化妆品中细菌总数的检测

化妆品中细菌总数的检测
一、实验目的：
1、掌握化妆品中菌落总数的测定方法。

2、掌握细菌计数的基本方法和原理。

3、掌握对化妆品菌落总数检测结果做出准确、规范的报告。

二、实验原理：
菌落总数是至化妆品检样经过处理在一定条件下培养后，1g（1mL）检样中所含细菌菌落的总数。

化妆品微生物检验按照国标检验方法规定：菌落总数的培养条件为采用营养琼脂培养基，在（36±1）℃培养（48±2）h。

三、实验试剂与仪器：
营养琼脂培养基、75%乙醇、生理盐水（8.5~9.0%）、。

电热恒温培养箱、冰箱、温度计、烘箱、电子称、镊子、广口瓶、立式蒸汽高压锅、电炉、刻度吸管（1mL、10mL）、三角瓶、平皿、试管、酒精灯、75%乙醇棉球。

四、实验步骤：
1、培养基、生理盐水的配制
（1）培养基的配制：配制100mL培养基。

按照说明称量所需培养基，倒入三角瓶中，加入自来水并加热至完全溶解（注意加热后要补足水）。

在操作过程中注意不要沾污三角瓶瓶口。

在加热过程中要用玻棒不断搅拌，以防糊底烧焦。

（2）生理盐水的配制：称量9gNaCl于100mL水中，搅拌至完全溶解。

2、灭菌前包扎
（1）培养基的包扎：培养基装于三角瓶中，制作棉塞于瓶口中，再包上双层报纸，用棉绳扎好。

（2）生理盐水的包扎：把90mL生理盐水分装于三角瓶中，如包扎如培养基包扎。

把9mL生理盐水分装于试管中，并包扎好。

（3）移液管的包扎：将报纸裁成约5cm左右的长纸条，把尖端放纸条的一端，约成45度角，通过折叠、搓转用纸条抱紧移液管，剩余纸条折叠打结。

（4）培养皿的包扎：用报纸将6套培养皿包成一包。

3、灭菌
（1）干热灭菌：把包扎好的移液管、培养皿放入烘箱中，160℃灭菌2h。

（2）湿热灭菌：把包扎好的培养基、生理盐水放入高压蒸汽灭菌锅内121℃灭菌20min。

4、检样的稀释
（1）以无菌操作，将检样10g或10mL放于含有90mL灭菌生理盐水中，经充分震荡做成1:10的均匀稀释液。

（2）再用灭菌刻度吸管吸取1:10稀释的检样1mL，注入到9mL灭菌生理盐水试管中(注意勿使吸管接触液面)，并充分混匀，使成1:100稀释液。

5、混合平板培养法
（1）分别吸取1:10稀释液、1:100稀释液注入到两个灭菌平皿内，每皿1mL，每种稀释度应换1支刻度吸管，另一个平皿内注入灭菌生理盐水1mL作为空白试验。

（2）稀释液移入平皿后，应及时将晾至46℃培养基注入平皿约15mL，并轻轻转动平皿混合均匀，同时将培养基倾入加有1mL灭菌生理盐水的灭菌平皿内作空白对照。

（3）待琼脂凝固后，倒置平板，置（36±1）℃恒温箱内培养（48±2）h，取出计算菌落数目，乘以稀释倍数，即得1g（1mL）样品所含菌落总数。

6、菌落计算方法
①选择平均菌落数在30~300之间的稀释度，细菌总数则以菌落数乘以该稀释度的稀释倍数。

②若有两个稀释度，其生长之菌落数均在30~300之间，可计算出每个稀释度的细菌总数，若其比值小于2，则以该二细菌数的平均值为细菌总数；若该比值大于2，则以其中较小的为细菌总数。

③若所有稀释度的平均菌落数均大于300，则以最高稀释度的菌落数乘以该稀释倍数(最大)为细菌总数。

④若所有稀释度的平均菌落数均小于300，则以最低稀释度的菌落数乘以该稀释倍数(最小)为细菌总数。

⑤若所有稀释度的平均菌落数均不在30~300之间，则以最接近30或300的平均菌落数乘以相对应的稀释倍数为细菌总数。

细菌总数一般采用两位有效数字，数字后面的零数常以10的指数采表示，如细菌总数280cfu/g或cfu/mL可写为2.8X10cfu/g或cfu/mL。

五、实验记录（做成表分别记录各检测数据）及讨论：。