高纯度天然磷脂酰乙醇胺的制备方法[发明专利]

(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利申请
(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910789089.7
(22)申请日 2019.08.26
(71)申请人 南京威尔药业股份有限公司
地址 210047 江苏省南京市南京化学工业
园区长丰河西路99号
(72)发明人 吴明朗　梁磊　付鑫　
(74)专利代理机构 江苏致邦律师事务所 32230
代理人 栗仲平
(51)Int.Cl.
C07F 9/10(2006.01)
(54)发明名称
高纯度天然磷脂酰乙醇胺的制备方法
(57)摘要
本发明公开了一种高纯度天然磷脂酰乙醇
胺的制备办法，其包含以下步骤：（1）以天然磷脂
为原料，用有机溶剂打浆，冷冻后抽滤；（2）所得
滤饼用含碱有机溶剂打浆，冷冻后抽滤；（3）所得
滤液脱溶、真空干燥得到高纯度的天然磷脂酰乙
醇胺。

本发明所使用的磷脂原料为大豆粉末磷脂
或/和脱油蛋黄磷脂以及其提取磷脂酰胆碱后的
残渣，很好地对残渣进行了二次利用。

本发明不
需用氧化铝或硅胶来富集提纯PE，减少了固体废
渣的产生。

本发明工艺简单，不需要柱层析，容易
放大并进行工业化生产。

所得磷脂产品中磷脂酰
乙醇胺的含量达到95%以上。

权利要求书1页 说明书4页CN 110563759 A 2019.12.13
C N 110563759
A
1.一种高纯度天然磷脂酰乙醇胺的制备办法，其特征包含以下步骤：
以天然磷脂为原料，用有机溶剂打浆，冷冻后抽滤；
所得滤饼用含碱有机溶剂打浆，冷冻后抽滤；
所得滤液脱溶、真空干燥得到高纯度的天然磷脂酰乙醇胺。

2.根据权利要求1所述高纯度磷脂酰乙醇胺的制备方法，其特征是：步骤（1）中所述天然磷脂为大豆粉末磷脂或/和脱油蛋黄磷脂以及其提取磷脂酰胆碱后的残渣。

3. 根据权利要求书1所述高纯度磷脂酰乙醇胺的制备方法，其特征是：步骤（1）中所述有机溶剂为甲醇、乙醇、异丙醇等低级醇或/和二氯甲烷等卤代烃或/和丙酮、乙腈、四氢呋喃等极性非质子溶剂中的一种或多种；步骤（1）中所述原料：有机溶剂的比例为1：1 ~ 1：100（m/v ）；步骤（1）中所述打浆温度为0~120℃；步骤（1）中所述冷冻温度为0~ -78℃。

4. 根据权利要求3所述高纯度磷脂酰乙醇胺的制备方法，其特征是：步骤（1）中所述有机溶剂优选为低级醇；步骤（1）中所述原料：有机溶剂的比例优选为1：5 ~ 1：15（m/v ）；步骤
（1）中所述打浆温度优选为30~80℃；步骤（1）中所述冷冻温度优选为0~-30℃。

5. 根据权利要求1所述高纯度磷脂酰乙醇胺的制备方法，其特征是：步骤（2）中所述有机溶剂为甲醇、乙醇、异丙醇等低级醇或/和二氯甲烷等卤代烃或/和丙酮、乙腈、四氢呋喃等极性非质子溶剂中的一种或多种；步骤（2）中所述碱为有机碱或/和无机碱，包括但不限于三乙胺、N ,N -二异丙基乙胺或氨水中的一种或多种；步骤（2）中所述含碱有机溶剂为碱和有机溶剂的均相混合物；步骤（2）所述含碱有机溶剂中碱：有机溶剂的比例为1：10 ~ 1：500（v/v ）。

6. 根据权利要求5所述高纯度磷脂酰乙醇胺的制备方法，其特征是：步骤（2）中所述有机溶剂优选为低级醇；步骤（2）中所述含碱有机溶剂中碱：有机溶剂的比例优选为1：25 ~ 1：75（v/v ）。

7. 根据权利要求1所述高纯度磷脂酰乙醇胺的制备方法，其特征是：步骤（2）中所述滤饼:含碱有机溶液的比例为1:1~1:100（m/v ）; 步骤（2）中所述打浆温度为0~120℃；步骤（2）中所述冷冻温度为0~ -78℃。

8.根据权利要求7所述高纯度磷脂酰乙醇胺的制备方法，其特征是：步骤（2）中所述滤饼:含碱有机溶液的比例优选为1:10~1:50（m/v ）；步骤（2）中所述打浆温度优选为40~80℃；步骤（2）中所述冷冻温度优选为0~-30℃。

9.根据权利要求1所述高纯度磷脂酰乙醇胺的制备方法，其特征是：步骤（1）或/和步骤
(2)可重复一次或多次。

10.根据权利要求1-9之一所述高纯度磷脂酰乙醇胺的制备方法，其特征是：步骤（3）中所述天然磷脂酰乙醇胺的纯度大于95%。

权　利　要　求　书1/1页CN 110563759 A
高纯度天然磷脂酰乙醇胺的制备方法
技术领域
[0001]本发明涉及一种高纯度天然磷脂酰乙醇胺的制备办法，属于医药化工原料制备技术领域。

背景技术
[0002]磷脂酰乙醇胺（简称PE），也被称作脑磷脂（cephalin）。

在天然磷脂，比如脱油蛋黄磷脂和大豆粉末磷脂中，它的含量仅次于磷脂酰胆碱（简称PC，俗称卵磷脂<lecithin>），分别约为4-10% 和8-20%。

磷脂酰乙醇胺是生物细胞膜，特别是神经细胞膜的重要组成部分，并参与生物体内许多重要的生命活动，比如细胞信号传导、神经信息的传递、脂蛋白代谢等。

经过多年的发展，磷脂酰乙醇胺在食品、化妆品、保健品以及药物制剂，尤其是在脂质体新剂型等领域均有很广泛的应用。

[0003]磷脂酰乙醇胺是合成脂质体的重要原料之一，其衍生物培化磷脂酰乙醇胺（mPEG2000-DSPE），是隐形脂质体（stealth liposome）中最重要的膜材。

目前磷脂酰乙醇胺的制备方法有化学合成法、天然提取法等。

[0004]专利CN101805367公布了一种磷脂酰乙醇胺的制备方法，它需要用到叠氮化钠，并需要通过钯（Pd）催化的氢化反应才能得到磷脂酰乙醇胺。

该方法使用叠氮化钠这一易爆危险品，带来一定的安全隐患。

使用贵金属钯作为催化剂，又导致原料成本高昂。

[0005]专利CN101270129公布了一种与文献报道(Proc. Natl. Acad. Sci. 1978, 75, 4074-4977)类似的二脂肪酰磷脂酰乙醇胺的制备方法。

该方法以二脂肪酰甘油脂作为原料，连续与三氯氧磷、乙醇胺反应得到二脂肪酰磷脂酰乙醇胺，但三氯氧磷是一高污染、高腐蚀危险品。

[0006]专利CN101805369公布了一种二硬脂酰磷脂酰乙醇胺的制备方法。

该方法以二硬脂酰甘油脂作为原料，其先后与三氯氧磷和苄基保护的乙醇胺反应，最终采用钯催化氢化反应除去苄基保护基后才得到二硬脂酰磷脂酰乙醇胺。

该方法未能避免使用高污染高腐蚀的三氯氧磷，反而增加了一步用成本昂贵的金属钯催化的氢化反应，使得合成路线更长，合成成本更高。

[0007]专利CN102946378公布了一种磷脂酰乙醇胺的制备方法，其也用二脂肪酰甘油脂作为原料，经与三氯化磷、乙醇胺、双氧水在特定条件下连续反应得到二脂肪酰磷脂酰乙醇胺。

该方法避免了三氯氧磷，但替用的三氯化磷仍是高污染、高腐蚀危险品。

[0008]专利CN103087090公布了一种二棕榈酰磷脂酰乙醇胺的制备方法。

该方法不仅使用仍需从三氯氧磷制得的磷酰化中间体，而且还要使用水合肼及吡啶，这后两种物质都对生产人员有害，尤其水合肼具有高毒性。

[0009]以上专利及文献报道的化学合成法除了各自本身的技术缺陷，更普遍存着原料不易得，中间体及产物手性不易控制，反应步骤多，操作繁琐，污染大等问题。

相较而言，从丰富、可再生的蛋黄和大豆等天然原料中直接提取磷脂酰乙醇胺不仅产物手性能保证，而且工艺经济并绿色化。

[0010]专利CN104961765公布了一种以磷脂酰乙醇胺作为主成分的磷脂的制备方法。

这是一种天然提取法，其在氧化铝柱层析分离制备磷脂酰乙醇胺的文献方法基础上，将大豆粉末磷脂或脱油蛋黄粉提取液用氧化铝处理来吸附富集磷脂酰乙醇胺后，再用特定溶剂去洗涤脱附得到了纯度不低于50%的磷脂酰乙醇胺。

该专利得到的磷脂中PE的纯度不够高以致会严重影响它的衍生化，而且工艺中有较大量的氧化铝废渣产生。

[0011]因此开发一种工艺简便、环境友好的高纯度天然磷脂酰乙醇胺的制备方法，具有十分重要的意义。

高纯度天然磷脂酰乙醇胺工艺路线的开发将能够为培化磷脂酰乙醇胺的工艺开发提供方便，有利于促进脂质体制剂行业的发展。

发明内容
[0012]本发明的目的在于提供一种工艺简便、环境友好的高纯度天然磷脂酰乙醇胺的制备方法。

本发明要解决的技术问题是现有的天然提取法所得到的磷脂酰乙醇胺纯度不够高以致会严重影响它的衍生化，而且工艺中有大量氧化铝废渣产生，污染环境。

[0013]为了解决上述技术难题，本发明采用以下技术方案：
一种高纯度天然磷脂酰乙醇胺的制备办法，包含以下步骤：（1）以大豆粉末磷脂或/和脱油蛋黄磷脂以及其提取磷脂酰胆碱后的残渣为原料，用有机溶剂打浆，冷冻后抽滤；（2）所得滤饼用含碱有机溶剂打浆洗涤，冷冻后抽滤；（3）所得滤液脱溶、干燥得到高纯度的天然磷脂酰乙醇胺。

[0014]上述制备方法中：
步骤（１）和步骤（2）中，所述有机溶剂为甲醇、乙醇、异丙醇等低级醇的一种或多种；原料：有机溶剂的比例为1：5 ~ 1：15（m/v ）。

[0015]步骤（1）中，打浆温度为30~80℃；冷冻温度为0~ -30℃。

[0016]步骤（２）中，所述含碱有机溶剂为碱和有机溶剂的混合物；所述碱为有机碱或/和无机碱，包括但不限于三乙胺、二异丙基乙胺、氨水等的一种或多种；碱：有机溶剂的比例为1：25 ~ 1：75（v/v ）；滤饼：含碱有机溶液的比例为1：10 ~ 1：50（m/v ）。

[0017]步骤（2）中，打浆温度为40~80℃；冷冻温度为0℃~ -30℃。

[0018]与现有技术相比，本发明具有以下突出优点：
（1）本发明所使用的磷脂原料为大豆粉末磷脂或/和脱油蛋黄磷脂以及其提取磷脂酰胆碱后的残渣，很好地对残渣进行了二次利用。

[0019]（2）本发明不需用氧化铝或硅胶来富集提纯PE，减少了固体废渣的产生。

[0020]（3）本发明工艺简单，不需要柱层析，容易放大并进行工业化生产。

具体实施方式
[0021]为了更好地说明本发明，我们列举以下实施例，但本发明并不仅限于下述实施例范围之中。

所述磷脂酰乙醇胺纯度是HPLC纯度。

[0022]对比例1
将50g大豆磷脂残渣加入至2L三口瓶中，加入1L乙醇，加入20mL浓氨水，45℃下搅拌50分钟，抽滤，滤饼重新用1L乙醇，20mL浓氨水提取，合并提取液为2L。

将提取液浓缩至1L , 冷冻至-15℃，抽滤，除掉溶剂，得提取物中PE为纯度54%。

将提取物用硅胶柱层析（洗脱液
V三氯甲烷：V甲醇： V水 = 65：25：4），得PE纯度约为85%。

此方法为文献所述方法，虽然获得了相对高纯度的PE（磷脂酰乙醇胺，下同）产品，但操作繁琐，需要柱层析，不适合放大生产。

[0023]实施例1
将30g大豆磷脂残渣加入至500mL三口瓶中,加入300mL乙醇搅拌均匀。

在50℃下热打浆1h，再降温至-15℃继续打浆1h，抽滤，将滤饼二次打浆，并在40℃真空烘干，得滤饼10g。

将10g滤饼加入至500mL三口瓶中，加入250mL乙醇，同时加入5mL浓氨水。

升温至乙醇回流温度搅拌1h，然后降温至-20℃继续冷冻1h，抽滤，滤液除掉溶剂得PE产品，纯度大于95%。

[0024]实施例2
将30g大豆磷脂残渣加入至500mL三口瓶中，加入300mL异丙醇搅拌均匀。

在50℃下热打浆1h，然后降温至-15℃继续打浆1h，抽滤，将滤饼二次打浆，并在40℃真空烘干，得滤饼约12g。

将全部滤饼加入至500mL三口瓶中，加250mL乙醇，同时加入5mL浓氨水，升温至乙醇回流温度搅拌1h。

然后降温至-20℃继续冷冻1h，抽滤，滤液除掉溶剂得PE产品，纯度大于92%。

[0025]实施例3
将30g大豆磷脂残渣加入至500mL三口瓶中,加入300mL甲醇搅拌均匀。

在50℃下热打浆1h，再降温至-15℃继续打浆1h，抽滤，将滤饼二次打浆，并在40℃真空烘干，得滤饼不少于10g。

取10g滤饼加入至三口瓶中，加入250mL乙醇，同时加入5mL浓氨水，升温至乙醇回流温度搅拌1h。

然后降温至-20℃继续冷冻1h，抽滤，滤液除掉溶剂得PE产品，纯度大于83%。

[0026]实施例4
将30g大豆磷脂残渣加入至500mL三口瓶中,加入300mL甲醇搅拌均匀。

在50℃下热打浆1h，再降温至-15℃继续打浆1h，抽滤，将滤饼二次打浆，并在40℃真空烘干，得滤饼不少于10g。

取10g滤饼加入至三口瓶中，加入250mL乙醇，同时加入5mL三乙胺，升温至乙醇回流温度搅拌1h。

然后降温至-20℃继续冷冻1h，抽滤，滤液除掉溶剂得PE产品，纯度大于63%。

[0027]实施例5
将30g大豆磷脂加入至500mL三口烧瓶中，加入300mL甲醇搅拌均匀。

升温至40℃热打浆1h，再降温至-15℃继续打浆1h，抽滤。

滤饼转移至500mL烧瓶中，加入300mL甲醇，搅拌均匀，升温至回流温度搅拌1h。

后降温至-15℃继续打浆1h，抽滤，40℃真空干燥4h得滤饼不少于10g。

取10g滤饼加入至500mL三口烧瓶中，加入250mL乙醇搅拌均匀，加入5mL二异丙胺，加热至回流温度搅拌1h，后降温至-20℃冷冻1h，抽滤，滤液减压浓缩得到PE产品，纯度大于83%。

[0028]实施例 6
将30g大豆磷脂加入至500mL三口烧瓶中，加入300mL甲醇搅拌均匀。

升温至60℃热打浆1h，再降温至-20℃继续打浆1h，抽滤。

滤饼转移至500mL烧瓶中，加入300mL甲醇，搅拌均匀，升温至回流温度搅拌1h。

后降温至-20℃继续打浆1h，抽滤，40℃真空干燥4h得滤饼不少于10g。

取10g滤饼加入至500mL三口烧瓶中，加入300mL乙醇搅拌均匀，加入10mL三乙胺，加热至60℃温度搅拌1h，后降温至-10℃冷冻1h，抽滤，滤液减压浓缩得到PE产品，纯度大于80%。

[0029]实施例 7
将30g大豆磷脂加入至1000mL三口烧瓶中，加入450mL异丙醇搅拌均匀。

升温至80℃热
打浆1h，再降温至-30℃继续打浆1h，抽滤。

滤饼转移至500mL烧瓶中，加入300mL甲醇，搅拌均匀，升温至回流温度搅拌1h。

后降温至-30℃继续打浆1h，抽滤，40℃真空干燥4h得滤饼不少于10g。

取10g滤饼加入至1000mL三口烧瓶中，加入500mL乙醇搅拌均匀，加入7mL三乙胺，加热至回流温度80℃搅拌1h，后降温至-30℃冷冻1h，抽滤，滤液减压浓缩得到PE产品，纯度大于90%。

[0030]实施例8，与实施例1基本相同，但步骤（１）和步骤（2）中，所述有机溶剂为二氯甲烷等卤代烃；原料：有机溶剂的比例为1：1（m/v）。

步骤（1）中，打浆温度为0℃；冷冻温度为-78℃。

步骤（２）中碱：有机溶剂的比例为1：10（v/v）；滤饼：含碱有机溶液的比例为1：1（m/v）。

步骤（2）中，打浆温度为0℃；冷冻温度为-78℃。

[0031]实施例9，与实施例1基本相同，但步骤（１）和步骤（2）中，所述有机溶剂为丙酮；原料：有机溶剂的比例为1：100（m/v）。

步骤（1）中，打浆温度为120℃；冷冻温度为0℃。

步骤（２）中碱：有机溶剂的比例为1：500（v/v）；滤饼：含碱有机溶液的比例为1：100（m/v）。

步骤（2）中，打浆温度为120℃；冷冻温度为0℃。

[0032]实施例10，与实施例1基本相同，但步骤（１）和步骤（2）中，所述有机溶剂为乙腈；原料：有机溶剂的比例为1：5（m/v）。

步骤（1）中，打浆温度为30℃；冷冻温度为-20℃。

步骤（２）中碱：有机溶剂的比例为1：25（v/v）；滤饼：含碱有机溶液的比例为1：10（m/v）。

步骤（2）中，打浆温度为40℃；冷冻温度为0℃。

[0033]实施例11，与实施例1基本相同，但步骤（１）和步骤（2）中，所述有机溶剂为四氢呋喃；原料：有机溶剂的比例为1：15（m/v）。

步骤（1）中，打浆温度为80℃；冷冻温度为0℃。

步骤（２）中碱：有机溶剂的比例为1：75（v/v）；滤饼：含碱有机溶液的比例为1：50（m/v）。

步骤（2）中，打浆温度为80℃；冷冻温度为-30℃。

[0034]实施例12，与实施例1基本相同，但步骤（１）和步骤（2）中，所述原料：有机溶剂的比例为1：5（m/v）。

步骤（1）中，打浆温度为30℃；冷冻温度为0℃。

步骤（２）中碱：有机溶剂的比例为1：25（v/v）；滤饼：含碱有机溶液的比例为1：10（m/v）。

步骤（2）中，打浆温度为40℃；冷冻温度为0℃。

[0035]实施例13，与实施例1基本相同，但步骤（１）和步骤（2）中，所述原料：有机溶剂的比例为1：15（m/v）。

步骤（1）中，打浆温度为80℃；冷冻温度为-30℃。

步骤（２）中碱：有机溶剂的比例为1：75（v/v）；滤饼：含碱有机溶液的比例为1：50（m/v）。

步骤（2）中，打浆温度为80℃；冷冻温度为-30℃。

[0036]实施例14，与实施例1基本相同，但步骤（１）和步骤（2）中，所述原料：有机溶剂的比例为1： 10（m/v）。

步骤（1）中，打浆温度为60℃；冷冻温度为-20℃。

步骤（２）中碱：有机溶剂的比例为1： 50（v/v）；滤饼：含碱有机溶液的比例为1：30（m/v）。

步骤（2）中，打浆温度为60℃；冷冻温度为-10℃。

[0037]实施例9，与实施例1基本相同，但步骤（１）和步骤（2）中，所述原料：有机溶剂的比例为1：15（m/v）。

步骤（1）中，打浆温度为80℃；冷冻温度为-30℃。

步骤（２）中碱：有机溶剂的比例为1：75（v/v）；滤饼：含碱有机溶液的比例为1：50（m/v）。

步骤（2）中，打浆温度为80℃；冷冻温度为-30℃。