拟南芥CDF家族基因AtMTP6的功能的研究

拟南芥ＣＤＦ家旅基因』ｆ４，７珊的功能研究
疏水图和实验数据表明ｃＤＦ蛋白一般含有６个ＴＭ”１。

把如嘭恸鲥翻译后融合在来自￡脚托ＩＪ』－曲ｍ力ｓｃＨ：３４的ＣｚｃＤ蛋白序列的不同位置，氨基端的四个跨膜序列得到了确定”’。

一个类似的实验，用半胱氨酸特异的生物素标记Ｆｉｅｒ的内一ＴＭ螺旋，从实验数据司见有六个ＴＭ。

此外，圆形二向色性分光镜分析ＦｉｅＦ和ｃｚｃＤ表明它们含ｌｌｎｏｌＱ一螺旋内容物，超过５０％，支持ｃＤＦ蛋白是螺旋的假说。

然而三级结构还处于观察当中，已经有些个例揭示其四级结构。

Ｅｃｏ』＿ｆ中的ＦｉｅＦ蛋白设想为一个同型二聚体结构”…。

这些分析是基于一项由ＨＰＬｃ大小分离和光吸收相结合的技术，这些技术有助于排除大小和蛋白溶解所必需的胶态结构的影响。

已有一系列的去垢剂用来制造这些胶态，但是，据统计均衍生分子量为６８ＫＤａ的相同蛋白，
是疗驴基因产物的两倍”１１。

此外，杨树杂交后代中克隆的ｃＤＦ锌转运基因尸｝舰能在体外形成同型寡聚体，并且能被ＤＴＴ所干扰，
表明二硫键在它们的形成中有重要的作用阻“。

实际上，通过Ｈｇ离子
调节的ｃ”’位半胱氨酸交联，ＦｉｅＦ二聚体能持续稳定地存在，然而，目前还没有任何数据表明这些化学键在体内出现，二聚体形成的可能性同样表现在拟南芥爿ｆ村妒，基因中。

图１—１ｚＩＰ和ＣＤＰ蛋白结构特征
ｚＩＰ和ＣＤＦ蛋白作为比较普遍的转运系统，在结构上存在一些区
别，如图卜１，ＺＩＰ和ＣＤＦ（ｚｎＴ）成员其预测结构为：Ａ．ｚＩＰ推测有８
硕士学位论文
Ｐｓ０ＲＴ在线工具预测其亚细胞定位结果与实验一致，且可能定位于线粒体膜上。

ＡＢ
图３—１ｄＡｔＭＴＰ６的亚细胞定位。

Ａ，ＡｔｊＩＴＰ６融合ＧＦＰ的
转基因植物共聚焦观察：Ｂ，ＧＦＰ转基因植物共聚焦观
３．１１植物表型观察
３．１１．１月ｔ胛７邢的过表达对植物种子色泽和大小的影响
如图３—１５，ｗｉｌｄ、ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ、ｍｕｔａｎｔ、ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｔｉｏｎ四种植物的种子进行比较，可以发现ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ１ｉｎｅ的种皮颜色要较浅且种子尺寸较小，可见月￡朋阳基因可能与种皮内色素转运和种子大小的决定有关系。

圈３．１３转基因植物筛选。

其中绿色植物图３—１５四个¨ｎｅ种子颜色对比
为转化成功的植物
３．１１．２一ｆ彤珊的过表达转基因植物对ＥｔＢｒ的敏感性分析四个ｌｉｎｅ（ｗ、ｍ、ｃ、ｏ）的种子在正常的或含不同浓度的ＥｔＢｒ
３４
拟南芥ＣＤＦ家族基因』￡胛阳的功能研究
平板上生长时，正常平板上的生长如图３—１６，可见四种材料基本一致；但在含ＥｔＢｒ的平板上生Ｉ圭时，当浓度达到４ｌｌｇ／ｍＬ、８ｕｇ／ⅢＬ时，过表达植物出现明显致死的表型，而其它三个材料生长虽然也在一些部分表现出抑制现象，如根比较短，但还是比较正常，叶片还是呈绿色。

可见过表达月｝棚阳基因后，在ＥｔＢｒ含量较多的环境中，它将ＥｔＢｒ转运进入线粒体中，从而使线粒体中积累较多的ＥｔＢｒ，造成对植株毒性，从而植物死亡，８ｕｇ／ｍＬＥｔＢｒ上生长结果见图３一１７。

图３一１６四个¨ｎｅ材料在正常平板上的生Ｋ
圜３１７四个ｌｉｎｅ村料在ＥｔＢｒ平板上的生长
３．１１．３月ｔ肜，邢的过表达植物对甘露醇敏感性分析
甘露醇在较高浓度时能影响植物的萌发，是渗透胁迫的主要化学物品，本实验用来检测此基因是否受渗透胁迫的影响。

当四个ｌｉｎｅ的种子在不同浓度的甘露醇平板上生长时，从Ｏ．２Ｍ开始ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｉｎｅ的萌发就明显要比其它三个１ｉｎｅ羞，当到０．３Ｍ、０．４Ｍ时，ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｉｎｅ基本上不能萌发，Ｉ面其它均能正常萌发，如图３—１８，可见月￡胛阳的过表达使植物对甘露醇更加敏
＿碗士学位论文
感，萌发率降低。

图３１８四个ｌｉｎｅ在Ｍａｎｎｉｔ０１上的生长
３．１１．４爿ｔ彬珊的过表达对植物发育期的影晌
四个ｌｉｎｅ的植株在相同条件下生长时，不管种在Ｍｓ培养基上还是直接种在蛭石中，都可以发现ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｉｎｅ的植物开花要比其它三个１ｉｎｅ早很多，其它三个的开花时间比较一致，如图３一１９，ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｉｎｅ已经】町以看到荚果了，但是其它三个还未见抽苔，可见ＡｔＭＴＰ６基因可能参与植物开花调控过稗。

图３一１９』Ｅ舯阳的过表达转基因植物开花明显要早于其它三个材料。