液相色谱分析咖啡豆中的咖啡因含量

液相色谱分析咖啡豆中的咖啡因
1.仪器分析条件：
HITACHI-L7110型（单泵）HITACHI -L7420(UV/VIS)
波长：272nm 进样量：10uL 对照品浓度：100ppm 流量：1mL/min 柱子：ALLSPHERE ODS-2(250mm×4.6mm×5um) 柱压：17Mpa
流动相：甲醇/水＝65/35
A）标样图谱及定量结果：
B)咖啡豆中的咖啡因的测定：
1）样品前处理：
准确称取0.1g经粉碎成低于30目的均匀咖啡样品，加入15ml纯水，超声提取30min，过滤后定容于25ml，取7ml过C18SPE固相萃取小柱，弃去前3ml，收集后4ml，过0.45u的过滤头，取10ul进样。

咖啡因含量（%）=色谱处理数据（mg/ml）*25ml/100mg。

另一方法：在100mL烧杯中称取经粉碎成低于30目的均匀样品1.0g，加入80mL沸水，加盖，摇匀，浸泡2h，然后将浸出液全部移入100mL容量瓶中，加入20%醋酸锌溶液2mL，加入10%亚铁氰化钾溶液2mL，摇匀，用水定容至100mL，摇匀，静置沉淀，过滤。

取滤液10.0mL，加入1.5%高锰酸钾溶液5mL，摇匀，静置于5min，加入亚硫酸钠和硫氰酸钾混合溶液[称取10g 无水亚硫酸钠(Na2SO3)。

用水溶解并稀释至100mL。

另取10g硫氰酸钾，用水溶解并稀释至100mL，然后二者均匀混合]溶液10mL，摇匀，加入50mL重蒸三氯甲烷。

振摇10min，静止分层，收集三氯甲烷。

水层再加入40mL重蒸三氯甲烷，振摇10min，静置分层。

合并二次三氯甲烷萃取液，并用重蒸三氯甲烷定容至100mL，摇匀，备用。

制备成100mL三氯甲烷溶液，过0.45u 的过滤头，取10ul进样。

2)样图谱及定量结果：
咖啡因含量（%）=色谱处理数据（mg/ml）*25ml/100mg。

=0.042（mg/ml）×25ml/100mg
=1.05%
符合国家标准，数据在国标控制范围内。