猪繁殖呼吸综合征与猪细小病毒多重聚合酶链式反应检测方法的研究
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连 宝 生 物 公 司 和 ＮＥ Ｂ公 司 。 １２ 引 物 设 计 与 合 成 ．
主要病 原 ， 二者 在临 床上 常呈现 混合 感染 ， 随着 临床
疾 病 的复 杂化 ， 非典 型化 ， 通 过临床 症状 很难 鉴别 仅
诊断 ， 传统 的病原 分 离鉴定 、 清学诊 断等 方法 不仅 血
Ｅｓ ａ ｌｓ ｆ Ｄｅ ｅ ｔｏ ｅ ｈ ｄ ｏ Ｓ ｔ ｂ ｉｈ ｏ ｔ ｃ ｉ ｎ Ｍ ｔ ｏ ｎ ＰＳ ＲＶ ｎ ａ ｄ ＰＰＶ ｙ Ｍ ｕ ｔｐ ｅ ｂ ｌｉ ｌ ｘ ＰＣＲ
ＬＩ Ｄｅ ｃ ｅ ｇ ，Ｗ Ａ ＮＧ ｉｉ ａ Ｕ — ｈ ｎ Ｌ —ｕ ｎ ，ＧＵＡＮ — ｕ ，ＬＵ ｎ Ｌｉ ｉ ｈ Ｙａ
费时 、 费力 ， 且 特 异性 较 差 。Ｐ Ｒ技 术 已在 畜 禽 而 Ｃ
根 据 Ｇｅ Ｂ ｎ ｎ ａ ｋ已发 表 Ｐ ＲＳ 基 因序 列 和 Ｒ ＶＮ
Ｐ Ｖ Ｎ ２基 因序 列 ， 用 Ｄ Ｐ Ｐ 应 ＮＡＭＡＮ 软 件 对 Ｐ Ｖ Ｐ
ＶＰ 基 因和 Ｐ ＲＳ Ｎ 基 因 进行 同源 性 分 析 ， 据 ２ Ｒ Ｖ 根 分析结 果 ， 用 Ｐ ｉ ｒ． 应 ｒ ｍｅ５ ０对 各 自保 守 区 设 计 ２对 引物 ， 序 列为 ： 其
ｃ ｉｉａｌｒ ｓ ａ ｃ ｌｎ ｃ ｅ ｅ ｒ ｈ． Ｋ ｅ ｒ ｓ： ｙ ｗｏ ｄ ＰＲＲＳＶ ； ＰＰＶ ； ＰＣＲ
目前 ， Ｒ Ｖ 与 Ｐ Ｖ 均是 引起 猪 繁殖 障碍 的 Ｐ ＲＳ Ｐ
２ １ 、 ２ ０ ０Ｄ ｒ ｅ 、 ａｏ ｅ 均 购 自大 ． １ＤＬ ，０ ＮＡ Ｍａｋ ｒＡｇ ｒｓ 等
（ ．Ｃ ｌｅ ｅ ｆＡｎ ｍａ ｃｅ ｃ ｎ ｃ ｎ ｌｇ Ｌｉｏ ｉｇ Ｖ ｃ ｔ ｎ ｌ ｏｌｇ １ ｏｌｇ ｏ ｉ ｌ ｉｎ ｅａ ｄ Ｔｅｈ ｏｏ ｙ， ａ ｎ ｎ ｏａ ｉ ａ ｌ ｅ，Ｔ ｅｉ ｇＬｉｏ ｉｇ １ ２ ０ ， ｈ ｎ ； Ｓ ｏ Ｃ ｅ ｉｌ ｎ ａ ｎｎ １ ０ １ Ｃ ｉａ ２ ｏｌｇ ｆ Ａｎ ｍ ｌ ｃ ｎ ｅ ｎ ｅ ｈ ｏｏ ｙ，Ｈｅ ｅ Ｎｏ ｔ ｎ ｖ ｒｉ ．Ｃ ｌ ｅ ｉ ａ ｉ ｃ ｄ Ｔ ｃ ｎ ｌｇ ｅ ｏ Ｓ ｅ ａ ｂ ｉ ｒｈ Ｕ ｉ ｅｓｔ ｙ） Ａｂ ｔａ ｔ Ａｃ ｏ ｄ ｎ ｏ ＰＲＲＳ Ｎ ｎ ＰＶ ｓｒ ｃ ： ｃ ｒ ｉ ｇ ｔ Ｖ ａ ｄ Ｐ ＮＰ２ ｇ ｎ ｅ ｕ ｎ ｅ ｎ Ｇｅ Ｂ ｎ ，２ ｐ ｉｓ ｏ ｒ ｒ ｒ ｅ ｉ ｎ ｄ，ｂ ｓ ｄ ｏ ｅ ｅ ｓ ｑ ｅ ｃ ｓ ｉ ｎ ａ ｋ ａ ｒ ｆｐ ｉ ｍｅ ｓ ｗｅ ｅ ｄ ｓｇ ｅ ａｅ ｎ ｓｎ ｌ Ｐ ｉ ｇ ｅ ＣＲ，ｍｕ ｔｐ ｅ Ｒ ｏ ｄ ｔ ｎ ｒ ｐ ｉ ｚ ｄ，ｄ ｔ ｃ ｉｎ ｍｅ ｈ ｄ ｏ ｌｉ ｌｘ ＰＣ ｏ ＲＲＳ ａ ｄ Ｐ ｌ ｌ ｘ ＰＣ ｃ ｎ ｉ ｏ ｓ ｗｅ ｅ ｏ ｔ ｉ ｉ ｍｉｅ ｅ ｅ ｔ ｔ ｏ ｆ ｍｕ ｔ ｅ Ｒ ｎ Ｐ ｏ ｐ ｎ ＰＶ ｓ ｓ ｕ ｉｄ ｗａ ｔ ｄ ｅ ， ｔ ａ ｓ ｔ ａ ，ｔ ｒ ｕ ｈ ｏ ｃ ＣＲ ｒ ａ ｔ ｎ，ａ ｌ ｉｄ ｓ ｅ ｉｉ ｆ ａ ｍｅ ｔ ｆ ｈ ｔｉ ｏｓ ｙ ｈｏ ｇ ｎ ｅＰ ｅ ｃｉ ｏ ｍｐ ｉ ｅ ｐ ｃｆ ｒ ｇ ｎ ｆ ｃ ｏ ＰＲＲＳ ２ ２ ｐ ａ ｄ Ｐ Ｖ ０ ｂ ｎ ＰＶ ５ ｂ ． ｉ ｍ ｅ ｈ ｄ ａ ａ ｔ ｏ ７ １ ｐ Ｔｈ ｓ ｔ ｏ ｄ ｐ ｓｔ ｃ ｍｂ ｎ ｄ ｄ ｔ ｃ ｉｎ ａ ｄ ｄ ｆｅ ｅ ｔ ｌ ｉ ｇ ｏ ｉ ｆＰＲＲＳ ａ ｄ Ｐ ｏ ｉ ｅ ｅ ｅ ｔ ｎ ｉ ｒ ｎ ｉ ａ ｎ ｓｓ ｏ ｏ ｆ ａ ｄ Ｖ ｎ ＰＶ ，ｗｈ ｃ ｏ ｓ ｓ ｅ ｒ ｃ ｉａ ａ ｕ ，ａ ｄ ｐ ｏ ｉ ｅ ｅ ｅ ｅ ｃ ｏ ｉｈ ｐ ｓ ｅ ｓ ｓ ｐ ａ ｔｃ ｌｖ ｌ ｅ ｎ ｒ ｖｄ ｓ ｒ ｆ ｒ ｎ ｅ ｆ ｒ
Ｐ Ｒ Ｖ 和 Ｐ Ｖ联 合检 测和鉴 别诊 断 ， Ｒ Ｓ Ｐ 具有较 高的 实用价值 ， 临床进 一步研 究提供参 考。 为 关 键词 ： 猪繁 殖 呼吸综 合征 ； 细小病毒 ； 猪 聚合酶链 式反 应
［ 中图分 类号 ］ ￥ ５ ． ５ ［ ８ ２ ６ 文献标 识码］ Ａ ［ 章编 号］ １ ０ —７ ４ ２ １ ） ５０ １—３ 文 ０ ４６ ０ （ ０ ２ ０ —０ ６０
１ ６
Ｊ ｕ ｎ ｌｏ ｉ ｌ ｃｅ ｃ ｎ ｅｅ ｉａ ｙ Ｍ ｅ ｉｉｅ ｏ ｒ ａ ｆＡｎ ｍａ ｉｎ ｅａ ｄＶ ｔ ｒｎ ｒ ｄｃｎ Ｓ
Ｖ２
猪 繁 殖 呼 吸综 合 征 与猪 细小 病 毒 多重 聚合 酶 链 式 反 应 检 测 方 法 的 研 究
一
Ｐ Ｒ基础上 ， 多重 Ｐ Ｒ反应 条件 进行 了优 化 ， 步研 究 了一 种 Ｐ Ｒ Ｃ 对 Ｃ 初 Ｒ Ｓ与 Ｐ Ｖ 多重 Ｐ Ｒ检 测 方 Ｐ Ｃ
法， 即通过 一次 Ｐ Ｒ反 应 ， 同时扩 增 出 Ｐ Ｒ Ｖ ２ ２ ｐ和 Ｐ Ｖ ５ ｂ Ｃ 可 Ｒ Ｓ ０ ｂ Ｐ ７ １ ｐ的特 异性 片段 ， 方 法适 合 于 该
刘 德 成 ，王 丽娟 官 丽 辉 ， ，路 燕
（ ． 宁省 职业学 院 动物 科技 学 院 ， 宁 铁 岭 １ ２ ０ ；． １辽 辽 １ ０ １ ２ 河北 省北方 学 院动物 科技学 院牧 工系 ） 摘 要 ： 本研 究根据 Ｇ ｎ ａｋ已发表 Ｐ Ｒ Ｖ 基 因序列和 Ｐ Ｖ Ｎ ２基 因序 列 ， 计 ２对 引物 ， 单 ｅＢｎ Ｒ Ｓ Ｎ Ｐ Ｐ 设 在
主要病 原 ， 二者 在临 床上 常呈现 混合 感染 ， 随着 临床
疾 病 的复 杂化 ， 非典 型化 ， 通 过临床 症状 很难 鉴别 仅
诊断 ， 传统 的病原 分 离鉴定 、 清学诊 断等 方法 不仅 血
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ＬＩ Ｄｅ ｃ ｅ ｇ ，Ｗ Ａ ＮＧ ｉｉ ａ Ｕ — ｈ ｎ Ｌ —ｕ ｎ ，ＧＵＡＮ — ｕ ，ＬＵ ｎ Ｌｉ ｉ ｈ Ｙａ
费时 、 费力 ， 且 特 异性 较 差 。Ｐ Ｒ技 术 已在 畜 禽 而 Ｃ
根 据 Ｇｅ Ｂ ｎ ｎ ａ ｋ已发 表 Ｐ ＲＳ 基 因序 列 和 Ｒ ＶＮ
Ｐ Ｖ Ｎ ２基 因序 列 ， 用 Ｄ Ｐ Ｐ 应 ＮＡＭＡＮ 软 件 对 Ｐ Ｖ Ｐ
ＶＰ 基 因和 Ｐ ＲＳ Ｎ 基 因 进行 同源 性 分 析 ， 据 ２ Ｒ Ｖ 根 分析结 果 ， 用 Ｐ ｉ ｒ． 应 ｒ ｍｅ５ ０对 各 自保 守 区 设 计 ２对 引物 ， 序 列为 ： 其
ｃ ｉｉａｌｒ ｓ ａ ｃ ｌｎ ｃ ｅ ｅ ｒ ｈ． Ｋ ｅ ｒ ｓ： ｙ ｗｏ ｄ ＰＲＲＳＶ ； ＰＰＶ ； ＰＣＲ
目前 ， Ｒ Ｖ 与 Ｐ Ｖ 均是 引起 猪 繁殖 障碍 的 Ｐ ＲＳ Ｐ
２ １ 、 ２ ０ ０Ｄ ｒ ｅ 、 ａｏ ｅ 均 购 自大 ． １ＤＬ ，０ ＮＡ Ｍａｋ ｒＡｇ ｒｓ 等
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Ｐ Ｒ Ｖ 和 Ｐ Ｖ联 合检 测和鉴 别诊 断 ， Ｒ Ｓ Ｐ 具有较 高的 实用价值 ， 临床进 一步研 究提供参 考。 为 关 键词 ： 猪繁 殖 呼吸综 合征 ； 细小病毒 ； 猪 聚合酶链 式反 应
［ 中图分 类号 ］ ￥ ５ ． ５ ［ ８ ２ ６ 文献标 识码］ Ａ ［ 章编 号］ １ ０ —７ ４ ２ １ ） ５０ １—３ 文 ０ ４６ ０ （ ０ ２ ０ —０ ６０
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Ｊ ｕ ｎ ｌｏ ｉ ｌ ｃｅ ｃ ｎ ｅｅ ｉａ ｙ Ｍ ｅ ｉｉｅ ｏ ｒ ａ ｆＡｎ ｍａ ｉｎ ｅａ ｄＶ ｔ ｒｎ ｒ ｄｃｎ Ｓ
Ｖ２
猪 繁 殖 呼 吸综 合 征 与猪 细小 病 毒 多重 聚合 酶 链 式 反 应 检 测 方 法 的 研 究
一
Ｐ Ｒ基础上 ， 多重 Ｐ Ｒ反应 条件 进行 了优 化 ， 步研 究 了一 种 Ｐ Ｒ Ｃ 对 Ｃ 初 Ｒ Ｓ与 Ｐ Ｖ 多重 Ｐ Ｒ检 测 方 Ｐ Ｃ
法， 即通过 一次 Ｐ Ｒ反 应 ， 同时扩 增 出 Ｐ Ｒ Ｖ ２ ２ ｐ和 Ｐ Ｖ ５ ｂ Ｃ 可 Ｒ Ｓ ０ ｂ Ｐ ７ １ ｐ的特 异性 片段 ， 方 法适 合 于 该
刘 德 成 ，王 丽娟 官 丽 辉 ， ，路 燕
（ ． 宁省 职业学 院 动物 科技 学 院 ， 宁 铁 岭 １ ２ ０ ；． １辽 辽 １ ０ １ ２ 河北 省北方 学 院动物 科技学 院牧 工系 ） 摘 要 ： 本研 究根据 Ｇ ｎ ａｋ已发表 Ｐ Ｒ Ｖ 基 因序列和 Ｐ Ｖ Ｎ ２基 因序 列 ， 计 ２对 引物 ， 单 ｅＢｎ Ｒ Ｓ Ｎ Ｐ Ｐ 设 在