waters日常维护及操作
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简单，如同抽真空一起使用，其效果很好。但容易造成流动相组 成的变化
抽真空
同上，一般在溶剂抽滤的同时，也有脱气的效果
超声波
简单，但效果一般。超声时间不要太长(1分钟左右即可)
通惰性气体（一般用氦气）
可保持连续脱气，多用于低压梯度
在线脱气机
可保持连续脱气，多用于低压梯度
工作环境 流动相 进样器 在线过滤器 色谱柱 数据处理装置
电源及地线 泵 保护柱 连接管路 检测器 操作
逻辑判断及处理
问题
化学品
环境
*色谱柱/保护柱 *流动相
*电源 *地线
*样品
*温度
*湿度
*清洁程度
从最简单,容易之处入手:
如 1.停止流速; 2.去掉柱子;
仪器
*泵 *进样器 *检测器 *数据处理单元
检查6根管子是否在液面下，必须确保6根管子全部 插到溶剂瓶的底部
溶剂瓶液面必须高于溶剂混合阀的位置；而洗针液 的溶剂瓶应放于试验台面上，与2695仪器底部位 于同一水平面上
灌注柱塞密封清洗
1. 主界面中，选择Diag。 2. 按Prime Seal Wash ，再按Start 3. 直到清洗溶剂流出泵杆密封圈冲洗
注意事项：若有缓冲盐流动相,灌注前用后均需用水过渡
冲洗进样器 (Purge Injector)
何时执行？
○ 改变溶剂时。 ○ 发现注射器及其管路内有气泡时。 ○ 每天开机和关机的时候。
1.按“Direct Function” 键，选择Purge Injector，按Enter。 2.输入Sample Loop 体积清洗的倍数(原定值为6 倍)，按Enter。
避免用含卤素离子的缓冲液（如：碘化锂、氯化 钾等）
选用适宜的容器 —玻璃容器必须使用超纯水清洗
保存于聚乙烯瓶中的超纯水
测试条件 水样: 40ml trace enrichment @ 2.0 ml/min 色谱柱: C18 反相柱 (Waters) 梯度: 线性 100% 水－ 100% 乙腈 波长: 254 nm
湿灌注 (Wet Prime)
1.将欲Wet Prime 的溶剂比例输入100% 2.按“Direct Function” 功能键，选择Wet Prime，按Enter。 Wet Prime 的设定值，一般为Flow : 5mL/min，Time: 2.0min， 然后按下“OK” 键，泵即开始进行Wet Prime 操作。（真空脱气机为 在线状态时，流速不要超过5ml/min） 3. 重复上述的步骤直到对所有溶剂的Wet Prime执行完毕。
废液管，按Halt。 4. 按Close。
密封圈清洗的溶液，在反相液相色谱中 可使用90％水/10％甲醇 (体积比，根据 实际需要进行选择)。
灌注针头清洗
1. 主界面中，选择Diag。 2. 按Prime Ndl Wash，缺省设定值
为30 秒，若想要多清洗几次时， 请按Start Again。
洗针溶液，在反相液相色谱中可使 用50％水/50％甲醇 (体积比，根据实 际需要进行选择)。
干灌注 (Dry Prime)
1.将空的针筒插入抽液阀（排液阀）中，打开抽液阀(以逆时针的方向将 抽液阀旋2-3圈)。
2.按“Menu/Status” 键，进入Status (1)画面，按“Direct Function” 功能 键，选择Dry Prime，按Enter。
3.按下欲使用的溶剂开启阀门(例如:Open A)，然后将针筒向外拉，抽出 约5~10mL溶剂并完全抽出溶剂管子内的气泡，完成后关闭排液阀。排液 阀不要拧太紧，以不漏液为准。
Waters2695-2489 HPLC系统
Company Logo
HPLC日常维护 及实验操作
开机及准备系统
开机自检
准备流动相
灌注柱塞密封 清洗
灌注针头清洗
检查真空脱气 机状态
是 管路是否已干
否
执行干灌注
执行湿灌注
冲洗进样器 设定流动相平
衡色谱柱 放入样品盘
开机自检
1. 打开Alliance 2695和2489 的电 源开关至 ON 的位置，仪器开 始进行自检。
流动相更换
用水更换色谱系统中缓冲液，将吸滤头部分放入 烧杯中边振动边清洗，并用水进行灌注，将管路 中的旧流动相替换，然后插入新的流动相中。
用新流动相更换水或冲洗色谱柱溶剂
更换流动相时，要保证两种溶剂的互溶性,如不互 溶，要用一种中间溶剂过渡（正反相系统变换时 一般用异丙醇过渡）
Waters溶剂瓶注意事项
液相色谱对流动相的要求
必须用色谱纯有机溶剂 — 室温下密封,避光保存
水或缓冲盐溶液要用超纯水(18.2MΩ)
缓冲盐流动相: — 当日现配现用 — 低温下密封保存,一般不超过3天 — 最好加5%有机溶剂混合保存
液相色谱对流动相的要求
有机溶剂与水（缓冲盐）混配的流动相: — 低温密封保存 — 防止有机相的挥发
HPLC系统压力问题分析
问题:系统压力高 可能的原因:
—温度太低 —流速太高 —流动相粘度大 —管路堵塞 —仪器或色谱柱堵塞 —压力传感器问题
HPLC系统压力问题分析
问题:压力低或没有压力 可能原因:
—温度太高;流速太低 —泵关闭或保险丝断了 —泵未输送流动相 —系统内有渗漏处 —所用溶剂不正确 —自动进样器在Purge时卡住
0
5
10
15
20
2 星期
1 星期
1天 1 小时 新鲜配制 25
保存于标准棕色玻璃瓶中的超纯水
测试条件 水样: 40ml trace enrichment @ 2.0 ml/min 色谱柱: C18 反相柱 (Waters) 梯度: 线性 100% 水－ 100% 乙腈 波长: 254 nm
1星期 1天 新鲜配制
A,B,C,D四路各为25%) — 换成清水洗至出口水pH显中性 — 用纯甲醇过渡，浸润泵头及管路，备用
色谱泵及系统的钝化
钝化液用6M硝酸水溶液 6M硝酸的配制:取浓硝酸40ml与60ml水混匀 钝化步骤如下:
— 在清洗步骤完成后进行钝化处理 — 确认清洗用的磷酸已基本洗净 — 用纯水灌注泵头(四元泵的A,B,C,D四路各为25%) — 用6M硝酸水溶液钝化系统(1ml/min流速)45分钟 — 换成清水洗至出口水pH显中性 — 用纯甲醇过渡，浸润泵头及管路，备用
测池温度控制 环境湿度影响 对光检测器有较大影响 反压变化 - 溶剂和样品过滤. 注意黏度过大的样品
HPLC流路基线噪音问题分析
基线周期性噪声
绝大多数情况下是来源于泵的问题 泵头内有气泡 - 流动相脱气 ,泵头排气 泵进出口阀有问题 - 更换单向阀组件 柱塞杆有问题 - 更换柱塞杆及其密封圈 溶剂混合不良 - 加装混合器 电噪声 - 去除噪声源
HPLC流路基线噪音问题分析
基线有无规律的尖峰
—检测池中有大的气泡 —流路中有小气泡流过 —系统未稳定或未达到化学平衡 —流动相被污染 —检测器流动池漏 —色谱柱污染
HPLC流路基线噪音问题分析
基线漂移
色谱柱有其他组份被洗脱出 - 冲洗, 直至基线稳定 溶剂发生变化 (如溶入气体或溶剂挥发) - 氦气或脱气机脱气,
溶剂瓶避光,密封(但要注意防止溶剂瓶内产生负压) 系统有漏液之处 - 检漏并处理 环境温度影响 (尤其对示差,电导,电化学检测) - 室温,柱温,检
— Oasis和Sep-Pak固相提取小柱 其它
色谱柱安装及连接的机械因素
连接适当
连接不妥，造成漏液
连接不妥
谱带展宽
色谱泵
色谱泵运行
注意∶
排气后，先设流速为 0 恢复排气时断开的部分，如∶进样器、色谱柱 根据色谱柱的不同，逐渐提高流速到设定值
色谱泵在停用时,应先用水洗去缓冲盐,然后用纯 甲醇充满泵头及管路,并保存在纯甲醇中
HPLC系统压力问题分析
问题:压力低或没有压力 可能原因:（续）
—储液瓶中无溶剂 —低压限设置不当 —泵未正确排气 —溶剂入口过滤头堵 —入口管路中有空气 —泵失效
HPLC系统压力问题分析
问题:压力不稳 可能原因:
—压力传感器问题 —泵排气不充分 —泵失效 —流动相未正确脱气 —所用溶剂不混溶或易挥发
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25
分
流动相的脱气目的
— 使色谱泵的输液准确
o 输液量均匀准确，并且脉动减小 o 保留时间及色谱峰面积的重现性提高
— 提高检测的性能
o 防止气泡引起的尖峰 o 基线稳定，信噪比增加 o 溶剂的紫外吸收本底降低
— 保护色谱柱
o 减少死体积 o 防止填料的氧化
流动相脱气的方法
加热
色谱泵
使用HPLC级试剂,注意泵压力不要太高,要适当 调整压力,一般压力上限在3500-4000Psi
注意防止因泵堵塞造成压力过高损坏柱塞杆或烧 坏电机。
液相色谱系统的清洗与钝化
色谱泵吸滤头,进出口阀及管路(包括进样器和检测池)若被污染, 应作清洗和钝化处理
一般采用30％磷酸水溶液作为清洗剂，用6M硝酸作为钝化剂 先清洗再钝化
紫外检测器
保持清洁，每天用后与色谱柱一起清洗； 使用脱过气的流动相，防止气泡滞留池内； 检测器灯有一定寿命，超过4小时不用时可以不开灯； 尽量避免使用pH>9.5的流动相，以防腐蚀流通池石英
窗，避免使用可能析晶的流动相，防止流通池堵塞。
HPLC常见故障分析
能引起HPLC发生问题的潜在因素:
2. 仪器将进行大约5分钟的自检过 程，待仪器自我测试完毕后， 画面上方的状态显示区会出现 “Idle” 状态，表示开机测试正 常。
色谱柱对流动相的要求
除去微粒 使用0.45μm或更细的膜过滤 酸碱性较强的流动相应注意对滤膜的腐蚀作用
纯度的要求 超纯水，梯度实验时水中有机杂质含量要低 缓冲液的pH值，在填料的允许范围内（一般为pH2-8） 缓冲液（盐）的浓度(≤100mM) 有机溶剂：色谱纯，并与填料相匹配 溶剂中的杂质含量
HPLC流路基线噪音问题分析
非周期性噪声
气泡 - 流动相脱气 检测池内有气泡 - 流动相脱气, 检测池后加适当反压 系统有漏液之处 - 检漏并处理 溶剂混合不良 - 加装混合器 电噪声 - 去除噪声源
HPLC流路基线噪音问题分析
基线周期性波动
温度影响 - 环境温度及检测池温度控制. 注意空调的影响 溶剂混合不良 - 加装混合器 流动相脱气不良 - 流动相脱气 供电电源的影响 泵不良 – 检修泵
如样品的溶剂不是流动相,一定要用流动相试溶解度,以免在 进样时样品在流动相中析出,堵塞管路和色谱柱
— 样品溶液要过滤除去微粒及杂质
— 了解样品对色谱柱的基质/填料是否有破坏作用
样品预处理常用的方法
高速离心取上清液 过滤、超滤 选择性沉淀 衍生反应 液-液萃取 固相提取(Solid Phase Extract,SPE )
干灌注和湿灌注
按主机上的“Menu/Status” 键，进入Status界面。检查真 空脱气机degasser的模式mode 是否为on。（一般为on）
当溶剂的管子是空的时候，或 不小心走干溶剂的时候执行干 灌注 (Dry Prime)
当需要排除气泡时，或平时更 换流动相时执行湿灌注 (Wet Prime) 。
清洗的目的是去除不锈钢管路及系统内的污垢 钝化的目的是使不锈钢管路的内表面形成光滑均匀的氧化膜
色谱泵及系统的清洗
清洗液用30%磷酸水溶液
30%磷酸配制:取85%浓磷酸35ml与65ml水混匀
清洗步骤如下:
— 取下色谱柱，用两通(Union)连接进样器和检测器 — 用纯水灌注泵头(四元泵的A,B,C,D四路各为25%) — 用30%磷酸清洗液洗系统(1ml/min流速)45分钟(四元泵的
冲洗进样器
每次进样前仪器会洗针（Needles wash）进样之 后不洗针
进样针是流路的组成部分,运行中一直由流动相清洗 每次批量进完样后手动清洗 或最后进一针50μl流动相 如果流动相中有盐的话则用水替代缓冲盐那部分比例
液相色谱对样品(包括标样)制备的要求
—
HPLC系统压力问题分析
单向阀的清洗如果使用过缓冲盐溶液请使用40 ℃ ~50℃的温水超声20min
如果使用过纯乙腈请使用异丙醇超声20min 如果使用过其他流动相或上述两种溶液超声后请使用
纯甲醇超声20min
HPLC流路基线噪音问题分析
基线不稳定(不重复)
抽真空
同上，一般在溶剂抽滤的同时，也有脱气的效果
超声波
简单，但效果一般。超声时间不要太长(1分钟左右即可)
通惰性气体（一般用氦气）
可保持连续脱气，多用于低压梯度
在线脱气机
可保持连续脱气，多用于低压梯度
工作环境 流动相 进样器 在线过滤器 色谱柱 数据处理装置
电源及地线 泵 保护柱 连接管路 检测器 操作
逻辑判断及处理
问题
化学品
环境
*色谱柱/保护柱 *流动相
*电源 *地线
*样品
*温度
*湿度
*清洁程度
从最简单,容易之处入手:
如 1.停止流速; 2.去掉柱子;
仪器
*泵 *进样器 *检测器 *数据处理单元
检查6根管子是否在液面下，必须确保6根管子全部 插到溶剂瓶的底部
溶剂瓶液面必须高于溶剂混合阀的位置；而洗针液 的溶剂瓶应放于试验台面上，与2695仪器底部位 于同一水平面上
灌注柱塞密封清洗
1. 主界面中，选择Diag。 2. 按Prime Seal Wash ，再按Start 3. 直到清洗溶剂流出泵杆密封圈冲洗
注意事项：若有缓冲盐流动相,灌注前用后均需用水过渡
冲洗进样器 (Purge Injector)
何时执行？
○ 改变溶剂时。 ○ 发现注射器及其管路内有气泡时。 ○ 每天开机和关机的时候。
1.按“Direct Function” 键，选择Purge Injector，按Enter。 2.输入Sample Loop 体积清洗的倍数(原定值为6 倍)，按Enter。
避免用含卤素离子的缓冲液（如：碘化锂、氯化 钾等）
选用适宜的容器 —玻璃容器必须使用超纯水清洗
保存于聚乙烯瓶中的超纯水
测试条件 水样: 40ml trace enrichment @ 2.0 ml/min 色谱柱: C18 反相柱 (Waters) 梯度: 线性 100% 水－ 100% 乙腈 波长: 254 nm
湿灌注 (Wet Prime)
1.将欲Wet Prime 的溶剂比例输入100% 2.按“Direct Function” 功能键，选择Wet Prime，按Enter。 Wet Prime 的设定值，一般为Flow : 5mL/min，Time: 2.0min， 然后按下“OK” 键，泵即开始进行Wet Prime 操作。（真空脱气机为 在线状态时，流速不要超过5ml/min） 3. 重复上述的步骤直到对所有溶剂的Wet Prime执行完毕。
废液管，按Halt。 4. 按Close。
密封圈清洗的溶液，在反相液相色谱中 可使用90％水/10％甲醇 (体积比，根据 实际需要进行选择)。
灌注针头清洗
1. 主界面中，选择Diag。 2. 按Prime Ndl Wash，缺省设定值
为30 秒，若想要多清洗几次时， 请按Start Again。
洗针溶液，在反相液相色谱中可使 用50％水/50％甲醇 (体积比，根据实 际需要进行选择)。
干灌注 (Dry Prime)
1.将空的针筒插入抽液阀（排液阀）中，打开抽液阀(以逆时针的方向将 抽液阀旋2-3圈)。
2.按“Menu/Status” 键，进入Status (1)画面，按“Direct Function” 功能 键，选择Dry Prime，按Enter。
3.按下欲使用的溶剂开启阀门(例如:Open A)，然后将针筒向外拉，抽出 约5~10mL溶剂并完全抽出溶剂管子内的气泡，完成后关闭排液阀。排液 阀不要拧太紧，以不漏液为准。
Waters2695-2489 HPLC系统
Company Logo
HPLC日常维护 及实验操作
开机及准备系统
开机自检
准备流动相
灌注柱塞密封 清洗
灌注针头清洗
检查真空脱气 机状态
是 管路是否已干
否
执行干灌注
执行湿灌注
冲洗进样器 设定流动相平
衡色谱柱 放入样品盘
开机自检
1. 打开Alliance 2695和2489 的电 源开关至 ON 的位置，仪器开 始进行自检。
流动相更换
用水更换色谱系统中缓冲液，将吸滤头部分放入 烧杯中边振动边清洗，并用水进行灌注，将管路 中的旧流动相替换，然后插入新的流动相中。
用新流动相更换水或冲洗色谱柱溶剂
更换流动相时，要保证两种溶剂的互溶性,如不互 溶，要用一种中间溶剂过渡（正反相系统变换时 一般用异丙醇过渡）
Waters溶剂瓶注意事项
液相色谱对流动相的要求
必须用色谱纯有机溶剂 — 室温下密封,避光保存
水或缓冲盐溶液要用超纯水(18.2MΩ)
缓冲盐流动相: — 当日现配现用 — 低温下密封保存,一般不超过3天 — 最好加5%有机溶剂混合保存
液相色谱对流动相的要求
有机溶剂与水（缓冲盐）混配的流动相: — 低温密封保存 — 防止有机相的挥发
HPLC系统压力问题分析
问题:系统压力高 可能的原因:
—温度太低 —流速太高 —流动相粘度大 —管路堵塞 —仪器或色谱柱堵塞 —压力传感器问题
HPLC系统压力问题分析
问题:压力低或没有压力 可能原因:
—温度太高;流速太低 —泵关闭或保险丝断了 —泵未输送流动相 —系统内有渗漏处 —所用溶剂不正确 —自动进样器在Purge时卡住
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2 星期
1 星期
1天 1 小时 新鲜配制 25
保存于标准棕色玻璃瓶中的超纯水
测试条件 水样: 40ml trace enrichment @ 2.0 ml/min 色谱柱: C18 反相柱 (Waters) 梯度: 线性 100% 水－ 100% 乙腈 波长: 254 nm
1星期 1天 新鲜配制
A,B,C,D四路各为25%) — 换成清水洗至出口水pH显中性 — 用纯甲醇过渡，浸润泵头及管路，备用
色谱泵及系统的钝化
钝化液用6M硝酸水溶液 6M硝酸的配制:取浓硝酸40ml与60ml水混匀 钝化步骤如下:
— 在清洗步骤完成后进行钝化处理 — 确认清洗用的磷酸已基本洗净 — 用纯水灌注泵头(四元泵的A,B,C,D四路各为25%) — 用6M硝酸水溶液钝化系统(1ml/min流速)45分钟 — 换成清水洗至出口水pH显中性 — 用纯甲醇过渡，浸润泵头及管路，备用
测池温度控制 环境湿度影响 对光检测器有较大影响 反压变化 - 溶剂和样品过滤. 注意黏度过大的样品
HPLC流路基线噪音问题分析
基线周期性噪声
绝大多数情况下是来源于泵的问题 泵头内有气泡 - 流动相脱气 ,泵头排气 泵进出口阀有问题 - 更换单向阀组件 柱塞杆有问题 - 更换柱塞杆及其密封圈 溶剂混合不良 - 加装混合器 电噪声 - 去除噪声源
HPLC流路基线噪音问题分析
基线有无规律的尖峰
—检测池中有大的气泡 —流路中有小气泡流过 —系统未稳定或未达到化学平衡 —流动相被污染 —检测器流动池漏 —色谱柱污染
HPLC流路基线噪音问题分析
基线漂移
色谱柱有其他组份被洗脱出 - 冲洗, 直至基线稳定 溶剂发生变化 (如溶入气体或溶剂挥发) - 氦气或脱气机脱气,
溶剂瓶避光,密封(但要注意防止溶剂瓶内产生负压) 系统有漏液之处 - 检漏并处理 环境温度影响 (尤其对示差,电导,电化学检测) - 室温,柱温,检
— Oasis和Sep-Pak固相提取小柱 其它
色谱柱安装及连接的机械因素
连接适当
连接不妥，造成漏液
连接不妥
谱带展宽
色谱泵
色谱泵运行
注意∶
排气后，先设流速为 0 恢复排气时断开的部分，如∶进样器、色谱柱 根据色谱柱的不同，逐渐提高流速到设定值
色谱泵在停用时,应先用水洗去缓冲盐,然后用纯 甲醇充满泵头及管路,并保存在纯甲醇中
HPLC系统压力问题分析
问题:压力低或没有压力 可能原因:（续）
—储液瓶中无溶剂 —低压限设置不当 —泵未正确排气 —溶剂入口过滤头堵 —入口管路中有空气 —泵失效
HPLC系统压力问题分析
问题:压力不稳 可能原因:
—压力传感器问题 —泵排气不充分 —泵失效 —流动相未正确脱气 —所用溶剂不混溶或易挥发
0
5
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15
20
25
分
流动相的脱气目的
— 使色谱泵的输液准确
o 输液量均匀准确，并且脉动减小 o 保留时间及色谱峰面积的重现性提高
— 提高检测的性能
o 防止气泡引起的尖峰 o 基线稳定，信噪比增加 o 溶剂的紫外吸收本底降低
— 保护色谱柱
o 减少死体积 o 防止填料的氧化
流动相脱气的方法
加热
色谱泵
使用HPLC级试剂,注意泵压力不要太高,要适当 调整压力,一般压力上限在3500-4000Psi
注意防止因泵堵塞造成压力过高损坏柱塞杆或烧 坏电机。
液相色谱系统的清洗与钝化
色谱泵吸滤头,进出口阀及管路(包括进样器和检测池)若被污染, 应作清洗和钝化处理
一般采用30％磷酸水溶液作为清洗剂，用6M硝酸作为钝化剂 先清洗再钝化
紫外检测器
保持清洁，每天用后与色谱柱一起清洗； 使用脱过气的流动相，防止气泡滞留池内； 检测器灯有一定寿命，超过4小时不用时可以不开灯； 尽量避免使用pH>9.5的流动相，以防腐蚀流通池石英
窗，避免使用可能析晶的流动相，防止流通池堵塞。
HPLC常见故障分析
能引起HPLC发生问题的潜在因素:
2. 仪器将进行大约5分钟的自检过 程，待仪器自我测试完毕后， 画面上方的状态显示区会出现 “Idle” 状态，表示开机测试正 常。
色谱柱对流动相的要求
除去微粒 使用0.45μm或更细的膜过滤 酸碱性较强的流动相应注意对滤膜的腐蚀作用
纯度的要求 超纯水，梯度实验时水中有机杂质含量要低 缓冲液的pH值，在填料的允许范围内（一般为pH2-8） 缓冲液（盐）的浓度(≤100mM) 有机溶剂：色谱纯，并与填料相匹配 溶剂中的杂质含量
HPLC流路基线噪音问题分析
非周期性噪声
气泡 - 流动相脱气 检测池内有气泡 - 流动相脱气, 检测池后加适当反压 系统有漏液之处 - 检漏并处理 溶剂混合不良 - 加装混合器 电噪声 - 去除噪声源
HPLC流路基线噪音问题分析
基线周期性波动
温度影响 - 环境温度及检测池温度控制. 注意空调的影响 溶剂混合不良 - 加装混合器 流动相脱气不良 - 流动相脱气 供电电源的影响 泵不良 – 检修泵
如样品的溶剂不是流动相,一定要用流动相试溶解度,以免在 进样时样品在流动相中析出,堵塞管路和色谱柱
— 样品溶液要过滤除去微粒及杂质
— 了解样品对色谱柱的基质/填料是否有破坏作用
样品预处理常用的方法
高速离心取上清液 过滤、超滤 选择性沉淀 衍生反应 液-液萃取 固相提取(Solid Phase Extract,SPE )
干灌注和湿灌注
按主机上的“Menu/Status” 键，进入Status界面。检查真 空脱气机degasser的模式mode 是否为on。（一般为on）
当溶剂的管子是空的时候，或 不小心走干溶剂的时候执行干 灌注 (Dry Prime)
当需要排除气泡时，或平时更 换流动相时执行湿灌注 (Wet Prime) 。
清洗的目的是去除不锈钢管路及系统内的污垢 钝化的目的是使不锈钢管路的内表面形成光滑均匀的氧化膜
色谱泵及系统的清洗
清洗液用30%磷酸水溶液
30%磷酸配制:取85%浓磷酸35ml与65ml水混匀
清洗步骤如下:
— 取下色谱柱，用两通(Union)连接进样器和检测器 — 用纯水灌注泵头(四元泵的A,B,C,D四路各为25%) — 用30%磷酸清洗液洗系统(1ml/min流速)45分钟(四元泵的
冲洗进样器
每次进样前仪器会洗针（Needles wash）进样之 后不洗针
进样针是流路的组成部分,运行中一直由流动相清洗 每次批量进完样后手动清洗 或最后进一针50μl流动相 如果流动相中有盐的话则用水替代缓冲盐那部分比例
液相色谱对样品(包括标样)制备的要求
—
HPLC系统压力问题分析
单向阀的清洗如果使用过缓冲盐溶液请使用40 ℃ ~50℃的温水超声20min
如果使用过纯乙腈请使用异丙醇超声20min 如果使用过其他流动相或上述两种溶液超声后请使用
纯甲醇超声20min
HPLC流路基线噪音问题分析
基线不稳定(不重复)