高考生物二轮复习 专题九 现代生物技术 第19讲 基因工程和克隆技术教案-人教版高三全册生物教案

第19讲基因工程和克隆技术
[考纲要求] 1.工具酶的发现和基因工程的诞生(a)。

2.基因工程的原理和技术(b)。

3.基因工程的应用(a)。

4.活动：提出生活中的疑难问题，设计用基因工程技术解决的方案(c)。

5.植物的克隆(b)。

6.动物的克隆(a)。

1．基因工程
(1)基因工程的工具
将同一种限制性核酸内切酶切割的质粒与目的基因片段混合，加入DNA连接酶，两两连接的产物(重组DNA分子)有以下3种：目的基因与目的基因的连接物；质粒与质粒的连接物；目的基因与质粒的连接物。

其中，只有目的基因与质粒的连接物才是真正需要的。

以下是双酶切法，请思考填空：
双酶切法的优点主要在于防止质粒和目的基因自身环化以及保证目的基因单向插入质粒。

(2)基因工程的原理和技术
(3)转基因动物、植物及微生物的培育流程
(4)目的基因的表达
提醒(1)使用限制性核酸内切酶的注意点
①通常用同种限制性核酸内切酶切割载体DNA和目的基因。

②不同的限制性核酸内切酶也能切割出相同的粘性末端。

(2)DNA连接酶≠DNA聚合酶
DNA连接酶连接两个DNA片段，而DNA聚合酶只能将单个脱氧核苷酸添加到脱氧核苷酸链上。

(3)限制性核酸内切酶≠DNA酶≠解旋酶
限制性核酸内切酶是切割某种特定的脱氧核苷酸序列，并使两条链在特定的位置断开；DNA 酶是将DNA水解为基本组成单位；解旋酶是将DNA的两条链间的氢键打开形成两条单链。

(4)启动子、终止子
①启动子(DNA片段)≠起始密码子(RNA)。

②终止子(DNA片段)≠终止密码子(RNA)。

2．植物的克隆
(1)植物组织培养关键过程总结
名称过程形成体特点培养基光
脱分化
由外植体脱分
化为愈伤组织排列疏松、高度
液泡化的薄壁细
胞团
适当配比的营养物质和
生长调节剂
避光
再分化由愈伤组织分
化为幼苗或胚
状结构
有根、芽或有生
根发芽的能力
适量的生长素和细胞分
裂素配比可以诱导芽的
分化；适量的吲哚乙酸及
适当减除其他某些激素，
可以诱导生根
需光
营养生长和生殖生长发育成完整的
植物体
由根、茎、叶、
花、果实、种子
组成
自身产生各种激素需光
(2)植物细胞工程操作过程
(3)植物细胞培养、器官培养和原生质体培养的关系
3．动物的克隆
(1)动物的细胞和组织培养
①动物克隆的技术基础是动物的细胞和组织培养。

②动物细胞培养的过程：组织块的切取、组织细胞的分散及细胞培养三个阶段。

分散组织细胞常用的方法有机械消化法和胰酶消化法。

③原代培养：从机体取出后立即进行的细胞、组织培养的过程。

④传代培养：将原代培养细胞分成假设干份，接种到假设干份培养基中，使其继续生长、增殖的过程。

⑤动物成纤维细胞的培养过程：切取组织小片→胰蛋白酶酶解→原代培养→传代培养。

(2)动物的细胞融合技术及其应用
①细胞融合
②单克隆抗体的制备
提醒 与单克隆抗体的制备有关的5个易错点
(1)动物细胞培养中两次用到胰蛋白酶，第一次的目的是处理剪碎的组织使之分散成单个细胞，第二次的目的是使贴壁细胞从瓶壁上脱落下来，分散成单个细胞。

(2)动物细胞培养过程中通入CO 2的目的是调节pH 。

(3)动物细胞培养的目的是获得大量的细胞群体，而动物组织培养的目的是获得动物的器官和组织。

(4)一般抗血清中的抗体是一群识别不同抗原部位的抗体混合物，而单抗专一性识别抗原分子的特殊部位，比一般抗血清优越。

(5)动物克隆的原理：动物细胞核的全能性；动物克隆的技术基础：动物的细胞和组织培养；动物细胞、组织培养的原理：细胞的增殖。

(3)细胞核移植实验和动物的克隆繁殖
①核移植：利用一个细胞的细胞核(供体核)来取代另一个细胞中的细胞核，形成一个重建的“合子〞。

②动物的克隆繁殖
⎭
⎪⎬⎪⎫卵细胞→细胞质体细胞→细胞核→重组细胞→早期胚胎→另一雌性个体代孕→克隆动物
提醒 规避克隆动物与试管动物的3个误区
(1)误区一：试管动物与克隆动物的产生都是无性生殖。

纠正：试管动物的产生是有性生殖，克隆动物的产生是无性生殖。

(2)误区二：试管动物(哺乳类)的产生是在体外进行的，克隆动物(哺乳类)的产生是在体内进行的。

纠正：试管动物(哺乳类)和克隆动物(哺乳类)早期胚胎之前都是在体外进行的，早期胚胎经
过胚胎移植之后都是在体内进行的。

(3)误区三：胚胎移植的优势是充分发挥雌性优良个体的繁殖潜力，因此胚胎移植的胚胎只能来自体内受精的胚胎。

纠正：胚胎移植的胚胎有三个来源：体内正常受精产生的胚胎、核移植产生的重组细胞培养而来的胚胎、体外受精产生的早期胚胎。

1．基因工程的正误判断
(1)限制性核酸内切酶作用于DNA分子的氢键，使DNA双链断开 ( ×)
提示限制性核酸内切酶作用于磷酸二酯键。

(2)DNA连接酶能将两碱基间形成的氢键连接起来( ×)
提示DNA连接酶是将两个核苷酸之间形成的磷酸二酯键连接起来。

(3)质粒是小型环状DNA分子，是基因工程常用的载体( √)
(4)DNA连接酶能够将任意2个DNA片段连接在一起( ×)
提示DNA连接酶将具有末端碱基互补的2个DNA片段连接在一起。

(5)抗虫基因即使成功地插入到植物细胞染色体上也未必能正常表达( √)
(6)限制性核酸内切酶能够特异性识别并切割烟草花叶病毒遗传物质( ×)
(7)基因工程的工具酶包括限制性核酸内切酶、DNA连接酶及质粒( ×)
提示质粒是基因工程的载体，不属于工具酶。

(8)土壤农杆菌转化法是将目的基因与农杆菌质粒重组，然后将重组DNA分子导入植物受体细胞( ×)
(9)构建基因文库时需包含目的基因( √)
(10)基因治疗是向目的细胞中导入正常基因以替换细胞中不正常的基因( ×)
提示基因治疗是向目标细胞中引入正常功能的基因，以纠正或补偿基因的缺陷。

2．克隆技术的正误判断
(1)棉花根尖细胞经诱导形成幼苗能表达细胞全能性( √)
(2)植物的每个细胞在植物体内和体外都能表现出细胞的全能性( ×)
提示在生物体内，由于基因的选择性表达，细胞不能表现出全能性，而是分化成为不同的组织、器官，细胞表现全能性的必要条件是离体状态、一定的营养物质和激素等外界条件。

(3)在诱导离体菊花茎段形成幼苗的过程中，不会发生细胞的增殖和分化( ×)
提示植物组织培养包括脱分化和再分化两个过程，在这两个过程中都会发生细胞增殖(有丝分裂)，且在再分化过程中发生细胞分化，形成各种组织细胞。

(4)制备原生质体时，采用低渗甘露醇，防止原生质体失水过多失去生物活性 ( ×)
提示低渗甘露醇使原生质体吸水膨胀破裂，应采用0.5～0.6 mol/L的甘露醇溶液。

(5)用纤维素酶和果胶酶水解法获得的植物原生质体失去了全能性( ×)
提示原生质体具有全能性。

(6)连续细胞系的细胞大多具有二倍体核型( ×)
提示连续细胞系被认为是发生转化了的细胞系，大多数具有异倍体核型。

(7)制备肝细胞悬浮液时先用剪刀剪碎肝组织，再用胃蛋白酶处理( ×)
提示制备肝细胞悬浮液时先用剪刀剪碎肝组织，再用胰蛋白酶处理，但不能使用胃蛋白酶，因为胃蛋白酶需要在强酸环境下起作用，但这样的环境不适于细胞生存。

(8)肝细胞培养过程中通常在培养液中通入5%的CO2刺激细胞呼吸( ×)
提示肝细胞培养过程中通常在培养液中通入5%的CO2的目的是维持培养液中的pH。

(9)与“多莉〞羊等克隆哺乳动物相关的技术有胚胎移植、细胞培养、早期胚胎培养和核移植等( √)
(10)植物原生质体融合和动物细胞融合原理是相同的( √)
(11)杂交瘤细胞进行体内培养，是为了获得单克隆抗体的胚胎( ×)
提示杂交瘤细胞进行体内培养，是为了获得单克隆抗体。

考向一考查基因工程
1．(2019·某某，9)B基因存在于水稻基因组中，其仅在体细胞(2n)和精子中正常表达，但在卵细胞中不转录。

为研究B基因表达对卵细胞的影响，设计了如下实验。

据图回答：
(1)B基因在水稻卵细胞中不转录，推测其可能的原因是卵细胞中________(单项选择)。

A．含B基因的染色体缺失
B．DNA聚合酶失活
C．B基因发生基因突变
D．B基因的启动子无法启动转录
(2)从水稻体细胞或________________中提取总RNA，构建________文库，进而获得B基因编码蛋白的序列。

将该序列与Luc基因(表达的荧光素酶能催化荧光素产生荧光)连接成融合基因(表达的蛋白质能保留两种蛋白质各自的功能)，然后构建重组表达载体。

(3)在过程①、②转化筛选时，过程______中T－DNA整合到受体细胞染色体DNA上，过程________在培养基中应加入卡那霉素。

(4)获得转基因植株过程中，以下鉴定筛选方式正确的选项是________(多项选择)。

A．将随机断裂的B基因片段制备成探针进行DNA分子杂交
B．以Luc基因为模板设计探针进行DNA分子杂交
C．以B基因编码蛋白的序列为模板设计探针与从卵细胞提取的mRNA杂交
D．检测加入荧光素的卵细胞中是否发出荧光
(5)从转基因植株未成熟种子中分离出胚，观察到细胞内仅含一个染色体组，判定该胚是由未受精的卵细胞发育形成的，而一般情况下水稻卵细胞在未受精时不进行发育，由此说明________________________________________________________________________。

答案(1)D (2)精子cDNA (3)②①(4)BCD (5)B基因表达能使卵细胞不经受精直接发育成胚
解析(1)启动子是一段有特殊结构的DNA片段，是RNA聚合酶识别和结合的部位，能驱动基因转录出mRNA。

B基因存在于水稻基因组中，其仅在体细胞和精子中正常表达，但在卵细胞中不转录，推测最可能的原因是卵细胞中B基因的启动子无法启动转录，D项符合题意。

(2)B 基因在体细胞和精子中正常表达，说明在水稻的体细胞和精子中有B基因转录而来的mRNA。

从水稻体细胞或精子中提取总RNA，逆转录产生多种互补DNA片段，与载体连接后储存在一个受体菌群中，这个受体菌群体就叫做水稻的cDNA文库。

(3)过程①是指将含有目的基因的重组Ti质粒转入农杆菌，过程②是指将含有重组Ti质粒的农杆菌导入植物细胞，并且整合到受体细胞染色体DNA上。

为了检测含有目的基因的重组Ti质粒是否转入农杆菌，过程①需在培养基中加入卡那霉素。

(4)DNA分子杂交是将转基因生物的基因组DNA提取出来，在含有目的基因的DNA片段上用放射性同位素等作标记，以此作为探针，将探针与基因组DNA杂交，看是否出现杂交带。

将随机断裂的B基因片段制备成探针进行DNA分子杂交，不能用于筛选含目的基因的转基因植株，A项错误；B­Luc融合基因中含有水稻B基因编码蛋白的序列和Luc基因，因此，以Luc基因为模板设计探针进行DNA分子杂交可达到实验目的，B项正确；转基因植株卵细胞中的B基因能够转录出mRNA，因此以B基因编码蛋白的序列为模板设计探针与从卵细胞提取的mRNA杂交可达到实验目的，C项正确；Luc基因表达的荧光素酶能催化
荧光素产生荧光，因此检测加入荧光素的卵细胞中是否发出荧光，可以达到实验目的，D项正确。

(5)一般情况下水稻卵细胞在未受精时不进行发育，而在转基因植株中能发现由未受精的卵细胞发育形成的胚，说明B基因表达能使卵细胞不经受精直接发育成胚。

2．以下图为获得转基因抗虫棉的流程图。

请据图回答以下问题：
(1)该过程先后涉及___________技术和植物克隆技术，后者的技术基础是________________，过程中两次筛选的目的分别是筛选______________________________和抗虫植株。

(2)以下关于Ti质粒的表达中，错误的选项是________。

a．含有DNA复制起点b．具有限制性核酸内切酶的识别序列
c．是大肠杆菌拟核外的环状DNAd．含有控制质粒DNA转移的基因
(3)图中A是将含愈伤组织培养物的试管放在________(仪器)上，通过________培养得到单细胞，这种单细胞依次到细胞团、球形胚、心形胚和[B]________，最后长成植株。

(4)以下关于图中单细胞特征的表达，错误的选项是________。

a．细胞质丰富b．液泡大c．细胞核大d．未分化
答案(1)基因工程(转基因) 植物组织培养含目的基因的受体细胞(2)c (3)摇床(液体)悬浮胚状体(4)b
解析(1)转基因植物培育过程中涉及基因工程技术和植物克隆技术，植物克隆技术的基础是植物组织培养，进行转基因操作，将含有目的基因的重组DNA分子导入受体细胞后，需进行筛选，筛选含有目的基因的受体细胞。

(2)质粒上含有DNA的复制起点，有利于质粒DNA进行复制，a正确；质粒上具有一个至多个限制性核酸内切酶的识别位点，b正确；Ti质粒是农杆菌拟核外的环状DNA，c错误；Ti质粒能将目的基因转移到受体细胞的染色体上，其上含有控制质粒DNA转移的基因，d正确。

(3)分析图示可知，图中A是将含有愈伤组织培养物的试管放在摇床上，通过液体悬浮培养得到单细胞，这种单细胞经过培养基中成分的诱导，可以发生类似受精卵经过卵裂、分化、器官发生和形态建成而发育成胚的过程，即从单细胞依次到细胞团、球形胚、心形胚和胚状体，最后再长成完整植株。

(4)单细胞具有细胞核大、核仁明显、细胞质丰富、液泡小、未分化等特点。

3．(2018·某某，31)甜蛋白是一种高甜度的特殊蛋白质。

为了改善黄瓜的品质，科学家采用农杆菌转化法将一种甜蛋白基因成功导入黄瓜细胞，得到了转基因植株。

回答以下问题：(1)用农杆菌感染时，应优先选用黄瓜________(填“受伤的〞或“完好的〞)叶片与含重组质
粒的农杆菌共培养，选用这种叶片的理由是_____________________________________。

(2)假设在转基因黄瓜中检测到这种甜蛋白，那么说明该重组质粒中______________已转移到植物细胞中且能够表达；用该转基因黄瓜的某一植株与一株非转基因植株杂交，发现子代中含甜蛋白个体数与不含甜蛋白个体数之比为1∶1，那么说明甜蛋白基因已经整合到____________(填“核基因组〞“线粒体基因组〞或“叶绿体基因组〞)中。

(3)假设某种转基因作物因为受到病毒感染而减产，假设要以该转基因作物为材料获得脱毒苗，应选用__________作为外植体进行组织培养。

(4)通常，基因工程操作主要有4个步骤，即获得目的基因、形成重组DNA分子、将目的基因导入受体细胞、目的基因的检测与鉴定。

因此，基因工程的含义可概括为_____________
_____________________________________________________________________________。

答案(1)受伤的叶片伤口处的细胞释放出大量酚类物质，可吸引农杆菌移向这些细胞(2)甜蛋白基因核基因组(3)茎尖(4)按照人们的愿望进行设计，并通过体外重组和转基因等技术，赋予生物新的遗传特性，创造出符合人们需要的新生物类型
解析(1)用农杆菌感染时，应优先选用黄瓜受伤的叶片与含重组质粒的农杆菌共培养，理由是叶片伤口处的细胞会释放出大量酚类物质，可吸引农杆菌移向这些细胞。

(2)假设在转基因黄瓜中检测到这种甜蛋白，那么说明该重组质粒中甜蛋白基因已转移到植物细胞中且能够表达；用该转基因黄瓜的某一植株与一株非转基因植株杂交，发现子代中含甜蛋白个体数与不含甜蛋白个体数之比为1∶1，那么说明甜蛋白基因已经整合到核基因组中。

(3)假设某种转基因作物因为受到病毒感染而减产，假设要以该转基因作物为材料获得脱毒苗，应选用茎尖作为外植体进行组织培养。

(4)通常，基因工程操作主要有4个步骤，即获得目的基因、形成重组DNA分子、将目的基因导入受体细胞、目的基因的检测与鉴定。

因此，基因工程的含义可概括为按照人们的愿望进行设计，并通过体外重组和转基因等技术，赋予生物新的遗传特性，创造出符合人们需要的新生物类型。

考向二考查克隆技术
4．(2019·某某期末)如图中①②③代表通过植物组织培养技术培育新植株的三条途径，请回答以下问题：
(1)外植体a、b、c来自同种植株，植株A、B、C中的细胞，全能性表达程度________(填“相同〞或“可能不同〞)。

(2)途径②和③需要用到________________和________________(填培养基的物理性质)两种培养基。

将含B1的试管放在摇床上，通过____________培养可以分散成单细胞。

(3)外植体c脱去细胞壁过程中需要加入适宜浓度的________(A.甘露醇B．盐酸C．蒸馏水D．氯化钠)以保持一定的渗透压。

原生质体培养成功标志着________________技术又向前迈进了一步。

(4)通过大量培养特定细胞系，可以实现能产生重要________________(如某些中药)的细胞的大量克隆和产物的工业化生产。

答案(1)可能不同(2)液体培养基固体(或半固体)培养基液体悬浮(3)A 植物细胞工程(4)次生代谢产物
解析(1)外植体a、b、c来自同种植株，由于不同细胞的分化程度不同，因此植株A、B、C 中的细胞全能性表达程度可能不同。

(2)途径②③中均用到摇床，因此需要用液体培养基，而获得愈伤组织的过程需要用到固体(或半固体)培养基。

将含B1的试管放在摇床上，通过液体悬浮培养可以分散成单细胞。

(3)外植体c脱去细胞壁过程中需要加入适宜浓度的甘露醇以保持一定的渗透压。

原生质体培养成功标志着植物细胞工程技术又向前迈进了一步。

(4)通过大量培养特定细胞系，可以实现能产生重要次生代谢产物(如某些中药)的细胞的大量克隆和产物的工业化生产。

易混易错植物克隆的相关技术
外植体脱分化形成愈伤组织(薄壁细胞)，再分化发育成幼胚，进而形植物组织培养
成植株
液体悬浮培养愈伤组织在摇床上分散成单个细胞，再发育成胚状体，进而形成植株利用纤维素酶和果胶酶分解细胞壁，获得原生质体，用适当方法进行原生质体培养
原生质体培养，获得新植株
利用植物细胞全能性将植物细胞培养成完整植株，克服远缘杂交不亲转基因技术
和的障碍，定向改造植物的性状
利用植物细胞全能性将杂种细胞培养成完整植株，克服远缘杂交不亲植物体细胞杂交
和的障碍
花药离体培养进行单倍体克隆，获得单倍体植株
5.以下图是制备分泌抗X抗体的过程，根据图示回答以下问题：
(1)给小鼠注射抗原的目的是____________。

(2)由图中可看出，单克隆抗体制备过程运用了________________和________________技术，前者常用的诱导剂与植物原生质体融合不同的是____________。

(3)动物细胞培养液的配方通常含有葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素等，与植物细胞培养基有所不同的是，还含有________________。

(4)在动物细胞融合过程中，需要将所选取的组织细胞分散开，以利于细胞融合，可用____________处理离体组织细胞使之分散开。

(5)图中有两次筛选过程，其中步骤④的目的是筛选出____________，步骤⑤⑥的目的是筛选出___________________________________________________________________________。

答案(1)产生相应的B淋巴细胞(或效应B细胞)(2)动物细胞融合动物细胞培养灭活的病毒(3)动物血清(4)胰蛋白酶(5)杂交瘤细胞能产生特定抗体的杂交瘤细胞
解析(1)单克隆抗体制备过程中给小鼠注射抗原的目的是产生相应的B淋巴细胞(或效应B 细胞)。

(2)分析题图可知，单克隆抗体制备过程运用了动物细胞融合和动物细胞培养技术，动物细胞融合常用的诱导剂与植物原生质体融合不同的是灭活的病毒。

(3)动物细胞培养液的配方与植物细胞培养基不同的是，还含有动物血清。

(4)用胰蛋白酶处理离体组织可使细胞分散开。

(5)步骤④的目的是筛选出杂交瘤细胞，步骤⑤⑥的目的是筛选出能产生特定抗体的杂交瘤细胞。

6．(2019·某某4月选考)回答与利用生物技术培育抗病品种有关的问题：
(1)通过抗病性强的植株获取抗病目的基因有多种方法。

现已获得纯度高的抗病蛋白(可作为抗原)，可通过________技术获得特异性探针，并将________中所有基因进行表达，然后利用该探针，找出能与探针特异性结合的表达产物，进而获得与之对应的目的基因。

(2)将上述抗病基因通过转基因的方法导入植物的分生组织可获得抗病性强的植株。

假设在试管苗期间用分子水平方法判断抗病基因是否表达，应检测________。

A．质粒载体B．转录产物
C．抗性基因D．病原微生物
(3)植物细胞在培养过程中往往会发生________，可利用这一特性筛选抗致病真菌能力强的细胞。

筛选时在培养基中加入________________，并将存活的细胞进一步培养至再生植株。

假设利用______________培养建立的细胞系用于筛选，那么可快速获得稳定遗传的抗病植株。

(4)用抗病品种与高产品种进行杂交育种过程中，有时会遇到因胚发育中止而得不到可育种子的情况。

假设要使该胚继续发育获得植株，可采用的方法是____________________________。

答案(1)单克隆抗体基因文库(2)B (3)变异高浓度致病真菌花粉离体(4)胚的离体培养
解析(1)该特异性探针作用的对象是蛋白质类抗原，所以该探针是抗体，可通过单克隆抗体技术获得特异性探针。

用基因文库筛选某种目的基因的操作过程可以是先将基因文库中所有基因进行表达，然后利用该探针，找出能与探针特异性结合的表达产物，进而获得与之对应的目的基因。

(2)用分子水平方法判断抗病基因是否表达，应检测转录产物。

(3)植物细胞在培养过程中往往会发生变异，筛选抗致病真菌能力强的细胞时可在培养基中加入高浓度致病真菌，并将存活的细胞进一步培养至再生植株。

假设要快速获得稳定遗传的抗病植株，可用花粉离体培养建立的细胞系用于筛选。

(4)假设要使该胚继续发育获得植株，可采用的方法是胚的离体培养。

1．(2019·某某某某9月联考)回答与动物克隆有关的问题：
(1)广义的动物组织培养包括________________和器官培养，器官培养是指______________、器官的一部分或整个器官在体外和人工控制的条件下得以保存、生长，在此过程中保持器官的结构、功能及分化能力。

(2)细胞融合是细胞工程的主要技术手段之一，其中电融合技术的原理是在低压交流电场中______________________________________；而细胞杂交是______________的细胞间的融合。

(3)单克隆抗体的制备中，往往在经过免疫的动物的______(器官)中获取能产生抗体的效应B 细胞，经融合和筛选再培养，筛选的目标是_____________________________________。

(4)假设想通过基因工程制备大量的单一抗体，以下方法可行的是( )
A．将抗体基因直接导入小鼠骨髓瘤细胞
B．将含有抗体基因的重组DNA分子导入小鼠骨髓瘤细胞
C．将含有抗体基因的重组DNA分子导入人的效应B细胞
D．将含有调控抗体产生基因的重组DNA分子导入人的效应B细胞
答案(1)细胞培养、组织培养器官的原基(2)击穿质膜脂双层，导致胞质融通不同基因型(3)脾脏获得既能产生特异抗体又能无限增殖的杂交瘤细胞(4)B
解析(1)广义的动物组织培养包括细胞培养、组织培养和器官培养，器官培养是指器官的原基、器官的一部分或整个器官在体外和人工控制的条件下得以保存、生长，在此过程中保持器官的结构、功能及分化能力。

(2)电融合技术依据的原理是在低压交流电场中击穿质膜脂双层，导致胞质融通；细胞杂交是不同基因型的细胞间的融合。

(3)单克隆抗体的制备中，往往在经过免疫的动物的脾脏中获取能产生抗体的效应B细胞，经融合和筛选再培养，筛选的目标是获得既能产生特异抗体又能无限增殖的杂交瘤细胞。

(4)假设通过基因工程制备大量单一抗体，可将含有抗体基因的重组DNA分子导入小鼠骨髓瘤细胞，在该细胞内表达产生相应的抗体。

2．以下图是某研究小组利用基因工程技术将抗农药马拉硫磷小菜蛾的羧酸酯酶(CarE)基因导入大肠杆菌内，制备“工程菌〞的示意图。

据图回答以下问题：
(1)过程①是以mRNA为模板，在______________的催化下，合成互补的单链DNA，然后在____________的作用下合成双链DNA，从而获得所需基因。

(2)过程②需要使用______________扩增目的基因，需要在反应体系中添加的有机物质有引物、模板DNA、4种脱氧核糖核苷酸和____________________。

(3)CarE基因和质粒用_______________切割后，通过DNA连接酶连接，形成重组DNA分子。

(4)过程③是将目的基因导入大肠杆菌细胞，在基因工程中通常用的方法为________。

A．Ca2＋处理大肠杆菌B．显微注射法
C．农杆菌转化法D．基因枪法
(5)过程④可利用________________(分子检测技术)鉴定目的基因是否已导入受体细胞。

(6)以上过程中，________是基因工程的核心步骤。

A．过程①和②B．形成重组DNA分子
C．过程③D．过程④。