小牛血去蛋白提取物眼用凝胶对LASIK术后角膜损伤修复的疗效观察

小牛血去蛋白提取物眼用凝胶对LASIK术后角膜损伤修复的
疗效观察
牛广增;范玉香;陈海婷;王志学;赵骏
【摘要】目的探讨小牛血去蛋白提取物眼用凝胶对准分子激光原位角膜磨镶术( laser in situ keratomileusis,LASIK)后角膜损伤修复的影响.方法选取在我院行LASIK患者114例(228眼).患者左右眼随机分为治疗组和对照组,治疗组应用小牛血去蛋白提取物眼用凝胶,对照组不应用.测定两组术前、术后1d、1个月、3个月时泪液分泌量、BUT、角膜上皮下神经丛密度和角膜知觉.对上述4个指标采用SPSS13.0软件进行统计分析比较.结果治疗组术前泪液分泌量和BUT分别为(26.35±0.90)mm、(9.88±0.48)s；术后1d分别为(11.59±1.04)mm、
(1.76±0.20)s,较术前明显降低(均为P＜0.05)；术后3个月分别为
(25.82±0.89)mm、(8.76±0.40)s,与术前比较差异无统计学意义(均为P＞0,05).对照组术前泪液分泌量和BUT分别为(26.59±0.10)mm、(10.06±0.45)s;术后1d、术后3个月时变化趋势与治疗组相同,与治疗组同时期数据比较差异无统计学意义(均为P ＞0.05).术后1个月治疗组泪液分泌量和BUT分别为(20.35±0.89)mm、(6.18±0.45)s；对照组分别为(17.24±0.77)mm、(4.71±0.23)s；治疗组两个指标的恢复程度均明显快于对照组,差异有统计学意义(t=7.012、3.293,均为P＜0.01).治疗组术前角膜上皮下神经丛密度和角膜知觉分别为(1588.00±173.53)μm、(60.00±0.00) mm；术后1d分别为( 254.00±53.29) μm、(0.59±0.04)mm,较术前明显降低(均为P＜0.05)；术后1个月为(208.00±32.58) μm、
(15.59±1.81)mm,术后3个月为(588.00±65.18) μm、(41.18±3.44)mm,均低于术前水平(均为P＜0.05).对照组术前角膜上皮下神经丛密度和角膜知觉分别为(1134.00±68.50) μm、(60.00±0.00)mm;术后1d、1个月、3个月时变化趋势与
治疗组相同,与治疗组同时期数据比较差异无统计学意义(均为P＞0.05).结论LASIK术后早期使用小牛血去蛋白提取物眼用凝胶有利于角膜表面损伤的修复,缓解术后干眼症状；但对于角膜神经的损伤修复无明显作用.
【期刊名称】《眼科新进展》
【年(卷),期】2012(032)003
【总页数】4页(P242-245)
【关键词】小牛血去蛋白提取物眼用凝胶;角膜知觉;准分子激光原位角膜磨镶术;角膜上皮下神经丛密度;干眼症
【作者】牛广增;范玉香;陈海婷;王志学;赵骏
【作者单位】061001 河北省沧州市,沧州市中心医院眼一科;061001 河北省沧州市,沧州市中心医院眼一科;061001 河北省沧州市,沧州市中心医院眼一科;061001 河北省沧州市,沧州市中心医院眼一科;061001 河北省沧州市,沧州市中心医院眼一科
【正文语种】中文
准分子激光原位角膜磨镶术(laser in situ keratomileusis，LASIK)对于角膜是一种创伤性手术。

创伤性损伤包括:板层刀对角膜上皮下神经丛和角膜上皮的损伤;负压环对结膜上皮和杯状细胞的损伤;术后眼表药物对眼表微环境的损伤。

以上损伤均会导致术后患者异物感、眼干等不适症状，严重者可致LASIK术后干眼症。

小牛血去蛋白提取物眼用凝胶是从健康小牛血清中提取的，不含蛋白质的低分子生物活性物质，有极强的促细胞生长、再生能力。

因此我们在LASIK术后患者中应用
小牛血去蛋白提取物眼用凝胶，观察其对角膜组织损伤修复的影响，并探讨其作用机制，以便其能在临床得到更好的应用。

1 资料与方法
1.1 一般资料选取2010年6月至12月在我院行LASIK手术患者114例，228眼，其中男52例104眼，女62例124眼，年龄为18～35岁，平均2
2.2岁，术前等效球镜度数为－2.0～－6.0 D，平均－
3.7 D。

患者左右眼随机分为治疗组和对照组。

病例选择标准:(1)屈光状态稳定2 a以上;(2)未戴过角膜接触镜或已停戴1个月;(3)无角膜炎、青光眼、瘢痕体质、糖尿病等LASIK手术禁忌症;(4)近1个月没用过影响泪液分泌及泪膜稳定性的药物;(5)角膜中央厚度500～600 μm;(6)双眼屈光参差＜1.0 D。

1.2 主要仪器法国 LUNEAU公司的 Cochet-Bonnet角膜触觉计;日本 NIDEK公司的 Confoscan 4.0型角膜共聚焦生物显微镜和准分子激光仪器Nidek-EC-5000CXⅡ;法国Moria公司Moria2旋转板层刀(110刀头);天津晶明新技术开发有限公司的5 mm×30 mm泪液检测滤纸;天津晶明新技术开发有限公司的荧光素条。

1.3 方法治疗组和对照组均用同一种LASIK手术切削模式，角膜瓣蒂位于上方，厚度控制在110～130 μm，术者为同一个人，进行常规手术操作。

1.4 术后处理治疗组和对照组术后均点5 g·L－1左氧氟沙星眼液1周，每日4次;1 g·L－1艾弗龙眼液第1周每天4次，以后每周递减1次，共滴4周后停药。

治疗组用小牛血去蛋白提取物眼用凝胶滴眼3个月，每天3次，对照组不用。

所有患者均随访3个月，依从性良好。

1.5 观察指标分别测定治疗组和对照组术前、术后1 d、1个月、3个月时以下指标，所有指标测定均由同一未参与实验设计的医师来完成。

1.5.1 泪液分泌量和泪膜破裂时间同等环境下在颞下方球结膜囊内放置5 mm×30
mm泪液检测滤纸，轻闭眼，5 min后取出滤纸条，记录湿润位置刻度数值即为
该眼泪液分泌量。

然后将荧光素钠液分别滴入结膜囊，眨眼两次后在裂隙灯钴蓝光下记录一次瞬目后角膜表面泪膜出现干斑所需时间(用秒表计时)，重复测量3次后取平均值即为该眼泪膜破裂时间(break up time，BUT)。

1.5.2 角膜上皮下神经丛密度共聚焦生物显微镜下1次检查获得角膜中央点自内皮层至上皮层约300帧图像，每帧图像有效的侧像分辨率为1 μm，景深为10 μm，水浸式物镜的扫描范围为340 μm×255 μm，放大倍数为1000倍。

以每帧图内
可分辨出的上皮下神经丛神经纤维总长度为该测定点的神经丛密度，以神经丛密度最大一帧图为计数图，记录该眼角膜上皮下神经丛密度。

1.5.3 角膜知觉触觉计尼龙纤维丝直径0.12 mm，长度0～60 mm可调节。

测定角膜中央点的知觉阈值。

告知患者检查过程及步骤，消除患者紧张情绪后，在裂隙灯下嘱其双眼直视前方，自然睁眼，尼龙丝垂直接触角膜，以尼龙丝开始弯曲为一次完整接触，用每一尼龙丝长度测定3次，3次中有2次出现眨眼动作即为阳性，尼龙丝从60 mm长度开始检测每次递减5 mm，有阳性反应的最大纤维长度即为该点角膜知觉数值。

当尼龙丝长度小于5 mm时，角膜触觉数值记为0 mm。

1.6 统计学分析采用SPSS 13.0软件进行统计分析，计量资料数据以(±s)表示;样
本不同时段相应变量均数间的比较均采用配对资料的t检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果
2.1 LASIK术后BUT变化情况治疗组和对照组术前、术后BUT检测结果见表1。

术后1个月时治疗组BUT，较对照组明显延长，差异有统计学意义(P＜0.01);其余术后不同时间同时期两组数据比较差异均无统计学意义(均P＞0.05)，说明术后早
期治疗组BUT恢复快于对照组。

表1 两组BUT变化情况Table 1 BUT of two groups(t/s)Note:Compared with
those before surgery，*P ＜0.05Group Before surgery After surgery 1 day 1 month 3 months Treatment 9.88 ±0.48 1.76 ±0.20 6.18 ±0.45*8.76 ±0.40 Control 10.06 ±0.45 1.47 ±0.21 4.71 ±0.23* 9.41 ±0.43 t 0.427 1.319 3.293
1.833 P 0.675 0.206 0.005 0.085
2.2 LASIK术后泪液分泌量变化情况治疗组和对照组术前、术后泪液分泌量检测结果见表2。

术后1个月时的泪液分泌量对照组比治疗组明显增加，差异有统计学意义(P＜0.01);其余术后不同时间两组同时期数据比较差异均无统计学意义(均P＞
0.05)，说明术后早期治疗组泪液分泌量恢复快于对照组。

2.3 LASIK术后角膜上皮下神经丛密度变化情况治疗组和对照组术前、术后角膜上皮下神经丛密度变化见表3。

术后1 d、1个月、3个月时治疗组角膜上皮下神经
丛密度和对照组比较差异均无统计学意义(均P＞0.05)，说明术后治疗组中受损角
膜神经恢复再生情况与对照组无明显差异。

2.4 LASIK术后角膜知觉变化情况治疗组和对照组术前、术后角膜知觉变化见表4。

术后1 d、1个月、3个月时治疗组角膜知觉和对照组比较差异均无统计学意义(均P＞0.05)，说明术后治疗组中角膜知觉恢复情况和对照组比较无明显差异。

2.5 LASIK术前术后角膜上皮下神经丛在共焦显微镜下形态学表现术前角膜上皮下神经丛与背景对比明亮，多均匀平行排列，中等粗长，神经串珠、分叉、吻合支多见(图1);术后1 d角膜上皮下神经丛神经偶见，神经多细短、暗淡，神经串珠、分叉、吻合支少见(图2)，前基质内可见神经干断端(图3);术后3个月时可见再生上
皮下神经，再生神经暗淡、细短、神经串珠、分叉、吻合支偶见(图4)，前基质中
可见神经干断端再生及神经分支再生(图5)。

表2 两组泪液分泌量变化情况Table 2 Tear fluid secretion of two
groups(l/mm)Note:Compared with those before surgery，*P ＜0.05?
表3 两组角膜上皮下神经丛密度变化情况Table 3 Nerve plexus density under
corneal epithelium of two groupsNote:Compared with those before surgery，*P ＜0.05?
表4 两组角膜知觉变化情况Table 4 Corneal sensation of two groupsNote:Compared with those before surgery，*P ＜0.05?
Figure 1 Nerve fibers in plexus under central corneal epithelium before LASIK.Figure 2 Anterior stroma under central corneal epithelium at 1 day after LASIK.Figure 3 Bulky nerve broken end in anterior stroma at 1 day after LASIK.Figure 4 Regeneration of nerve fibers under central corneal epithelium at 3 months after LASIK.Figure 5 Regeneration of nerve broken end in anterior stroma 图1 术前角膜中央上皮下神经丛神经纤维情况。

图2 术后1 d角膜中央上皮下前基质情况。

图3 术后1 d前基质中粗大神经断端。

图4 术后3个月角膜中央上皮下神经纤维再生情况。

图5 前基质中神经断端再生情况3 讨论
LASIK对于角膜是一种创伤性手术，对角膜神经的损伤尤为严重。

而角膜是全身神经末梢最多的部位，其丰富的感觉神经由三叉神经眼支终末支-睫状神经发出，睫状神经自角膜缘进入角膜基质形成基质神经丛，然后发出分支在前弹力层下相互吻合构成上皮下神经丛，该神经丛发出分支，垂直穿过前弹力层进入上皮，再发出神经末梢，末端膨大呈球状，分布于表层上皮细胞之间，形成上皮内神经丛，使角膜表面有着敏锐的知觉。

角膜神经分布并不均匀，以角膜中央区(角膜中央直径4 mm区域)及旁中央区(角膜中央区外2 mm区域)神经密度为最高，知觉最为敏锐[1]。

LASIK术中损伤这一区域上皮下神经丛，导致角膜知觉减退。

本研究中治疗组和对照组术后角膜上皮下神经丛密度和角膜知觉较术前明显下降，也证实了这一点。

损伤后的角膜神经何时能恢复到术前水平，各学者的观点并不一致。

Lee等[2]认为LASIK术后6个月至12个月时角膜上皮下神经丛密度才开始增加。

也有学者
研究发现角膜上皮下神经丛密度术后1 a尚未完全恢复[2-3]，即使术后2 a角膜上皮下神经丛密度接近术前水平，到术后3 a时还会再次降低[4]。

本研究结果为:术后3个月时角膜上皮下神经丛密度仅恢复到术前的35%左右，角膜知觉仅恢复到术前的70%左右。

可见LASIK术后角膜上皮下神经丛损伤后再恢复是一个复杂漫长的过程。

国内有报道称LASIK术后早期使用小牛血去蛋白提取物眼用凝胶可以促进角膜知觉的恢复[5]。

而本研究通过术后早期观察并未得出类似结论，而且在术后3个月观察期内治疗组角膜上皮下神经丛密度和对照组比较各观察时间点均无统计学差异也印证了上述结果。

LASIK术后早期，角膜上皮细胞微绒毛和微皱襞的损伤、角膜上皮的脱落和缺损、术后角膜曲率的改变、角膜表面的不规则性增加等因素均会降低泪液分泌量和泪膜的稳定性，严重者可导致术后干眼症[6-9]。

目前泪液分泌量和衡量泪膜稳定性的BUT是LASIK术后角膜损伤修复的重要评价指标，二者不仅能够反应术后干眼症的严重程度，而且能够间接评价术后角膜表面损伤的修复程度[10]。

小牛血去蛋白提取物眼用凝胶含有体积分数20%小牛血去蛋白提取物，它是从健康小牛血清中提取的不含蛋白质生物活性物质，这些物质包括氨基酸类、肽类、糖类、有机酸等多种成分，彼此间存在着天然配比，能够增强细胞对氧和葡萄糖的摄取，促进营养物质转运，有极强的促细胞生长和再生的能力。

小牛血去蛋白提取物眼用凝胶可应用于LASIK术后角结膜表面，能够促进角膜上皮、结膜上皮的修复愈合，使过度增生的肉芽组织蜕变，胶原组织重组，减少瘢痕形成，提高角膜组织的透光性，改善患者的视觉质量。

其眼用凝胶性质也可使药物有效成分长时间存在于眼内发挥作用，并且能够润滑角膜，减少眼睑对角膜上皮的机械摩擦，减轻患者异物感，提高舒适度。

本研究观察结果显示LASIK术后1个月时治疗组泪液分泌量和BUT的恢复程度明显快于对照组，其差异有统计学意义。

表明患者LASIK术后早期使用小牛血去蛋白提取物眼用凝胶能够加快角膜表面损伤的修复，有助于缓解术后早期干
眼症状。

国内有学者也观察到:小牛血去蛋白提取物眼用凝胶能够有效治疗机械性角膜上皮损伤[11]。

曾永宜等[12]研究发现小牛血去蛋白提取物眼用凝胶对白内障超声乳化术后角膜切口早期修复有帮助，对减少术后散光也有良好作用。

充分说明了小牛血去蛋白提取物眼用凝胶良好的角膜表面损伤修复能力。

小牛血去蛋白提取物眼用凝胶有着生长因子类似物活性，人们推测它可能具有促神经生长作用。

由于我们本次研究观察期较短(3个月)，尚未发现此类作用，我们期待后续更长时间的随访观察。

参考文献
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