PCR污染防控
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最好使用可高压处理的移液器。
使用带滤芯的加样枪头
（三）化学消毒
1、次氯酸钠
• 10%的次氯酸钠（漂白剂）清洗实验台面，具有氧化损伤核酸的作用。 • 在实际工作中，有些物品如放置扩增反应管的盘必需从污染区转回清洁区时，在转
回之前，应将其置于2-10%的次氯酸钠溶液中过夜，并充分冲洗。
2、乙醇
• 使用75%乙醇擦拭工作台面和超净工作台表面；
4、标本核酸模板在提 取过程中，由于加样器
污染导致标本间污染；
5、有些微生物标本尤其是病毒可随气溶胶或形 成气溶胶而扩散，导致彼此间的污染。
（二）试剂的污染 主要是在PCR试剂配制过程中，由于加样器、 容器、双蒸水及其它溶液被PCR核酸模板污染。
（三）扩增产物污染
u 最主要、最常见的污染,PCR产物数量大，远远高 于PCR检测的最低极限，所以极微量的PCR产物污染 ，就可形成假阳性。
dU法+UNG(尿嘧啶糖苷酶) • 合成引物时以dU 代dT，这样PCR产物中仅5ˊ端带dU。
UNG•处理后，引物失去了结合位点而不能扩增。该法
仅能用于引物以外试剂的处理。
（五）医疗废物处理
u 所有实验室废物均应按照生活垃圾、医用垃圾、尖 锐状废料以及破碎的玻璃器皿进行分类，尤其是感 染性废料必须高压消毒后方能处理。
三、污染的预防
医疗 废物 处理
分子 生物 学阻
断
操作 分区
预防
物理 措施
化学 消毒
（一）操作分区
1、试剂贮存和准备区
分区与 功能
• 贮存试剂的制备、试剂的分装和扩增反应混合液的准备，以及离心管、吸头等消耗 品的贮存和准备。
2、样本制备区
• 核酸（RNA、DNA）提取、贮存及其加入至扩增反应管。对于涉及临床样本的操 作，应符合生物安全二级实验室防护设备、个人防护和操作规范的要求。
四、去污染的措施
停止试验，寻找污染源。 弃用所有可疑的试剂。 工作区间彻底的清洁消毒。 更换实验设备。 改用另一对引物，扩增靶DNA的不同区域。 停用污染的实验室
2、核酸提取过程中一个空管对照的功能：
• 基本功能与阴性原血清样本相同； • 其基质为水，不含阴性原血清对照样本中
可能存在的扩增抑制物，因而对污染 的反 映更为灵敏；不能取代原血清阴性样本。
3、仅含扩增反应混合液的对照管的功能：
• 监测扩增试剂是否发生污染，具有较强的污染鉴别性。 • 如想鉴别实验室是否发生污染，可将一个或多个空管打
去污染
• 考虑PCR产物的长度与产物序列中碱基的 分布，
• UV照射仅对500bp以上长片段有效，对短 片段效果不大
• 延长照射时间，最好是照射过夜。
u2、负压排风
排风扇、负压排风装置或其他可行的方式
3、传递窗
工作流向
密封性 污染
4、物品专用
耗材、实验用移液器专区使用，尤其是PCR产物分析 所用移液器不能拿到其它两个区。
开静置于标本制备区30～60分钟，然后加入扩增反应 混合液同时以水替代核酸样本扩增，如为阳性，而上述 仅含扩增反应混合液的对照管为阴性，则说明实验室以 前扩增产物的存在。
监测目的试验是否成功的一个重要的参考标志。 选择扩增度中等、重复性好的标本。 强阳性对照可产生大量不必要的扩增序列，反 而可能成为潜在的污染源。
临床基因扩增污染的防控
新疆临床检验中心 张朝霞
主要内容
u一 u二 u三 u四
污染的来源 污染的监控 污染的预防 去污染的措施
实验室污染的防控
来 源
去
除
污染
监 控
预 防
一、污染的来源
（一）标本污染
1、收集标本的 容器被污染；
2、标本放置时， 3、容器外粘有 由于密封不严 标 本 造 成 相 互
溢于容器外； 间交叉污染；
（四）实验操作的污染
样品收集 核酸提取 扩增分析
避免交叉污染
设置不同 的对照可 以监测污 染是否发 生。
二、污染的监控
1份阴性原血清样本； 1份在标本核酸提取过程 中带入的一个空管； 1份仅含扩增反应混功能：
• 监测实验室的以前扩增产物的污染； • 由实验操作所致的标本间的交叉污染； • 扩增反应试剂的污染。
3、稀盐酸
• 用1mol/L盐酸擦拭或浸泡实验器具，使残余DNA脱嘌呤。
（四）分子生物学阻断
u 限制性核酸内切酶法。
防止扩增产 物的污染
u 修饰引物，使扩增产物被某种酶切割。
u UNG（尿嘧啶糖苷）消解法
1、限制性核酸内切酶法原理
识别双链DNA中某段特异序 列，并在识别位点或周围切割双 链DNA。
3、扩增反应区
• cDNA合成、DNA扩增及检测。
4、产物分析区
• 扩增片段的进一步分析测定，如杂交、酶切电泳、变性高效液相分析、测序等。
工作流向
顺序设置 适当合并 单一流向 专一标识
（二）物理措施
紫外照 射
（UV）
负压 排风
传递窗
物品 专用
u1、紫外照射（UV）法
消毒 • 波长（nm）254/300nm，照射30min
一般有三种类型的内切酶， 最常用的是Ⅱ型内切酶，能识别 专一的特定序列，并在该顺序内 的固定位置上切割双链。
若PCR产物内含有识别位点， 则采用核酸内切酶处理扩增试剂 后，就能去除产物污染。
2、修饰引物法原理
磷酸化（Phosphorylation）
• 3'磷酸化可抗3'外切酶消化的相关实验中，也用于 阻止DNA聚合酶催化的DNA链延伸反应。
使用带滤芯的加样枪头
（三）化学消毒
1、次氯酸钠
• 10%的次氯酸钠（漂白剂）清洗实验台面，具有氧化损伤核酸的作用。 • 在实际工作中，有些物品如放置扩增反应管的盘必需从污染区转回清洁区时，在转
回之前，应将其置于2-10%的次氯酸钠溶液中过夜，并充分冲洗。
2、乙醇
• 使用75%乙醇擦拭工作台面和超净工作台表面；
4、标本核酸模板在提 取过程中，由于加样器
污染导致标本间污染；
5、有些微生物标本尤其是病毒可随气溶胶或形 成气溶胶而扩散，导致彼此间的污染。
（二）试剂的污染 主要是在PCR试剂配制过程中，由于加样器、 容器、双蒸水及其它溶液被PCR核酸模板污染。
（三）扩增产物污染
u 最主要、最常见的污染,PCR产物数量大，远远高 于PCR检测的最低极限，所以极微量的PCR产物污染 ，就可形成假阳性。
dU法+UNG(尿嘧啶糖苷酶) • 合成引物时以dU 代dT，这样PCR产物中仅5ˊ端带dU。
UNG•处理后，引物失去了结合位点而不能扩增。该法
仅能用于引物以外试剂的处理。
（五）医疗废物处理
u 所有实验室废物均应按照生活垃圾、医用垃圾、尖 锐状废料以及破碎的玻璃器皿进行分类，尤其是感 染性废料必须高压消毒后方能处理。
三、污染的预防
医疗 废物 处理
分子 生物 学阻
断
操作 分区
预防
物理 措施
化学 消毒
（一）操作分区
1、试剂贮存和准备区
分区与 功能
• 贮存试剂的制备、试剂的分装和扩增反应混合液的准备，以及离心管、吸头等消耗 品的贮存和准备。
2、样本制备区
• 核酸（RNA、DNA）提取、贮存及其加入至扩增反应管。对于涉及临床样本的操 作，应符合生物安全二级实验室防护设备、个人防护和操作规范的要求。
四、去污染的措施
停止试验，寻找污染源。 弃用所有可疑的试剂。 工作区间彻底的清洁消毒。 更换实验设备。 改用另一对引物，扩增靶DNA的不同区域。 停用污染的实验室
2、核酸提取过程中一个空管对照的功能：
• 基本功能与阴性原血清样本相同； • 其基质为水，不含阴性原血清对照样本中
可能存在的扩增抑制物，因而对污染 的反 映更为灵敏；不能取代原血清阴性样本。
3、仅含扩增反应混合液的对照管的功能：
• 监测扩增试剂是否发生污染，具有较强的污染鉴别性。 • 如想鉴别实验室是否发生污染，可将一个或多个空管打
去污染
• 考虑PCR产物的长度与产物序列中碱基的 分布，
• UV照射仅对500bp以上长片段有效，对短 片段效果不大
• 延长照射时间，最好是照射过夜。
u2、负压排风
排风扇、负压排风装置或其他可行的方式
3、传递窗
工作流向
密封性 污染
4、物品专用
耗材、实验用移液器专区使用，尤其是PCR产物分析 所用移液器不能拿到其它两个区。
开静置于标本制备区30～60分钟，然后加入扩增反应 混合液同时以水替代核酸样本扩增，如为阳性，而上述 仅含扩增反应混合液的对照管为阴性，则说明实验室以 前扩增产物的存在。
监测目的试验是否成功的一个重要的参考标志。 选择扩增度中等、重复性好的标本。 强阳性对照可产生大量不必要的扩增序列，反 而可能成为潜在的污染源。
临床基因扩增污染的防控
新疆临床检验中心 张朝霞
主要内容
u一 u二 u三 u四
污染的来源 污染的监控 污染的预防 去污染的措施
实验室污染的防控
来 源
去
除
污染
监 控
预 防
一、污染的来源
（一）标本污染
1、收集标本的 容器被污染；
2、标本放置时， 3、容器外粘有 由于密封不严 标 本 造 成 相 互
溢于容器外； 间交叉污染；
（四）实验操作的污染
样品收集 核酸提取 扩增分析
避免交叉污染
设置不同 的对照可 以监测污 染是否发 生。
二、污染的监控
1份阴性原血清样本； 1份在标本核酸提取过程 中带入的一个空管； 1份仅含扩增反应混功能：
• 监测实验室的以前扩增产物的污染； • 由实验操作所致的标本间的交叉污染； • 扩增反应试剂的污染。
3、稀盐酸
• 用1mol/L盐酸擦拭或浸泡实验器具，使残余DNA脱嘌呤。
（四）分子生物学阻断
u 限制性核酸内切酶法。
防止扩增产 物的污染
u 修饰引物，使扩增产物被某种酶切割。
u UNG（尿嘧啶糖苷）消解法
1、限制性核酸内切酶法原理
识别双链DNA中某段特异序 列，并在识别位点或周围切割双 链DNA。
3、扩增反应区
• cDNA合成、DNA扩增及检测。
4、产物分析区
• 扩增片段的进一步分析测定，如杂交、酶切电泳、变性高效液相分析、测序等。
工作流向
顺序设置 适当合并 单一流向 专一标识
（二）物理措施
紫外照 射
（UV）
负压 排风
传递窗
物品 专用
u1、紫外照射（UV）法
消毒 • 波长（nm）254/300nm，照射30min
一般有三种类型的内切酶， 最常用的是Ⅱ型内切酶，能识别 专一的特定序列，并在该顺序内 的固定位置上切割双链。
若PCR产物内含有识别位点， 则采用核酸内切酶处理扩增试剂 后，就能去除产物污染。
2、修饰引物法原理
磷酸化（Phosphorylation）
• 3'磷酸化可抗3'外切酶消化的相关实验中，也用于 阻止DNA聚合酶催化的DNA链延伸反应。