4.1酶活性测定有哪些方法
合集下载
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
Ks+[S]+常数
③由于酶偶联技术的应用连续监测法的应用范围得以 大大地扩展(无需S、P间有特性差异)
④除上述两法外还有其他一些方法：平衡法
平衡法（又称终点法）
通过测定酶反应开始至反应达到平衡时 产物或底物浓度总变化量来求出酶活力的方 法。
谢 谢！
优点：动态了解反应v,易区分零级和一级反应期及延滞期 缺点：a.测定时需保温
b.检测有限制：△被测物S与P间理化特性要有差异 △显色剂对酶活性无影响
保温装置
注意：
①连续监测法测定包括了: 延滞期、线性期、非线性期(动态期)v 平衡期v
动态定量描述：早期称动态法
②速度计算;
a.线性期，初v符合米氏方程的变量关系
定时法可能引起的误差
A.两点间呈线性（少见） B.线性期短，大部分
为非线性(最常见) C.包括了延滞期 D.包括延滞期和非线性部分
∵测定不够准确，
实际测得平均v 结果偏低
定时法可能引起的误差示义图
[P]
A
D
C
B
t0
t
t
连续监测法：
定义：连续 (间隔15”~1’)测定酶反应过程中某一反应产物 或底物浓度随时间的变化来求酶反应初速度的方 法 — 动力学方法, 速率法
非线性期v不能简单地按米氏方程的计算它是表观速度vapp或称反应净速度存在逆反应实际酶测定时的时间进程曲线图表观速度vappor称反应净速度vms常数kss常数由于酶偶联技术的应用连续监测法的应用范围得以大大地扩展无需sp间有特性差异除上述两法外还有其他一些方法
酶活性测定有哪些方法
Progress curve of a typical enzyme reaction
定时法(又称固定时间法，取样法，两点法)
定义：通过测定酶反应开始后某一时间内产物或底物浓度 的总变化量来求酶反应初速度的方法：
(如：比色法介绍的方法) 优点：a.简单 b.测定时酶反应已终止，无需保温 c.显色
剂选择时无需考虑对E活性的影响 缺点：测定可存在误差，须经预试验了解，反应v呈线性
的时间, 实际测定工作中少见呈线性
Vm[S]
v= Km+[S]
, Vm = kp[E] v0 = k0[S]0
b.非线性期，v不能简单地按米氏方程的计算，它 是表观速度(Vapp)或称反应净速度 ∵存在逆反应
动态期 延滞期 线性期 非线性期 [P]
平衡期
t 实际酶测定时的时间进程曲线图
Hale Waihona Puke 表观速度(Vapp)or称反应净速度
Vm[S]-常数 Vapp =
③由于酶偶联技术的应用连续监测法的应用范围得以 大大地扩展(无需S、P间有特性差异)
④除上述两法外还有其他一些方法：平衡法
平衡法（又称终点法）
通过测定酶反应开始至反应达到平衡时 产物或底物浓度总变化量来求出酶活力的方 法。
谢 谢！
优点：动态了解反应v,易区分零级和一级反应期及延滞期 缺点：a.测定时需保温
b.检测有限制：△被测物S与P间理化特性要有差异 △显色剂对酶活性无影响
保温装置
注意：
①连续监测法测定包括了: 延滞期、线性期、非线性期(动态期)v 平衡期v
动态定量描述：早期称动态法
②速度计算;
a.线性期，初v符合米氏方程的变量关系
定时法可能引起的误差
A.两点间呈线性（少见） B.线性期短，大部分
为非线性(最常见) C.包括了延滞期 D.包括延滞期和非线性部分
∵测定不够准确，
实际测得平均v 结果偏低
定时法可能引起的误差示义图
[P]
A
D
C
B
t0
t
t
连续监测法：
定义：连续 (间隔15”~1’)测定酶反应过程中某一反应产物 或底物浓度随时间的变化来求酶反应初速度的方 法 — 动力学方法, 速率法
非线性期v不能简单地按米氏方程的计算它是表观速度vapp或称反应净速度存在逆反应实际酶测定时的时间进程曲线图表观速度vappor称反应净速度vms常数kss常数由于酶偶联技术的应用连续监测法的应用范围得以大大地扩展无需sp间有特性差异除上述两法外还有其他一些方法
酶活性测定有哪些方法
Progress curve of a typical enzyme reaction
定时法(又称固定时间法，取样法，两点法)
定义：通过测定酶反应开始后某一时间内产物或底物浓度 的总变化量来求酶反应初速度的方法：
(如：比色法介绍的方法) 优点：a.简单 b.测定时酶反应已终止，无需保温 c.显色
剂选择时无需考虑对E活性的影响 缺点：测定可存在误差，须经预试验了解，反应v呈线性
的时间, 实际测定工作中少见呈线性
Vm[S]
v= Km+[S]
, Vm = kp[E] v0 = k0[S]0
b.非线性期，v不能简单地按米氏方程的计算，它 是表观速度(Vapp)或称反应净速度 ∵存在逆反应
动态期 延滞期 线性期 非线性期 [P]
平衡期
t 实际酶测定时的时间进程曲线图
Hale Waihona Puke 表观速度(Vapp)or称反应净速度
Vm[S]-常数 Vapp =