苯磺酸左旋氨氯地平片中右旋杂质的检查

苯磺酸左旋氨氯地平片中右旋杂质的检查
胡政华;陈静
【摘要】Objective To investigate the determination method of enantiomeric impurity of levamlodipine besylate tablets using reversed phase high performance liquid chromatography with sulfobutylether- β -cyclodextrin as the chiral mobile phase additive.Methods Separation was performed on an Hypersil BDS C8 column (200 mm × 4.6 mm, 5μm) with mobile phase composed of water (pH 2.5,containing 25 mmol · L-1 sulfobutylether-β-cyclodextrin)-methanol( 55 ∶ 45 ).The flow rate was 0.8 mL · m in-1 and the detection wavelength was set at 360 nm.Results The calibrated linear curve of dextro-arnlodipine besylate was within 1.0～
2.0μg · mL-1 (r=0.999 6).The average recovery was 99.3％ with RSD of
1.9％.Conclusion The method is proved to be accurate and reliable.It could be used for the determination of the enantiomeric impurity of Levamlodipine Besylate Tablets.%目的用磺丁基醚-β-环糊精(SBE-β-CD)作为手性选择剂,建立苯磺酸左旋氨氯地平片中右旋杂质的HPLC检查方法.方法色谱柱:Hypersil BDS C8柱(200 mm×4.6 mm, 5 μm);流动相:25 mmol·L-1 SBE-β-CD水溶液(pH
2.5 )-甲醇(55:45);流速0.8 mL·min-1;检测波长:360 nm,进样量:20 μL,柱温:20 ℃.结果苯磺酸右旋氨氯地平在1.0～2.0 μg·mL-1范围内线性关系良好,r=0.999 6,平均回收率为99.3%,RSD为1.9%.结论该方法专属性强,重复性好,结果准确,可用于苯磺酸左旋氨氯地平片中右旋杂质的检查.
【期刊名称】《西北药学杂志》
【年(卷),期】2011(026)002
【总页数】3页(P98-100)
【关键词】磺丁基醚-β-环糊精;苯磺酸左旋氨氯地平片;对映体杂质检查;高效液相
色谱法
【作者】胡政华;陈静
【作者单位】鞍山师范学院附属卫生学校,辽宁,鞍山,114000;东北制药(沈阳)科技
发展有限公司,辽宁,沈阳,110027
【正文语种】中文
【中图分类】R927.2
苯磺酸氨氯地平可舒张冠状血管和全身血管，增加冠脉血流量，降低血压，且与其他抗高血压或抗心绞痛药合用具有良好的耐受性，是常用的治疗高血压的钙拮抗剂[1-3]。

作为手性药物，苯磺酸氨氯地平的药理作用主要来自其左旋体，而肢端水肿、头痛等不良反应是由右旋体引起的[4]。

因此，对苯磺酸左旋氨氯地平原料及
制剂的右旋杂质进行检查和控制具有重要意义。

文献大多用毛细管电泳法检查苯磺酸左旋氨氯地平原料药及片剂中右旋杂质[5-6]。

毛细管电泳法存在重复性较差、定量不够准确等弊端，而重复性及专属性更好的HPLC法未见报道。

本研究建立了以SBE-β-CD为手性流动相添加剂的苯磺酸左旋氨氯地平片中右旋杂质检查的HPLC法。

建立的方法专属性强、重复性好，可用
于苯磺酸左旋氨氯地平片中右旋杂质的检查。

1.1 仪器 LC-10A型高效液相色谱仪，SPD-10A型紫外可见光检测器(日本岛津公司)，Anastar色谱工作站。

1.2 试药苯磺酸氨氯地平对照品、苯磺酸左旋氨氯地平对照品(中国药品生物制品
检定所)；苯磺酸右旋氨氯地平对照品(自制，质量分数为99.1%)；苯磺酸左旋氨
氯地平片(吉林省天风制药有限责任公司)；磺丁基醚-β-环糊精(SBE-β-CD，山东
新大精细化工有限公司)；甲醇(色谱纯)；其余试剂均为分析纯，水为二次重蒸水。

2.1 溶液的制备苯磺酸左旋氨氯地平对照品溶液：称取苯磺酸左旋氨氯地平对照
品适量，用水-甲醇(55∶45)的混合溶液稀释制成苯磺酸左旋氨氯地平质量浓度为300 μg·mL-1的储备液；精密量取储备液适量，用水-甲醇(55∶45)的混合溶液制成质量浓度约为150 μg·mL-1的对照品溶液。

苯磺酸右旋氨氯地平对照品溶液：称取苯磺酸右旋氨氯地平适量，用水-甲醇(55∶45)的混合溶液稀释制成苯磺酸右旋氨氯地平质量浓度为30 μg·mL-1的储备液；精密量取储备液适量，用水-甲醇(55∶45)的混合溶液制成质量浓度约为1.5
μg·mL-1的对照品溶液。

含质量分数1%右旋杂质的苯磺酸左旋氨氯地平对照品溶液：精密量取苯磺酸左旋氨氯地平储备液和右旋体储备液适量，用水-甲醇(55∶45)的混合溶液制成含左旋
体和右旋体质量浓度分别约为150 和1.5 μg·mL-1的对照品溶液。

苯磺酸左旋氨氯地平供试品溶液：取苯磺酸左旋氨氯地平10片，研细，取粉末适量(约相当于苯磺酸左旋氨氯地平1.5 mg)，精密称定；置于10 mL 量瓶中，加1 mL甲醇溶解后，再用8 mL水-甲醇(55∶45)的混合溶液超声30 min；放冷至室温，用水-甲醇(55∶45)的混合溶液定容，滤过，制成每1 mL中约含150 μg苯磺酸左旋氨氯地平的溶液。

2.2 色谱条件色谱柱：Hypersil BDS C8柱(200 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相：25 mmol·L-1 SBE-β-CD水溶液(pH2.5)-甲醇(55∶45)；流速：0.8 mL·min-1；
柱温：20℃；进样量：20 μL；检测波长：360 nm。

2.3 专属性实验在上述色谱条件下，取含质量分数1%右旋杂质的苯磺酸左旋氨氯
地平对照品溶液、苯磺酸左旋氨氯地平对照品溶液各20 μL，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。

由图1可知，左旋异构体的保留时间为38.6 min，右旋异构体的保
留时间为43.4 min，两色谱峰的分离度符合要求。

取本品处方量的空白辅料适量，按照“苯磺酸左旋氨氯地平供试品溶液的配制”项下方法操作，制成空白辅料溶液；取空白辅料溶液20 μL 注入色谱仪，记录色谱图，结果表明在右旋体保留时间处
无杂峰，说明对测定无干扰。

见图1。

2.4 标准曲线、检测限及定量限取苯磺酸右旋氨氯地平对照品适量，用流动相溶
解并稀释制成相当于苯磺酸右旋氨氯地平质量浓度为1.0，1.2，1.4，1.6，1.8和2.0 μg·mL-1的系列对照品溶液，分别取20 μL注入液相色谱仪，记录色谱图。

以药物质量浓度(C，μg·mL-1)为横坐标，峰面积(A)为纵坐标，进行线性回归运算，求得的直线回归方程为：A=9 152C-1 154，r=0.999 6。

根据标准曲线，苯磺酸
右旋氨氯地平的线性范围为1.0～2.0 μg·mL-1。

将苯磺酸右旋氨氯地平对照品溶液用水-甲醇(55∶45)混合溶液稀释至适当的质量
浓度，在上述色谱条件下进样，当峰高为信噪比(S/N)的3倍时，测得检测限为5 ng；当峰高为信噪比(S/N)的10倍时，测得定量限为15 ng。

2.5 稳定性实验取同一批号未检出对映体杂质的苯磺酸左旋氨氯地平片粉适量(约
含苯磺酸左旋氨氯地平1.5 mg)，置于10 mL量瓶中，精密加入一定体积的苯磺
酸右旋氨氯地平对照品储备液，依照供试品溶液制备方法制成含右旋杂质以及苯磺酸左旋氨氯地平质量浓度分别为1.5和150 μg·mL-1的混合溶液；在室温下避光
放置，于不同时间(0，2，4，6和8 h)分别进样1次。

结果苯磺酸右旋氨氯地平
峰面积的RSD为2.6%，苯磺酸左旋氨氯地平峰面积的RSD为1.9%。

说明溶液
在8 h内稳定。

2.6 精密度与重复性实验取含质量分数1%右旋杂质的苯磺酸左旋氨氯地平对照品溶液，在上述色谱条件下，进样6次，记录色谱图，计算得2个对映体色谱峰峰
面积的RSD均小于2.4%，说明精密度良好。

取同一批号的苯磺酸左旋氨氯地平片粉适量，精密加入一定体积的苯磺酸右旋氨氯地平对照品储备液，用水-甲醇(55∶45)的混合溶液稀释制成约含苯磺酸左旋氨氯地平以及右旋杂质质量浓度分别为150和1.5 μg·mL-1的混合溶液，平行制备6份，分别取20 μL，在上述色谱条件下注入液相色谱仪。

苯磺酸左旋氨氯地平和右旋杂质峰面积的RSD分别为1.4%和2.0%。

结果表明本方法重复性良好。

2.7 回收率实验取同一批号研细的苯磺酸左旋氨氯地平片粉适量(约含苯磺酸左旋氨氯地平1.5 mg)，置于10 mL量瓶中，精密加入一定体积的苯磺酸右旋氨氯地平对照品储备液，依照供试品溶液配制方法制成含右旋杂质限量1.2,1.5和1.8 μg·mL-1的苯磺酸左旋氨氯地平样品溶液(n=9)。

在上述色谱条件下测定，记录峰面积，计算回收率。

平均回收率为99.3%，RSD为1.9%。

表明本法准确度良好。

2.8 样品测定方法：选用杂质对照法测定苯磺酸左旋氨氯地平片中的右旋杂质。

取苯磺酸右旋氨氯地平对照品溶液20 μL，注入液相色谱仪，调节仪器灵敏度，使主成分色谱峰的峰高约为满量程的10%～20%。

再量取苯磺酸左旋氨氯地平供试品溶液20 μL，注入液相色谱仪，记录色谱图。

供试品溶液色谱图中如有右旋异构体杂质峰，其峰面积不得大于苯磺酸右旋氨氯地平对照品溶液主成分峰的峰面积。

使用该法对2批苯磺酸左旋氨氯地平片进行右旋杂质检查，其右旋杂质含量均低于1%。

色谱图见图2。

3.1 检测波长的选择对苯磺酸氨氯地平进行全波长扫描，发现其在238和360 nm处有2个最大吸收峰。

考察比较2个波长条件下的右旋杂质检查结果，实验表明，当选用波长238 nm进行检测时，基线波动较大，不利于右旋杂质的微量检测。

而选用360 nm作为检测波长时，右旋杂质出峰位置附近基线平稳，利于测定。

因此，最终选择360 nm作为测定波长。

3.2 色谱条件的优化实验考察了一定范围内不同浓度的SBE-β-CD作为流动相添
加剂对分离的影响。

结果表明，当环糊精浓度为25 mmol·L-1时对映体即可实现
基线分离，而环糊精浓度再增加对分离度未见明显改善。

考察了不同的水相pH值对对映体分离的影响，结果表明，较低的pH值有利于对映体的分离。

原因可能是SBE-β-CD分子中磺酸基团的存在使分子在较宽的pH
值范围内带负电[7]，而药物吡啶环上的N在较低的pH值下更容易发生质子化，
因而更易与带负电的SBE-β-CD进行包合，形成的包合物更稳定，有利于环糊精
的手性识别。

故选择水相的pH值为2.5。

同时，考察了有机改性剂种类及浓度、缓冲盐、柱温及流速等对对映体分离的影响，最终确定色谱条件为：Hypersil BDS C8柱(200 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相：25 mmol·L-1 SBE-β-CD水溶液(pH2.5)-甲醇(55∶45)；流速：0.8 mL·min-1；
柱温：20℃；进样量：20 μL；检测波长：360 nm。

【相关文献】
[1]史晏海，凌华伟.新型钙离子拮抗剂氨氯地平[J].中国新药杂志，1995，4(5)：9.
[2]张君玮.抗高血压药氨氯地平[J].国外医药合成药生化药制剂分册，1992，13(6)：363-364.
[3]王晓艳. 2005-2007 年我院抗高血压药物用药分析[J]. 西北药学杂志，2009，24(2)：151.
[4]佚名.左旋苯磺酸氨氯地平[J].中国医药技术与市场，2005，5(5)：52-53.
[5]刘英华，赵星洁，杨晓华，等.毛细管电泳法手性拆分苯磺酸氨氯地平及其光学纯度分析[J].河北
工业科技，2007，24(4)：195-197.
[6]范国荣，刘新宇，殷学平.氨氯地平的毛细管电泳手性拆分及其左旋体的光学纯度分析[J].中国医
药工业杂志，2003，34(1)：24-26.
[7]阮宗琴，陆豪杰，欧庆瑜.毛细管电泳磺丁基-β-环糊精拆分对映体[J].分析化学研究简报，2000，28(2)：168-171.。