miR-16、126表达预测糖尿病微血管并发症的临床价值
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１ 资料与方法
１．１ 一般资料 纳入我院 ２０１５年 ６月 －２０１７年 １２月于我院就诊的 ２型糖尿病（糖尿病组）、２型糖 尿病微血管并发症患者（微血管并发症组）各 ４０例 为研究对象，本次研究经医院伦理委员会审查批准。 ２型糖尿病组患者均符合糖尿病诊断标准［６］，其中 男 ２５例，女 １５例；年龄 ２０～７２岁，平均 （５０３５± ９８７）岁；体 重 指 数 １８５４～３１９５ ｋｇ／ｍ２，平 均 （２５３４±３９５）ｋｇ／ｍ２；病程 １～９年，平均（１９５± １０５）年。微血管并发症组患者均符合 ２型糖尿症
糖尿病主要以慢性血糖升高为临床特征，主要 由胰岛素分泌不足或作用缺陷所引起，其具体发病 机制尚不 明 确［１］。 长 期 血 糖 控 制 不 佳 会 诱 发 糖 尿 病微血管病变，明显增加致残率及死亡率，因此早期 诊断、监控糖尿病微血管并发症对预防恶性事件发 生有重要意义［２］。微小核糖核酸 （ｍｉｃｒｏＲＮＡ，ｍｉＲ ＮＡｓ）是一 种 新 型 基 因 表 达 调 控 因 子，与 胰 岛 素 生 成、分泌及胰岛素作用有密切关系［３］。近年来有研 究显示［４－５］，ｍｉＲ－１６、ｍｉＲ－１２６可 参 与 糖 尿 病 发 生、发展，而且其在糖尿病血管并发症的发生中具有 重要作用，但临床对于两者在糖尿病血管并发症中 含量变化 还 需 进 一 步 研 究。因 此 本 次 研 究 采 取 ＰＣＲ方法定量检测 ２型糖尿病患者血清中 ｍｉＲ－ １６、１２６表达水 平，分 析 其 在 糖 尿 病 发 生、发 展 中 的 作用。结果报告如下。
何继宏 杨 海 张芳娣 邱海山 陈远东 ：惠州市第三人民医院 广东惠州 ５１６００２
诊断标准［６］，且发生微血管并发症，其中男 ２３例，女 １７例；年龄 ２２～７６岁，平均（５１７８±８６４）岁；体重 指数 １９０５～３２８７ｋｇ／ｍ２，平均（２６１４±４０２）ｋｇ／ ｍ２；病程 ８个月 ～７年，平均（２０４±１１３）年。本次 患者排除标准：年龄 ＜１８岁或 ＞８０岁；其他类型糖 尿病；合并严重心血管疾病、甲状腺功能紊乱、急性 感染及恶性肿瘤者。另选取 ４０例健康体检者为对 照组，男 ２２例，女 １８例；年 龄 １９～７８岁，平 均 （５０９５±８０５）岁。 １．２ 方法 １．２．１ 标本收集与保存，采集 ８０例患者及 ４０例健 康体检者空腹静脉血 ３ｍＬ，３０００ｒ／ｍｉｎ低速离心 １０ｍｉｎ，收集血清标本置于 －８０℃保存。 １．２．２ 生化指标测定 采用全自动生化分析仪检 测空腹血糖（ＦＰＧ）、糖化血红蛋白（ＨｂＡ１ｃ）、总胆固 醇（ＴＣ）、甘油三脂（ＴＧ）、高密度脂蛋白（ＨＤＬ－Ｃ）、 低密度脂蛋 白 （ＬＤＬ－Ｃ）水 平，各 检 测 试 剂 盒 均 购 自北京中杉金桥生物技术有限公司，严格按照试剂 盒操作说明书进行操作。 １．２．３ 血清 ＲＮＡ提取及荧光定量 ＰＣＲ检测 ｍｉＲ －１６、ｍｉＲ－１２６ 收集的血清标本中加入 ＴＲＩＺＯＬ ＬＳ试剂及 ２００μＬ氯仿摇匀，静 置 １５ｍｉｎ，４℃ １２ ０００ｒｐｍ离心 １０ｍｉｎ，将上层水相已至另一离心管 中，加入异丙醇，４℃ １２０００ｒｐｍ离心 １０ｍｉｎ，弃上 清液，加入乙醇，７５００ｒｐｍ离心 ５ｍｉｎ，加入 １００μＬ ０１％ＤＥＰＣｄｄＨ２Ｏ，严格按照 ＲＮＡ回收试剂盒说明 书纯化回收 ＲＮＡ。采用逆转录荧光 ＰＣＲ检测 ｍｉＲ －１６、ｍｉＲ－１２６，以 Ｕ６为 内 参，引 物 及 探 针 购 自
现代医院 ２０１８年 ４月第 １８卷第 ４期 专业技术篇 ＭｏｄｅｒｎＨｏｓｐｉｔａｌｓＡｐｒ２０１８病微血管并发症的临床价值
何继宏 杨 海 张芳娣 邱海山 陈远东
【摘 要】 目的 探讨微小核糖核酸 －１６、１２６（ｍｉＲ－１６、１２６）表达预测糖尿病微血管并发症的临床价值。 方法 检测我院 ４０例 ２型糖尿病患者（糖尿病组）、４０例 ２型糖尿病微血管并发症患者（微血管并发症组）及 ４０例 健康体检者（对照组）血清 ｍｉＲ－１６、１２６变化，采用生化分析仪检测生化相关指标，并分析 ＲＯＣ曲线预测糖尿病微血 管并发症的临床价值。结果 微血管并发症组、糖尿病组 ＦＰＧ、ＨｂＡ１ｃ、ＴＣ、ＴＧ、ＬＤＬ－Ｃ、ＨＤＬ－Ｃ水平均高于对照 组，差异有统计学意义（Ｐ＜００５）。微血管并发症组与糖尿病组各生化检测结果比较均无显著差异（Ｐ＞００５）。微 血管并发症组、糖尿病组、对照组中 ｍｉＲ－１６呈降低趋势，ｍｉＲ－１２６呈升高趋势，差异有统计学意义（Ｐ＜００５）。 ｍｉＲ－１６预测糖尿病微血管并发症的 ＲＯＣ曲线下面积 ０８１０，当最佳截断值为 ３２６２，此时敏感度与特异度均为 ０８２５。ｍｉＲ－１２６预测糖尿病微血管并发症的 ＲＯＣ曲线下面积 ０７８４，当最佳截断值为 ２０４２，此时敏感度与特异度 均为 ０８２５，特异度为 ０７２５。结论 ｍｉＲ－１６、ｍｉＲ－１２６在预测糖尿病微血管并发症方面有一定临床应用价值，可作 为糖尿病微血管并发症的辅助诊断标志物。 【关键词】 ｍｉＲ－１６；ｍｉＲ－１２６；预测；糖尿病；微血管并发症 中图分类号：Ｒ５８７２；Ｒ３９２１１ 文献标识码：Ａ ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７１－３３２Ｘ．２０１８．０４．０４３
现代医院 ２０１８年 ４月第 １８卷第 ４期 专业技术篇 ＭｏｄｅｒｎＨｏｓｐｉｔａｌｓＡｐｒ２０１８Ｖｏｌ１８Ｎｏ４
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ＴａＫａＲａ公司，严格按照实验室操作步骤进行操作。 １．３ 观察指标 记录三组 ＦＰＧ、ＨｂＡ１ｃ、ＴＣ、ＴＧ、 ＬＤＬ－Ｃ、ＨＤＬ－Ｃ水平差异，并采用荧光定量 ＰＣＲ 检测三组血清 ｍｉＲ－１６、ｍｉＲ－１２６变化，分析 ｍｉＲ －１６、ｍｉＲ－１２６对 糖 尿 病 微 血 管 并 发 症 的 预 测 价 值。 １．４ 统计学方法 选用统计学软件 ＳＰＳＳ１９０对 研究数据进行分析和处理，计量资料行（ｘ珋±ｓ）表示， 组间对比进 行 ｔ值 检 验，采 用 ＲＯＣ曲 线 评 价 血 清
１．１ 一般资料 纳入我院 ２０１５年 ６月 －２０１７年 １２月于我院就诊的 ２型糖尿病（糖尿病组）、２型糖 尿病微血管并发症患者（微血管并发症组）各 ４０例 为研究对象，本次研究经医院伦理委员会审查批准。 ２型糖尿病组患者均符合糖尿病诊断标准［６］，其中 男 ２５例，女 １５例；年龄 ２０～７２岁，平均 （５０３５± ９８７）岁；体 重 指 数 １８５４～３１９５ ｋｇ／ｍ２，平 均 （２５３４±３９５）ｋｇ／ｍ２；病程 １～９年，平均（１９５± １０５）年。微血管并发症组患者均符合 ２型糖尿症
糖尿病主要以慢性血糖升高为临床特征，主要 由胰岛素分泌不足或作用缺陷所引起，其具体发病 机制尚不 明 确［１］。 长 期 血 糖 控 制 不 佳 会 诱 发 糖 尿 病微血管病变，明显增加致残率及死亡率，因此早期 诊断、监控糖尿病微血管并发症对预防恶性事件发 生有重要意义［２］。微小核糖核酸 （ｍｉｃｒｏＲＮＡ，ｍｉＲ ＮＡｓ）是一 种 新 型 基 因 表 达 调 控 因 子，与 胰 岛 素 生 成、分泌及胰岛素作用有密切关系［３］。近年来有研 究显示［４－５］，ｍｉＲ－１６、ｍｉＲ－１２６可 参 与 糖 尿 病 发 生、发展，而且其在糖尿病血管并发症的发生中具有 重要作用，但临床对于两者在糖尿病血管并发症中 含量变化 还 需 进 一 步 研 究。因 此 本 次 研 究 采 取 ＰＣＲ方法定量检测 ２型糖尿病患者血清中 ｍｉＲ－ １６、１２６表达水 平，分 析 其 在 糖 尿 病 发 生、发 展 中 的 作用。结果报告如下。
何继宏 杨 海 张芳娣 邱海山 陈远东 ：惠州市第三人民医院 广东惠州 ５１６００２
诊断标准［６］，且发生微血管并发症，其中男 ２３例，女 １７例；年龄 ２２～７６岁，平均（５１７８±８６４）岁；体重 指数 １９０５～３２８７ｋｇ／ｍ２，平均（２６１４±４０２）ｋｇ／ ｍ２；病程 ８个月 ～７年，平均（２０４±１１３）年。本次 患者排除标准：年龄 ＜１８岁或 ＞８０岁；其他类型糖 尿病；合并严重心血管疾病、甲状腺功能紊乱、急性 感染及恶性肿瘤者。另选取 ４０例健康体检者为对 照组，男 ２２例，女 １８例；年 龄 １９～７８岁，平 均 （５０９５±８０５）岁。 １．２ 方法 １．２．１ 标本收集与保存，采集 ８０例患者及 ４０例健 康体检者空腹静脉血 ３ｍＬ，３０００ｒ／ｍｉｎ低速离心 １０ｍｉｎ，收集血清标本置于 －８０℃保存。 １．２．２ 生化指标测定 采用全自动生化分析仪检 测空腹血糖（ＦＰＧ）、糖化血红蛋白（ＨｂＡ１ｃ）、总胆固 醇（ＴＣ）、甘油三脂（ＴＧ）、高密度脂蛋白（ＨＤＬ－Ｃ）、 低密度脂蛋 白 （ＬＤＬ－Ｃ）水 平，各 检 测 试 剂 盒 均 购 自北京中杉金桥生物技术有限公司，严格按照试剂 盒操作说明书进行操作。 １．２．３ 血清 ＲＮＡ提取及荧光定量 ＰＣＲ检测 ｍｉＲ －１６、ｍｉＲ－１２６ 收集的血清标本中加入 ＴＲＩＺＯＬ ＬＳ试剂及 ２００μＬ氯仿摇匀，静 置 １５ｍｉｎ，４℃ １２ ０００ｒｐｍ离心 １０ｍｉｎ，将上层水相已至另一离心管 中，加入异丙醇，４℃ １２０００ｒｐｍ离心 １０ｍｉｎ，弃上 清液，加入乙醇，７５００ｒｐｍ离心 ５ｍｉｎ，加入 １００μＬ ０１％ＤＥＰＣｄｄＨ２Ｏ，严格按照 ＲＮＡ回收试剂盒说明 书纯化回收 ＲＮＡ。采用逆转录荧光 ＰＣＲ检测 ｍｉＲ －１６、ｍｉＲ－１２６，以 Ｕ６为 内 参，引 物 及 探 针 购 自
现代医院 ２０１８年 ４月第 １８卷第 ４期 专业技术篇 ＭｏｄｅｒｎＨｏｓｐｉｔａｌｓＡｐｒ２０１８病微血管并发症的临床价值
何继宏 杨 海 张芳娣 邱海山 陈远东
【摘 要】 目的 探讨微小核糖核酸 －１６、１２６（ｍｉＲ－１６、１２６）表达预测糖尿病微血管并发症的临床价值。 方法 检测我院 ４０例 ２型糖尿病患者（糖尿病组）、４０例 ２型糖尿病微血管并发症患者（微血管并发症组）及 ４０例 健康体检者（对照组）血清 ｍｉＲ－１６、１２６变化，采用生化分析仪检测生化相关指标，并分析 ＲＯＣ曲线预测糖尿病微血 管并发症的临床价值。结果 微血管并发症组、糖尿病组 ＦＰＧ、ＨｂＡ１ｃ、ＴＣ、ＴＧ、ＬＤＬ－Ｃ、ＨＤＬ－Ｃ水平均高于对照 组，差异有统计学意义（Ｐ＜００５）。微血管并发症组与糖尿病组各生化检测结果比较均无显著差异（Ｐ＞００５）。微 血管并发症组、糖尿病组、对照组中 ｍｉＲ－１６呈降低趋势，ｍｉＲ－１２６呈升高趋势，差异有统计学意义（Ｐ＜００５）。 ｍｉＲ－１６预测糖尿病微血管并发症的 ＲＯＣ曲线下面积 ０８１０，当最佳截断值为 ３２６２，此时敏感度与特异度均为 ０８２５。ｍｉＲ－１２６预测糖尿病微血管并发症的 ＲＯＣ曲线下面积 ０７８４，当最佳截断值为 ２０４２，此时敏感度与特异度 均为 ０８２５，特异度为 ０７２５。结论 ｍｉＲ－１６、ｍｉＲ－１２６在预测糖尿病微血管并发症方面有一定临床应用价值，可作 为糖尿病微血管并发症的辅助诊断标志物。 【关键词】 ｍｉＲ－１６；ｍｉＲ－１２６；预测；糖尿病；微血管并发症 中图分类号：Ｒ５８７２；Ｒ３９２１１ 文献标识码：Ａ ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７１－３３２Ｘ．２０１８．０４．０４３
现代医院 ２０１８年 ４月第 １８卷第 ４期 专业技术篇 ＭｏｄｅｒｎＨｏｓｐｉｔａｌｓＡｐｒ２０１８Ｖｏｌ１８Ｎｏ４
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ＴａＫａＲａ公司，严格按照实验室操作步骤进行操作。 １．３ 观察指标 记录三组 ＦＰＧ、ＨｂＡ１ｃ、ＴＣ、ＴＧ、 ＬＤＬ－Ｃ、ＨＤＬ－Ｃ水平差异，并采用荧光定量 ＰＣＲ 检测三组血清 ｍｉＲ－１６、ｍｉＲ－１２６变化，分析 ｍｉＲ －１６、ｍｉＲ－１２６对 糖 尿 病 微 血 管 并 发 症 的 预 测 价 值。 １．４ 统计学方法 选用统计学软件 ＳＰＳＳ１９０对 研究数据进行分析和处理，计量资料行（ｘ珋±ｓ）表示， 组间对比进 行 ｔ值 检 验，采 用 ＲＯＣ曲 线 评 价 血 清