呋喃妥因肠溶片中邻苯二甲酸酯类物质的定性分析及定量检测

呋喃妥因肠溶片中邻苯二甲酸酯类物质的定性分析及定量检测王苑桃;张亚锋;舒蕊华;李荣
【摘要】目的：建立呋喃妥因肠溶片中邻苯二甲酸酯类物质定性分析及定量检测
的方法。

方法采用气质联用色谱法进行定性分析。

采用高效液相色谱法对筛查出的5种邻苯二甲酸酯类物质进行定量检测，色谱柱为PhenomenexC18色谱柱（250mm×4．6mm，5μm），以乙腈-水（90∶10）为流动相，流速
1．0mL·min-1，检测波长为224nm，柱温为30℃。

结果对用气质联用色谱法筛查出的5种邻苯二甲酸酯类物质，建立了高效液相色谱法测定方法。

DMP，DEP，DBP，DPP和BBP质量浓度在1～250μg·mL-1范围内线性关系良好，回收率在87％～107％范围内。

结论该法简便、快速、准确，可用于呋喃妥因肠溶片中邻苯二甲酸酯类化合物的定性分析及定量检测。

%Objective To establish a method
to identify and determine phthalates in Nitrofurantoin Enteric
Tablets .Methods GC-MS was used to identify phthalates ,and HPLC was used to determine the content of phthalates .The quantitative analysis were performed on a Phenomenex C18 column(250 mm × 4 .6
mm ,5μm) ,the mobile phase consisted of acetonitrile-water (90∶10) with a flow rate 1 .0 mL · min-1 ,and the detection wavelength was at 224
nm .Results HPLC method was used to determine phthalates screened by GC-MS .The linear ranges of DMP ,DEP ,DBP ,DPP ,BBP were 1-250 μg · mL -1 .The sample recoveries of DMP , DEP ,DBP ,DPP ,BBP were in the ranges of 87%-107% .Conclusion The method has been proved to be simple and accurate .It has been applied in the qualitative and quantitative analysis of phthalates in Nitrofurantoin Enteric Tablets .
【期刊名称】《西北药学杂志》
【年(卷),期】2014(000)003
【总页数】3页(P250-252)
【关键词】呋喃妥因肠溶片;邻苯二甲酸酯类;气质联用色谱法;高效液相色谱法【作者】王苑桃;张亚锋;舒蕊华;李荣
【作者单位】西安市食品药品检验所，西安 710054;西安市食品药品检验所，西安 710054;西安市食品药品检验所，西安 710054;西安市食品药品检验所，西安710054
【正文语种】中文
【中图分类】R927
增塑剂(即塑化剂)广泛用于食品包装、医疗卫生用品、油漆等工业产品中，部分邻苯二甲酸酯类物质(PAEs)具有内分泌干扰作用，具有雌激素活性，能够产生生殖毒性、胚胎毒性和遗传毒性等，同时还具有致癌、致畸和致突变作用[1-2]。

在药品生产过程中，邻苯二甲酸二乙酯和邻苯二甲酸二丁酯等PAEs常被添加到片剂薄膜衣及用来控制药物在肠道中的释放时间、起缓释作用的肠溶空心胶囊中。

但在实际生产中，企业常常超剂量、超范围添加各种塑化剂，且不在包装上做任何提示，而一些含有塑化剂成分的药物实际上都是常用药，日常消耗量很大，这样就会给使用者造成极大的致病风险。

PAEs的分析多采用液相色谱法、液质联用色谱法和气质联用色谱法[3-5]，本研究采用气质联用色谱法对国内呋喃妥因肠溶片13个生产厂家生产的呋喃妥因肠溶片
中PAEs进行了定性筛查，对筛查出的5种PAEs即邻苯二甲酸二甲酯、邻苯二甲酸二乙酯、邻苯二甲酸二丁酯、邻苯二甲酸戊酯和邻苯二甲酸丁基苄基酯建立了高效液相色谱法定量检测，初步掌握了国内生产的呋喃妥因肠溶片中PAEs的含量。

1 仪器与试药
1.1 仪器 7890A/5975C气质联用仪(美国Agilent公司)；1260型高效液相色谱仪(美国Agilent公司)；KQ-300VDB双频数控型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；HC-3018R型高速冷冻离心机(安徽中科中佳科学仪器有限公司)。

1.2 试药 14 种PAEs混标由Dr. Ehrenstorfer 公司提供，质量浓度为1 000
μg·mL-1(正己烷溶液)；邻苯二甲酸二甲酯(DMP)、邻苯二甲酸二乙酯(DEP)、邻
苯二甲酸二丁酯(DBP)、邻苯二甲酸戊酯(DPP)和邻苯二甲酸丁基苄基酯(BBP)对照品均由中国食品药品检定研究院提供。

呋喃妥因肠溶片为国家食品药品监督管理局评价性抽验样品。

2 方法与结果
2.1 14种PAEs的定性鉴别
2.1.1 气质联用条件色谱条件：色谱柱：5%苯基-95%甲基聚硅氧烷聚合物为固定相的石英毛细管柱(30 m×0.25 mm，0.25 μm)(HP-5MS)；进样口温度：250 ℃；柱温：初始温度为60 ℃，保持1 min，以20 ℃·min-1的速率升温至220 ℃，
保持1 min，再以5 ℃·min-1的速率升温至300 ℃，保持7 min；载气：高纯氦气(质量分数≥99.999%)，流速1mL·min-1；不分流进样，进样体积：1 μL。

质谱条件：电离方式：使用EI离子源，传输线温度280℃，离子源温度230 ℃。

电离能量：70 eV。

溶剂延迟：7 min。

全扫描监测方式：20～500单位。

2.1.2 对照品溶液的制备取14 种PAEs用甲醇稀释，制成每1 mL中约含5 μg的溶液，作为对照品溶液。

2.1.3 供试品溶液的制备取样品20片，研细，取约0.2 g，精密称定，置于具塞
锥形瓶中，精密加入流动相25 mL，密塞，称定质量，超声处理5 min(功率250 W，频率25 kHz)，放冷，再称定质量，用流动相补足减失的质量，摇匀，取适量溶液以5 000 r·min-1离心5 min，取上清液，作为供试品溶液。

整个实验过程不能接触塑料设备。

2.1.4 标准色谱图按质谱分析条件对 14 种PAEs的混合对照溶液进行了分析，在此条件下14 种PAEs均能良好地分离。

14 种PAEs的特征离子见表 1。

14种PAEs总离子流色谱图见图 1。

图1 14 种邻苯二甲酸酯类 GC-MS总离子流图Fig.1 GC-MS total ion current chromatogram(TIC) of 14 types of phthalates
表1 14 种塑化剂的特征离子Tab.1 Characteristic ion of 14 types of phthalates序号中文名称简称保留时间/min定性离子及其丰度比1邻苯二甲酸二甲酯DMP7.884163 ∶135∶164∶194.1(100∶5.2∶11.2∶6.6)2邻苯二甲酸二乙酯DEP8.744149∶105.1∶150∶177.1(100∶8.5∶13.2∶ 26.6)3邻苯二甲酸二异丁酯DIBP10.514149∶57.1∶41.1∶29.1(100∶14.3∶7.9∶4.3)4邻苯二甲酸二丁酯DBP11.270149∶150∶205∶223.1(100 :9.3∶3.9∶4.4)5邻苯二甲酸二(2-甲氧基) 乙酯DMEP11.60959.1∶149∶193.1∶252.1(100∶42.7∶14.5∶7.3)6邻苯二甲酸二(2-乙氧基) 乙酯
DEEP12.69072.1∶45.1∶149∶221(100∶86.5∶77.1∶13.5)7邻苯二甲酸二戊酯DPP13.057149∶237.1∶219.1∶166.9(100∶7.6∶3.3∶1.4)8邻苯二甲酸丁基苄基酯BBP15.366149∶150∶206.1∶238.1(100∶13.3∶33.7∶4.8)9邻苯二甲酸二(2-丁氧基) 乙酯DBEP16.817149∶193∶101.1∶57.1(100∶73.6∶46.7∶81.7)10邻苯二甲酸二环己酯
DCHP17.488149∶167∶55.1∶150(100∶30.5∶15.1∶15)11邻苯二甲酸二(2-乙基) 己酯DEHP17.718149∶150∶167∶279.1(100∶13.4∶37.4∶12.2)12邻苯二
甲酸二苯酯DPHP17.842225.1∶77.1∶153.1∶197.1(100∶23.4∶5.7∶2.9)13邻苯二甲酸二正辛酯
DNOP20.107149∶166.9∶261∶279.2(100∶3.7∶2.3∶7.7)14邻苯二甲酸二壬
酯DNP22.621149∶57.1∶70.9∶166.9(100∶13.1∶8.3∶5)
2.1.5 呋喃妥因肠溶衣片中PAEs的定性分析结果共对13个厂家生产的87批呋
喃妥因肠溶片样品进行了初筛。

实验中发现，不同厂家最多检出5种成分(DMP、DEP、DBP、DPP和BBP)，不同厂家所含塑化剂的量差异较大，含量相差2 000
倍以上，很难用统一的GC-MS进行定量。

为此，建立了HPLC测定DMP、DEP、DBP、DPP和BBP的定量方法。

2.2 5种PAEs(DMP、DEP、DBP、DPP和BBP)的定量测定
2.2.1 液相色谱条件色谱柱： Phenomenex C18色谱柱(250 mm ×4. 6 mm，5 μm)；以乙腈-水(90∶10)为流动相；流速1.0 mL·min-1；检测波长为224 nm；柱温为30 ℃。

理论板数按邻苯二甲酸二乙酯(DEP)峰计算不低于5 000。

检测方法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μL，注入液相色谱仪，记录色谱峰，按标准曲线法以峰面积计算供试品中各组分的含量。

2.2.2 对照品溶液的制备取DMP、DEP、DBP、DPP和BBP各约50 mg，精密
称定，置于50 mL量瓶中，用乙腈溶解并稀释至刻度，制成每1 mL中约含1 mg 的溶液作为储备液。

分别取储备液适量，用流动相稀释制成质量浓度分别为1，5，25，50，100和250 μg·mL-1的溶液，作为对照品溶液。

2.2.3 供试品溶液制备取样品20片，研细，取约0.2 g，精密称定，置于具塞锥
形瓶中，精密加入流动相25 mL，密塞，称定质量，超声处理5 min(功率250 W，频率25 kHz)，放冷，再称定质量，用流动相补足减失的质量，摇匀，取适量溶液以5 000 r·min-1离心5 min，取上清液，作为供试品溶液。

2.2.4 线性关系利用外标法按峰面积与DMP、DEP、DBP、DPP和BBP之间的线
性关系定量，混合对照品中5种PAEs质量浓度在1～250 μg · mL-1范围内线性关系良好，相关系数均大于0.999 9。

2.2.5 检测限及定量限取空白样品溶液对混合对照品溶液进行稀释，将其稀释至信号约为噪音信号的3倍时的质量浓度作为检测限。

供试品检测限分别为：DMP 8 ng，DEP 8 ng，BBP 8 ng，DBP16 ng，DPP16 ng。

取空白样品溶液对对照品溶液进行稀释，将其稀释至信号约为噪音信号的10倍的质量浓度作为定量限。

供试品定量限分别为DMP 27.2 ng，DEP 27.2 ng，BBP 27.2 ng，DBP54.4 ng和DPP 54.4 ng。

2.2.6 精密度取对照品溶液(约50 μg·mL-1)，连续测定6次，峰面积RSD均小于0.3%。

2.2.7 加样回收率实验采用加样回收法，精密称取已知含量的不同批号样品0.2 g，分别精密加入混合对照品溶液适量，照2.2.3项下方法处理样品，5种PAEs回收
率在87%～107%范围内。

2.2.8 重复性取不同批号样品分别平行制备6份，照2.2.3项下方法处理样品，进行测定，结果DMP、DEP、DBP、DPP和BBP的RSD分别为2.4%，1.3%，
1.6%，
2.0%和0.9%。

2.2.9 样品测定共对13个厂家生产的87批呋喃妥因肠溶片样品进行了测定，见
图2。

图2 DMP、DEP、DBP、DPP、BBP液相色谱图a.混合对照品溶液；b.供试品溶液；1.DMP；2.DEP；3.BBP；4.DBP；5.DPPFig.2 DMP，DEP，DBP，DPP，BBP Liquid chromatogramsa.mixed reference solution；b.test solution；
1.DMP；
2.DEP；
3.BBP；
4.DBP；
5.DPP
其中检出BBP的有2个厂家3个批次，含量11.26～12.13μg·g-1，检出DPP的有3个厂家3个批次，含量6.78～7.83 μg·g-1，检出DBP的有2个厂家3个批
次，含量8.82～3.64 μg·g-1，检出DMP的有1个厂家1个批次，含量为6.68
μg·g-1，检出DBP的有2个厂家3个批次，含量8.82～3.64 μg·g-1，检出DEP 的有12个厂家56个批次，含量4.07～10 607.24μg·g-1。

3 结论
不同厂家生产的呋喃妥因肠溶片所含塑化剂的量跨度较大，DEP在4.07～10 607.24 μg·g-1不等，如果用统一的气质联用色谱法进行定量，高质量浓度样品极易污染气质联用仪系统，并且难以消除干扰。

而液相色谱紫外检测器的本底干扰一般通过液相色谱仪自带的色谱进样针清洗功能就能消除，并且检测线性范围宽，更有利于样品的含量测定。

分别比较了甲醇-水以及乙腈-水2种体系流动相对5种PAEs的分离度的影响，发现乙腈-水流动相体系更有利于分离测定，当乙腈-水(90∶10)作为流动相时，能满足出峰时间快、分离度高等系统适用性要求。

【相关文献】
[1] 赵文红. 酞酸酯类增塑剂毒理研究进展[J]. 环境与职业医学，2003，20(2)：135-138.
[2] 郑和辉，赵立文，刘玉敏，等.饮用水中邻苯二甲酸酯的气相色谱-质谱测定法[J]. 环境与健康杂志，2005，22(5):377-378.
[3] 郭毅，王雪芹.口服固体制剂中 20种邻苯二甲酸酯类化合物的 GC-MS 法测定[J]. 药物分析杂志，2012，32(12)：2221-2224.
[4] 王瑾，谢晶鑫，李晓东，等. 反相高效液相色谱法测定兰索拉唑肠溶胶囊中 3 种邻苯二甲酸酯
类增塑剂含量[J]. 中国新药杂质，2012，47(19)：1577-1580.
[5] 丁利，肖家勇，龙妍娇，等. HPLC-MS /MS法测定食品接触材料中6种邻苯二甲酸酯的含量[J]. 包装工程，2011，32(15)：39-42.。