RIF检测方法的探讨-论文

增 和结 果检 测 ， 通过专 用 软件 自动 判读结 果 。
Ｘｐ ｅ ｒ ｔ Ｍｅ ｂ ／ Ｒ Ｉ Ｆ检 测 技 术 作 为 一 种 利 福 平 耐 药 实 时荧 光定 量核 酸扩 增检 测技 术 ， 逐 渐受 到 临 床 的广
泛关 注 。该方 法 通 过 核 酸 提 取 、 扩增和检测 ， 将 前 处 理 后 的待检 标本 放入 密 闭 的反 应盒 中 ， 通 过上 述
方法 有很 高 的一致 性 ， 但 总体 来说 其 敏感 依 然低 于
传统 方 法 ， 不 过 从 实 验 中我 们 看 到 了未 来 的前 景 ， 多种 方 法结合 是 未来抵 御 结核病 最 好 的办法 。
Ｘ ｐ ｅ ｒ ｔ Ｍｔ ｂ ／ Ｒ Ｉ Ｆ是通 过检 测 ｒ ｐ ｏ Ｂ基 因片 段 核
断 出多重 耐药结 核 病 （ ＭＤ Ｔ Ｂ ） 。
总之 ， Ｇｅ ｎ ｅ Ｘｐ ｅ ｒ ｔ 技 术 在 基 层 实 验 室 的应 用 能 更快 的发 现耐 药结 核病 患者 ， 并 针 对 耐药 情 况及 时
与 传 统 固 体 药 敏 对 照
制定 有效 的治 疗方 案具 有积 极 的作用 。
２ ． ２ ． ２ 对 １ ６例 培养 阳性 标 本 进 行 利福 平 药 敏 测
试， 其 中敏 感 １ ０例 （ ６ ３ ９ ／ ６ ） ， 耐药 ５ （ ３ １ ） ， 另一 例 耐
药菌 为非结 核分 枝杆 菌药 敏 。
２ ． ３ Ｇｅ ｎ ｅ Ｘｐ ｅ ｒ ｔ 检 测 结 果
山 西 医药 杂 志 ２ ０ １ ５年 ６月 第 ４ ４卷 第 １ ２期 Ｓ ｈ ａ ｎ ｘ ｉ Ｍｅ ｄ Ｊ ， Ｊ ｕ ｎ ｅ ２ ０ １ ５ ， Ｖｏ １ ． ４ ４ ， Ｎｏ ． １ ２
Ｇ ｅ ｎ ｅ Ｘ ｐ ｅ ｒ ｔ 检测结核菌敏感 度为 １ ２ ／ １ ６ （ ７ ５ ） ， 特异度
涂片 ９ 例 阳性 标本 经 Ｇ ｅ ｎ ｅ Ｘ ｐ ｅ ｒ ｔ 检测， ７例 为 阳
性； 涂片 ２ １ 例 阴性标本 经 Ｇｅ ｎ ｅ Ｘ ｐ ｅ ｒ ｔ 检测 ， １ ４例为 阴
Ｇ ｅ ｎ ｅ Ｘｐ ｅ ｒ ｔ 专用消化液 中， 震荡 １ ５ ～３ ０ Ｓ ， 室 温 放
性（ 表２ ） ； 二 者对 比 ， Ｇｅ ｎ ｅ Ｘ ｐ ｅ ｒ ｔ 检测 结核菌 敏感 度为
作者单位 ： ０ ３ ０ ０ ５ ３太 原 市 第 四 人 民 医院 检 验 科
检测与涂片一致率为 ７ Ｏ ％［ （ ７ ＋１ ４ ） ／ ３ ｏ ） １ 。培养 阳性 １ ６ 例标本 中， Ｇ ｅ ｎ ｅ Ｘ ｐ ｅ ｒ ｔ 检测 １ ２例 阳性 ； 培养 阴性 １ ４ 例中 ， Ｇ ｅ ｎ ｅ Ｘ ｐ ｅ ｒ ｔ 检测 １ ２例 阴性 （ 表 ２ ） ； 二者对 比，
检测敏感度和特异度 （ ）
Ｇｅ ｎ ｅ Ｘｐ ｅ ｒ ｔ 检 测 利 福 平 耐 药 ４例 ， 敏感 ９例 ， 因 分枝杆 菌 检测 阴性无 耐 药 检测 结 果 １ ６ 例 。传统
心 突变 区而诊 断 利福 平是 否 耐药 ， 耐 利 福平 结 核 分 枝 杆菌 突 变 多 集 中 发 生 于 ８ １ ｂ ｐ的 核 心 突 变 区 ， Ｇｅ ｎ ｅ Ｘ ｐ ｅ ｒ ｔ 检 测可 以快 速 简便 的捕 捉 耐 药 信 息 ， 利 用 分子 手段 快速 作 出反应 ， 在２ ｈ及 能 获取 检 测 结
度为 ５ ０ ０￣ ｇ ／ ｍＬ对 硝 基 苯 甲酸 （ Ｐ ＮＢ ） 和浓 度 为 ５
／ ￣ ｇ ／ ｍＬ噻 吩一 ２ 一 羧 酸酰 肼 （ ＴＣ Ｈ） 罗 氏培 养 基［ ２ ］ （ 培
养 基 由珠 海贝 索生 物技 术有 限公 司提供 ） 。
１ ． ４ Ｇｅ ｎ ｅ Ｘ ｐ ｅ ｒ ｔ 检测 ： 吸取 痰 液 １ ｍＬ加 入 ２ ｍＬ
实验 中涂 片 ， 固体 培 养 与 Ｇｅ ｎ ｅ Ｘ ｐ ｒ ｔ 检 测 敏 感 度 和 特异 度均低 与 相关 报道结 果 ， 可 能 与 检测 例数 少 不
为［ １ ２ ／ １ ４ （ ８ ６ ） ］ （ 表３ ） 。Ｇ ｅ ｎ ｅ Ｘ ｐ ｅ ｒ ｔ 检测 与 固体培养 的一致率为 ８ Ｏ ［ － （ １ ２ ＋１ ２ ） ／ ３ ０ ） ３ 。
Ｘ ｐ ｅ ｒ ｔ Ｍｔ ｂ ／ Ｒ Ｉ Ｆ检 测 利 福 平 耐 药 的 敏 感 度 和
特异 度 为 ８ Ｏ 、 ９ ０ ， 略低 于有 关 报道＿ ４ ］ ， 可 能也 与
试验 数量 少有 关 。报 道 称 虽 然 研 究 同 金 标 准 培 养
表 ３ 涂 片标 本 培 养 标 本 和 Ｇｅ ｎ ｅ Ｘ ｐ ｅ ｒ ｔ
药 敏均 不包 括 在 内） 。Ｇｅ ｎ ｅ Ｘ ｐ ｅ ｒ ｔ 检 测 与 固体 药 敏 的一致 率为 ８ ７ Ｅ （ ４ ＋９ ） ／ １ ５ ） ］ ， 敏感 度 ８ ０ ， 特 异 度 ９ Ｏ ９ ／ ６ 。见表 ４ 。
表 ４ Ｘｐ ｅ ｒ ｔ Ｍｔ ｂ ／ Ｒ Ｉ Ｆ检 测 利 福 平 耐 药
耐 药结果 需 要 ３个 月 的 时 间 ， 增 加 了检 测 的快 速
２ ． １ 患 者来源 及一 般 资料
２ ８例患 者来 自我 院住 院患 者 ， ２例 来 自ｆ － Ｉ 诊 患 者 。其 中男性 ２ ２例 ， 年龄 １ ５ ～７ １岁 ， 平均 ４ ２岁 。
女 性 ８例 ， 年龄 ２ ３ ～６ ３岁 ， 平均 ４ １岁 。 临 床 诊 断
表２ Ｇｅ ｎ ｅ Ｘ ｐ ｅ ｒ ｔ 检 测 涂 片 标 本 培 养 标 本 结 果
具 有 统计 学 意义 有 关 ＿ ３ ］ 。但 Ｇｅ ｎ ｅ Ｘ ｐ ｅ ｒ ｔ检 测 比传 统培 养在 报告 时 间上存 在 明显优 势 （ 可 以提前 ６ ～８ 周） ， 从 而 可更 好 的辅助 临床 进行 早期 诊 断和治 疗 。
适 合药 品企业 及检 测机 构 的 日常应用 。
参 考 文 献
Ｅ １ ３ 朱冬梅 ， 徐倩昱 ， 任美婷 ， 等 ．ＨＰ Ｌ Ｃ — ＱＴ ＯＦ ＭＳ法 测 定 马来 酸
依 那 普 利 及 中 间体 中 的对 甲 苯磺 酸 乙酯 ［ Ｊ ］ ．药 物 分 析 杂 志 ，
２ ０ １ ２， ３ ２ （ ５ ）： ８ ３ ４ — ８ ３ ７ ．
２ ． ２ 细 菌学检 测 结果
２ ． ２ ． １ ３ Ｏ例痰 标本 涂 片检查 ， 阳性 ９例 （ ３ ０ ％） ， 阴
性２ １ 例（ ７ ０ ９ ／ ６ ） ； 培 养 阳性 标 本 １ ６例 （ ５ ３ ） ， 阴 性 标本 １ ４例 （ ４ ７ ） ； Ｇ ｅ ｎ ｅ Ｘｐ ｅ ｒ ｔ检 测 阳 性 １ ４例
果 。但 是 Ｇｅ ｎ ｅ Ｘ ｐ ｅ ｒ ｔ 检测 也存 在价 格 昂 贵 ， 只能 检 测利福 平 而缺 乏异 烟肼 耐药 检 测 ， 因而 不 能及 时诊
固体培 养基 检测 利福 平耐 药 ５例 ， 敏感 １ Ｏ例 ， 因 培
养 阴性 无耐 药检 测结 果 １ ４例 （ １ 例非 结核 分 枝杆 菌
核分 枝 杆菌 １ ５例 （ ９ ４ ９ ／ ６ ） ， １例 为 非 结 核 分 枝 杆 菌
（ ６ ９ ／ ６ ）
表１ ３ ０例 痰 标 本 ３种 方 法 检 测 结 果
１ ． ２ 分离 培 养 ： 使用 ４ Ｎａ ＯＨ 前 处 理 后 接 种 酸 性 罗 氏培养 基 （ 培养 基 由珠 海 贝索 生物 技术 有 限公 司提 供） 。
性 。我 院接 受 了全球 基 金 项 目为 我 院 配 备 的一 台
结核 病 ２ ４例 （ ８ ０ ％） ， 非 结核 病 ６例 （ ２ ０ ％） 。
பைடு நூலகம்
Ｇｅ ｎ ｅ Ｘ ｐ ｅ ｒ ｔ 检测 仪 ， 目前 已检 测 ３ ０例痰 标 本 ， 现将
３ Ｏ例 痰 标 本 涂 片 镜 检 ， 固体培养和 Ｇ ｅ ｎ ｅ Ｘｐ ｅ ｒ ｔ 检 测 分枝 杆菌 ３种 方法 将 以对 比总结 。 １ 资 料与 方法
１ ． ３ 罗 氏 比例 法 药 敏及 菌 种 鉴定 ： 痰 标 本 培 养 阳
性 标本 通过 磨 菌制备 成 １麦 氏单位 ， １ ｏ 和 １ ０ 比
例 稀 释后 各 接 种 一 管 含 利 福 平 浓 度 为 ４ ０／ ￣ ｇ ／ ｍＬ 罗 氏培养 基 。鉴定 菌 种 同时 取 １ Ｏ 标 本 接 种 含 浓
１ ． １ 痰涂 片检 查 ： 按 照痰 涂 片镜 检 标 准化 操 作 ， 留 取 标本 、 涂片、 染色、 镜检 （ 抗 酸 染 液 购 自珠 海 贝 索
生 物技 术有 限公 司 ） 。
（ ４ ７ ） ， 阴性 １ ６例 （ ５ ３ ） （ 表 １ ） 。菌 种 鉴 定 为 结
７ ／ ９ （ ７ ８ ） ， 特异度 为 １ ４ ／ ２ １ （ ６ ７ ） （ 表 ３ ） 。Ｇ ｅ ｎ ｅ Ｘ ｐ ｅ ｒ ｔ
置１ ５ ｍｉ ｎ ， 用专 用 无菌 吸管 吸取 ２ ｍＬ处 理 液转 移
到样 本反应 盒 中， 将 反应 盒放 人 Ｇｅ ｎ ｅ Ｘ ｐ ｅ ｒ ｔ 仪器 的
该方法通过核酸提取扩增和检测将前处理后的待检标本放入密闭的反应盒中通过上述三位一体操作程序自动给出实验结果整个过程只需2h就可得出痰标本是否菌阳带菌量多少是否利福平耐药的结果口而传统的方法得出利福平耐药结果需要3个月的时间增加了检测的快速性
山西医药杂志 ２ ０ １ ５年 ６月 第 ４ ４卷 第 １ ２期 Ｓ ｈ ａ ｎ ｘ ｉ Ｍｅ ｄ Ｊ ， Ｊ ｕ ｎ ｅ ２ ０ １ ５ ， Ｖｏ １ ． ４ ４ ， Ｎｏ ． １ ２
参 考 文 献
Ｅ １ ］ 尹 青琴 ， 申阿东 ． Ｘｐ ｅ ｒ ｔ Ｍｔ ｂ ／ ＲＩ Ｆ试 验 在 结 核 病 诊 断 中 的 研
究 现状 ［ Ｊ ］ ．中华 结 核 和 呼吸 杂 志 ， ２ ０ １ ２ ， ３ ５ （ ５ ） ： ３ ６ ３ — ３ ６ ５ ．
３
讨
论
Ｅ ２ ３ 中华 医 学 会 ．Ｉ 临床 技 术 操 作 规 范 ・ 结核 病分 册［ Ｍ］ ．北 京 ：
人 民卫 生 出版 社 ， ２ ０ ０ ４ ： １ ０ ．
３ ０例 痰标本 ３种 方 法检 测 结 果 显 示 ，Ｇｅ ｎ ｅ Ｘ—
Ｅ ３ ３ 李辉 ， 谭耀驹 ， 李洪敏 ， 等 ．利 福 平 耐 药 实 时 荧 光 定 量 核 酸 扩
ｐ ｒ ｔ检 测 、 涂片， 固 体 培 养 阳性 率 分 别 为 ４ ７ 、 ３ ０ ９ ／ ６ 、 ５ ３ ， Ｇｅ ｎ ｅ Ｘｐ ｒ ｔ 检 测 明显 高 于 涂 片 ， 但 低 于
（ 收 稿 日期 ： ２ ０ １ ４ — １ ０ — １ ０ ）
Ｘｐ ｅ ｒ ｔ Ｍｅ ｂ ／ ＲＩ Ｆ检 测 方 法 的探 讨
杨 顺 利
随着分 子生 物学诊 断技 术 的不 断发展， Ｇｅ ｎ ｅ Ｘ ｐ ｅ ｒ ｔ 在 多个 国家 和地 区进 行 了验证 评估 ，
反 应舱 中 ， 进行 Ｄ ＮＡ提取 ， 聚合酶链 反 应 （ Ｐ Ｃ Ｒ ） 扩
１ ． ５ 质量控制 ： 我 室 均 参 加 每年 国家 结 核 病 实 验
室药敏 熟 练度测 试 ， 均参 加 了 Ｇ ｅ ｎ ｅ Ｘｐ ｅ ｒ ｔ 检测 方 法 和仪 器操 作培训 。
２ 结 果
三位 一体 操作 程序 自动给 出实 验 结果 ， 整 个 过程 只 需２ ｈ就 可 得 出 痰 标 本 是 否 菌 阳 、 带 菌量多少、 是 否 利福平 耐 药 的结 果口 ］ ， 而传 统 的方法 得 出利福 平
传统 培 养 ； 从 表 ３可 以看 出 ： Ｇｅ ｎ ｅ Ｘｐ ｒ ｔ 相对涂 片、
增 检 测 技 术 的 诊 断 效 果 对 比研 究 ［ Ｊ ］ ．中 国 防 痨 杂 志 ， ２ ０ １ ４ ，
３ ６（ ６ ）： ４ ７ ２ － ４ ７ ６ ．
［ ４ ３ 赵 冰， 欧喜超 ， 夏辉， 等 ． Ｘｐ ｅ ｒ ｔ Ｍｔ ｂ ／ Ｒ Ｉ Ｆ检 测 技 术 在 结 核 病 诊 断 中 的应 用 评 价 ［ Ｊ ］ ．中国 防痨 杂 志 ， ２ ０ １ ４ ， ３ ６ （ ６ ） ： ４ ６ ２ —