表皮内的游离神经末梢偶可见到，而有被囊的神经末梢和Ｍｅｒｋｅｌ细胞则很罕见
【３】【１
０１。

大多数作者认为，神经会同时从皮片边缘和受区再生入移植物。

神
经是随机再生的，但在表皮和残存的附件附近，再生神经显示出有方向性的分布，并发现有神经再次分布的汗腺、毛囊和竖毛肌。

这是因为，再生的感觉神经通过趋化因子的作用，在靶器官的控制下分布于移植物［３１【７１。

（二）瘢痕中的神经再生
对于这个问题，不同的作者有着迥异的观点。

我们只能一一陈述于下：
Ｗａｒｉｓ等认为，瘢痕中大量的结缔组织削弱了神经纤维的再生并改变了它们的分布［１”。

Ｓｔｅｌｌａ的研究结果显示，瘢痕固有层中有大量稠密的神经束，而在皮下层可见致密的神经丛。

从皮下层开始，纤细的神经纤维分别进入表皮或真皮乳头中，但绝大多数纤维看起来像是在真皮中作为游离的神经末梢而终止。

Ｍｅｒｋｅｌ细胞只是有限的缺失【…。

由于轴突小体成分的退化，被囊小体的再生是罕见的ｆ１２Ｊ。

㈣。

而Ｗａｒｄ等的研究结果则是，在烧伤后１２０天，即使在瘢痕的表浅层，也可以看到很多轴突，并且没有再生神经退化的表现（３】ｏ他们同时认为，尽管Ｓｃｈｗａｎｎ细胞管道或靶器官的存在支持并引导着损伤后的神经再生．但ＩＩＩ度烧伤不可能有上述结构。

可是ＩⅡ度烧伤仍有神经再生，这说明对神经的再生，上述结构并非必不可少的［１６】【１７】。

Ａｌｔｔｍ等则进一步认为，成熟瘢痕和肥大瘢痕中有再生神经纤维，且在真皮中前者明显多于后者畔Ｊ。

Ｃｒｏｗｅ等支持这一说法，但他们也与Ｗａｒｉｓ一样，认为大量的瘢痕组织阻碍了神经再生，只有Ｐ物质（ＳＰ）免疫反应性神经能穿过紧密填塞的纤维和胶原基质‘１８】。

而当以出芽方式再生的神经不能达到稳定的靶器官时，神经就会缩回㈣。

其余的非ＳＰ免疫反应性神经更容易在瘢痕下更宽松的结缔组织中再生。

当然，这也可能是由于瘢痕组织旺盛的收缩，牵拉神经支配的皮肤边缘到一处，引起瘢痕下结缔组织中有致密的神经纤维
［２０ｌ。

对于瘢痕神经分布的失常与创面的异常愈合之间孰因孰果则尚无定论【２ｌＪ。

（三）皮瓣中的神经再生
几乎所有的临床研究均证实，皮瓣的神经再生优于皮片和瘢痕口叭。

带蒂皮瓣由于神经纤维未被全部离断，故无论在术后早期还是远期效果，均明显优于游离皮瓣㈤。

在游离皮瓣中的神经，由于退化，只留下“空”的神经周管道‘２３１。

再生的神经轴突从受区周围皮肤和下方以出芽的方式，生长入退化的神经周管道中‘２４－２６１。

在有较好血管化和神经支配的受区区域，这种现象会更明显。

这当中，Ｓｃｈｗａｎｎ细胞和基底膜对再生轴突起着引导、趋化和营养的作用。

通过神经生长因子（ＮＧＦ）的调节，再生轴突被吸引至靶器官并与之重建联系吼
四、皮肤神经系统对创面愈合的作用
大量研究证实，皮肤神经系统对创面愈合起着明显的促进作用‘２７】１２８】。

这被认为是释放被称作神经肽的中间介质所产生的生物作用。

神经肽是一个胞外信使家族，起着神经递质、激素或旁分泌因子的作用【２８１。

多数神经肽，包括降钙素基因相关肽（ＣＧＲＰ）、ＳＰ、神经激肽Ａ（ＮＡＫ）和血管肠肽（ｖＩＰ）都在感觉神经中表达【２９１。

神经肽可调节正常创面愈合过程中的许多重要步骤，它不仅影响血管舒张和炎症反应，同时刺激上皮㈨、血管川［３２１和结缔组织细胞㈣的增殖。

在早期创面愈合中，神经肽对血管渗透性的改变例、平滑肌的收缩阁以及皮肤免疫细胞［３６－３８１都有一定的影响。

这当中，ｓＰ能特异性的粘合于鼠和人类的角化细胞，介导如白介素．１（ＩＬ一１）的细胞素释放，刺激肥大细胞产生有效的前炎性细胞素肿瘤坏死因子ｏ（ＴＮＦｏ）。

ＣＧＲＰ能刺激人
２９
类真疫徽盎管蠢皮细整（辩ＤＭ嚣Ｃ）分泌中性较缯稳趋能因子自分素一８（ＩＬ一８）。

另外，ＳＰ能够随接激活ＨＤＭＥＣ表达离水平的重要的细胞支持分子．斑管细服支持分子（ＶＣＡＭ－Ｉ）［２７１。

反之，去神经后的触面愈合明显慢于对照缒１３９】【删。

Ａｌｔｕｎ等的研究指出，成熟瘢痕中的神经纤维数量明显多于肥大瘢痰，毽又远远甄予歪鬻皮鹱承乎。

这默另一方瑟谖实了发默秘经系统对创面愈合的调节作用［８ｊ。

但是，增生明显的瘢痕，虽然其搔痒、疼痛等痰状较戚熬静瘢痰必重，毽蠢无嘲确证爨可班证磷感觉过敏瓣症状葙禳经生长之间有相关关系㈣。

对予皮肤烧伤后再生神经的性质和分布，尤箕是不同病理类麓之间瘢痕中神经再生的情况，以及对神经肽特异性受体拮抗剂的研究【４１】，必将为新的治疗措施提供理论基础。

３０
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