贴壁复苏细胞的处理

贴壁复苏细胞的处理
(注：接到细胞后请尽快处理细胞)
1.将装有细胞的培养瓶取出，倒出多余的细胞培养液（培养瓶内留7ml至10ml）。

2.将细胞放置于37℃、5% CO2 培养箱中培养，次日进行扩瓶或冻存。

3.待瓶中贴壁细胞长至85%以上，即可进行冻存或传代。

4.将细胞上清倒出，加入0.25%胰酶进行消化5min（不同的培养条件，培养环境可能影响消化时间，
请在镜下观察细胞状态，细胞变圆即可停止消化）。

5.如果冻存，加入等体积的生长培养基，1000rpm离心5分钟，弃上清，加入冻存液重悬细胞（一般每
个T-25培养瓶可冻存1至3管，每管1.5ml），置于-70℃可保存3个月，长期保存置于液氮中。

6.如果传代，消化后，加入生长培养液重悬细胞（推荐用1:2~1:3比例传代），分散至新的培养瓶中，
37℃、5% CO2 培养箱中培养。

注：
细胞生长培养基：10%FBS(胎牛血清)+ 90% RPMI-1640培养液
冻存液：50%FBS（胎牛血清）+10%DMSO+40% RPMI-1640培养液。