植物DNA的提取

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植物DNA的提取(SDS法)
1.将离心管中加入提取缓冲液
2.将研钵洗净灭菌,将-80度存放的植物材料在液氮中迅速研磨成粉末;
3.将粉末放入已有提取缓冲液的离心管中,摇匀;
4.加入60ul(1/10体积)的20%SDS溶液,充分混匀;
5.65度保温30分钟;
6.冷至室温后加入220ul(1/3体积)的5M KAc溶液,充分混匀,冰上放置30分钟以沉淀蛋白和多糖;
7.室温,13,200rpm离心20分钟,取上清750ul;
8.离心管中加入750ul氯仿,充分混匀,离心12,000rpm,10分钟;
9.取600ul上清加入600ul氯仿,充分混匀,离心12,000rpm,10分钟;
10.取500ul上清,加入1ml(2倍体积)无水乙醇沉淀核酸,混匀至于-20度放置30分钟;11.低速(8000rpm)离心10分钟收集沉淀,用70%乙醇洗涤沉淀,洗3次;
12.真空抽干3分钟,溶于100ul灭过菌的去离子水中;
13.可以再用无DNase的RNase到1mg/ml,37度保温30分钟消化RNA。

拟南芥基因组的PCR直接鉴定法
试剂:NaOH0.5M
Tris 100mM
5-10mg叶片加入到100ul NaOH,研磨,
5ul上清加入到50ul Tris中,混匀,
取1ul做PCR
但整个流程最好在冰上操作。

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