双重荧光定量RT-PCR法检测肠道病毒方法的建立及应用

双重荧光定量RT-PCR法检测肠道病毒方法的建立及应用葛霞琴;陈凌晓;王帅;毛佳燕;陈瑜;崔大伟;谢国良;陈理华;王祥;郑书发;余斐;秦志梅;范剑
【期刊名称】《临床检验杂志》
【年(卷),期】2012(30)6
【摘要】目的建立检测肠道病毒(EV)、B1型柯萨奇病毒(CVB1)的双重荧光定量RT-PCR法.方法用Primer Express 3.0软件设计特异性引物和探针,优化双重荧光定量RT-PCR反应体系,建立标准曲线并评价该法的灵敏度、特异性和重复性,用该法检测150份病毒性心肌炎患儿治疗前肛拭子和29份治疗后粪便标本,并与文献提供的PCR法进行对比.结果该法对EV、CVB1型肠道病毒检测具有较高特异性,检出限均为2×10-2 TCID50/mL;具有较好的重复性,CV均＜2.3％;标准曲线的相关系数(r2)分别为0.999和0.997,扩增效率(％)分别为98.809和96.564;179份临床标本用该法检测95份为EV病毒,其中59份为CVB1病毒,与文献提供的PCR 法结果符合率为98.88％(P均＞0.05).结论建立的双重荧光定量RT-PCR法可同时检测并区分EV和CVB1型病毒,适用于病毒性心肌炎临床标本的检测.
【总页数】3页(P421-423)
【作者】葛霞琴;陈凌晓;王帅;毛佳燕;陈瑜;崔大伟;谢国良;陈理华;王祥;郑书发;余斐;秦志梅;范剑
【作者单位】浙江大学医学院附属第一医院检验科,杭州310003;浙江大学医学院附属第一医院检验科,杭州310003;浙江大学医学院附属第一医院检验科,杭州310003;浙江大学医学院附属第一医院检验科,杭州310003;浙江大学医学院附属第一医院检验科,杭州310003;浙江大学医学院附属第一医院检验科,杭州310003;
浙江大学医学院附属第一医院检验科,杭州310003;浙江大学医学院附属儿童医院儿科,杭州310003;湖州市中心医院检验科,浙江湖州313000;浙江大学医学院附属第一医院检验科,杭州310003;浙江大学医学院附属第一医院检验科,杭州310003;浙江大学医学院附属第一医院检验科,杭州310003;浙江大学医学院附属第一医院检验科,杭州310003
【正文语种】中文
【中图分类】R512.5;Q786
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