大鼠皮层星形胶质细胞体外培养的对比研究

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低渗对体外培养星形胶质细胞增殖的影响

２５３
讨
论
细胞Ｂｄｒｕ阳性率没有明显改变；通过流式细胞技术检测也提示低渗干预组与对照组细胞相比，细胞周期其
在脑缺血的病理损伤过程当中，星形胶质细胞的活化增殖扮演了极其重要的角色Ｊ。尽管这些增殖的胶质细胞在早期发挥一定的神经保护作用，是过但度的增殖仍是神经修复的主要障碍之一＿。目前普２遍认为缺血微环境、血脑屏障损伤、炎性反应等都与脑缺血后星形胶质细胞的活化增殖相关Ｊ但其具体机，
ＭｅｉａＣｌｇ，ＨｕｚｏｇＵｎｖｒｉｆｃｅｃｎｅｈｏｏｙｄｃｌｏｌｅｅａｈｎｉｅｓｙｏｉｎｅａｄＴｃｎｌｇ，Ｗｕａ３００，ＣｈｎｔＳｈｎ４０３ｉａＣｏｒｓＯｄｎｕｈｒ：ＹＵＺｉｕｎＥｉ：ｈｙａ — ｕ１６ｔｍ．ｒｅｐｎｉｇａｔｏｈ — ａ，ｍａｌｚｉｕｎｙ＠２．ｏｙ
血后各种通道功能失调，水通道、通道、离子通如钾阴
的发生机制提供了实验依据。
参考文献
［］Ｓｆｎｅ１ｏｒｉＭＶ．Ｍｏｃｌｒｄｓｃｏｆｒａｔｅａｔｇｏｉａｄｇａｏｗｌｕａｉｅｔｎｏｃｉｓｏｌｓｎｌｌｅｓｉｅｖｒｉｓｉ
胞周期分布的情况。结果
我们发现低渗干预星形胶质细胞１恢复正常培养基后１、４、８，照组和ｈ并２２４ｈ对低渗干预ｌ星形胶质细胞的增ｈ对

大鼠大脑皮层星形胶质细胞体外培养方法的建立及鉴定

ＩＩ）唧ＣｏＦＡＳＴＲｏ‘ ｒＩ１ＥＳ Ⅵ ｎＣＩＪＩ瓜Ｅ删
ＲＡＴ’ ＳＣＥＲＥＢＲＡＩＣ０ＲＴＥＸＦＡＮＹｕｅ，ＳＨＡＮＧＹａ－ｚｈｅｎ
（ＨｅｂｅｉＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＳｔｕｄｙａｎｄＥｘｐｌｏｉｔａｔｉｏｎｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅ，ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅＭｄｉｅｃｉｎｅ，Ｃｈｅｎｇｄｅ
ｃｅｌｌｓｏｆｒａｔｓａｂｏｕｔｌ一３ｄａｙｓｎｅｗｂｏｎｒｗｅｒｅｃｕｌｔｉｖａｔｅｄｉｎｖｉｔｒｏ．Ｔｈｅｉｆｂｒｏｂｌａｓｔｃｅｌｌｓｎｄａｎｅｕｒｏｎｓｗｅｒｅｒｅｍｏｖｅｄｔｈｒｏｕｇｈｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｌａｄｈｅｒｅｎｔｍｅｔｈｏｄａｎｄｐａｓｓａｇｅ．ｈｅＴａｓｔｒｏｃｙｔｅｓｗｅｒｅｉｄｅｎｔｉｉｆｄｂｅｙｄｅｔｅｃｔｉｎｇａｓｔｒｏｃｙｔｅｓｓｐｅｃｉｉｆｃｐｍｔｅｉｎ－ｇｌｉａｌｉｆｂｒｉｌａｒｙ
星形胶质细胞的形态且生长旺盛，第３代星形胶质细胞纯度达９５％。结论：本研究建立的星形胶质细胞体外培养方法操作简单、可靠。

体外培养星形胶质细胞缺氧／复氧后EAAT2、谷氨酰胺合成酶的表达

【关键词】缺氧／复氧星形胶质细胞
谷氨酰氨合成酶亚低温兴奋性氨基酸转运体２
Ｓｔｕｄｙｏｆｈｙｐｏｘｉａ／ｒｅｏｘｙｇｅｎａｔｉｏｎｏｎｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｅｘｃｉｔａｔｏｒｙａｍｉｎｏａｃｉｄｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ－２ａｎｄｇｌｕｔａｍｉｎｅｓｙｎｔｈｅｔａｓｅｉｎｃｕｌ・
对照组（Ｃ）、缺氧／复氧组（Ｈ／Ｒ）、亚低温组（Ｈ／Ｍ＋Ｒ），缺氧１２ｈ后Ｈ／Ｒ组及Ｈ／ｌＶｌ＋Ｒ组分别于３７ｃｃ及３２ ℃ 复氧。每组设复氧
２ｈ、４ｈ、８ｈ、１２ｈ、２４ｈ、４８ｈ等时间点。ＭＴＴ测定ＥＡＡＴ２、ＧＳ的表达情况。结果
延长逐渐增多，差异有统计学意义（Ｐ＜ｌ０．０５），Ｈ／Ｍ＋Ｒ组的ＥＡＡＴ２表达与Ｈ／Ｒ组相比较，表达量下降趋势小，差异有统计学
意义（Ｐ＜０．０５）；Ｈ／Ｒ组与Ｈ／Ｍ＋Ｒ组的ＧＳ表达量随着复氧时间延长。均呈现增高趋势，与Ｃ组比较增高显著，差异有统计学意义（Ｐ＜Ｏ．０５），Ｈ／Ｍ＋Ｒ组的ＧＳ表达量与Ｈ／Ｒ组比较增高趋势更加明显，差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）。结论缺氧／复氧及

Long Evans大鼠视皮层星型胶质细胞的体外培养

胶质细胞是神经系统内数量众多的一大类细胞群体，约占中枢神经系统（central nervous system，CNS）细胞总数的90%，星型胶质细胞（astrocyte）是其中主要的组成成分。

传统观念一直认为，胶质细胞在神经系统中仅起辅助作用，是支持神经元的骨架，为神经元提供营养以及清除突触间隙中过多的离子和（或）神经递质。

胶质细胞英文名Glia来自希腊语Glu，意为胶质。

自1997年Pfrieger和Barres[1]发现胶质细胞能促进神经元间的突触联系后，对胶质细胞的认识进入了一个崭新的阶段。

现已发现星型胶质细胞不仅参与维持中枢神经系统的正常结构和功能[2-4]，而且具有神经营养和神经生长抑制作用[5-6]。

此外，星型胶质细胞在脑损伤、神经退行性疾病和神经再生过程中均发挥着作用[7-8]。

本实验通过大鼠视皮质星型胶质细胞的原代和传代培养，采用免疫荧光化学方法进行鉴定，以期建立星型胶质细胞体外培养体系，为体外研究星型胶质细胞的功能和机制奠定基础。

1材料与方法1.1材料1.1.1实验动物动物采用出生1d的清洁级Long Evans（LE）新生鼠，雌雄不限，体质量3~5g，购于第三军医大学大坪医院野战外科研究所实验动物中心，动检证字SCXK（渝）20020003。

1.1.2主要试剂DMEM/F12培养液（Gibco，USA）；胰蛋白酶（Sig-ma，USA）；胎牛血清（Gibco，USA）；D-Hanks（天津百浩生物科技有限公司，中国）；小鼠抗胶质纤维酸性蛋白（GFAP）单克隆抗体（Sigma，USA）；小鼠抗硫酸软骨素（CS-56）单克隆抗体（Abcam，UK）；FITC标记的兔抗小鼠IgG（Sigma，USA）。

1.2方法1.2.1视皮层星型胶质细胞的培养新生LE大鼠经75%乙醇消毒5min后迅速断头处死，沿矢状线剪开，剥除头皮及颅骨，用解剖镊将大脑及小脑完整取出，置入一盛有4℃无菌解剖液的培养皿中，体视显微镜下剥离软脑膜。

大鼠脊髓星形胶质细胞的体外培养与鉴定

ａｇｅｄ１ｔｏ２ｄａｙｗｅｒｅｕｓｅｄｉｎｔｈｅｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ．Ｓｐｉｎａｌｃｏｒｄｗａｓｄｉｓｓｅｃｔｅｄｕｎｄｅｒｓｔｅｒｉｌｅｏｐｅｒａｔｉｏｎａｎｄｃｅｌｌｓｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎｔｈｒｏｕｇｈｔｈｅｍｅｃｈａｎｉｃｌａｍｅｔｈｏｄａｎｄ
ｏｆＣｈｉｎａ，２０１４，１１（０２）：００９ — ０ｉｔｖｅ：Ｔｏｅｘｐｌｏｒｅｔｈｅｍｅｔｈｏｄｓｏｆｐｕｒｉｉｆｃａｔｉｏｎａｎｄｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆａｓｔｒｏｅｙｔｅｓｉｎｖｉｔｒｏｒａｔｐｉｎｌａｃｏｒｄｔｉｓｓｕｅｃｕｌｔｕｒｅ．Ｍｅｔｈｏｄ：Ｒａｔｓ
ｐｒｏｐｏｒｔｉｏｎｏｆａｓｔｒｏｃｙｔｅｗａｓｂｅｙｏｎｄ９５％ｉｎｔｈｅｔｈｉｒｄｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｃｅｌｌｓ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｔｈｅｃｕｌｔｉｖａｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄｏｆａｓｔｒｏｃｙｔｅｆｒｏｍｒａｔｓｐｉｎａｌｃｏｒｄｉｓｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄｗｉｔｈｈｉｇｈｐｕｒｉｔｙｔｏｐｒｏｖｉｄｅｂａｓｌａｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｌａｍｏｄｅｌｓｆｏｒｓｐｉｎｌａｃｏｒｄａｓｔｒｏｃｙｔｅｒｅｓｅａｒｃｈ．

大鼠骨髓间充质干细胞的培养与鉴定

大鼠骨髓间充质干细胞的培养与鉴定干细胞研究一直是生物医学领域的前沿热点，其中骨髓间充质干细胞（BMSCs）因其具有多向分化潜能和低免疫原性而备受。

在众多研究中，大鼠BMSCs的体外培养和鉴定方法为其在科研和临床领域的应用提供了基础。

本文将就大鼠BMSCs的培养、鉴定方法进行详细介绍，并结合实验数据进行阐述。

BMSCs是一种成体干细胞，具有自我更新和多向分化潜能，可以分化为多种细胞类型，如成骨细胞、脂肪细胞、肌肉细胞等。

因其来源广泛，免疫原性低，大鼠BMSCs已成为再生医学、免疫调节等领域的重要研究对象。

近年来，随着生物技术的不断发展，BMSCs的培养和鉴定方法也得到了不断优化和改进。

BMSCs的培养需要无菌环境，常用的培养基为DMEM、F12等，添加适量的生长因子和抗生素以维持细胞的生长和存活。

细胞的鉴定主要包括形态学观察、表面标志物检测和多向分化潜能的证实。

其中，表面标志物如CDCD90等可用来区分BMSCs和其他细胞，多向分化潜能的证实包括成骨、成脂和成肌等方向的诱导分化。

本实验采用大鼠BMSCs的常规体外培养方法。

具体步骤如下：采集大鼠骨髓：在无菌环境下，用注射器抽取大鼠股骨和胫骨骨髓，加入肝素抗凝。

细胞分离：将采集的骨髓用密度梯度离心法分离出单个核细胞。

细胞培养：将单个核细胞接种于培养瓶中，用含10%血清、1%抗生素和1%谷氨酰胺的培养基培养。

细胞鉴定：经过约7-10天的培养，细胞达到80%-90%融合时，进行细胞鉴定。

通过形态学观察、表面标志物检测和多向分化潜能的证实，对BMSCs进行鉴定。

通过观察细胞的形态和生长情况，发现培养的BMSCs呈典型的长梭形，且细胞间连接紧密（图1）。

经表面标志物检测，BMSCs表达CD29和CD90等间充质干细胞表面标志物（图2）。

在多向分化潜能的证实中，我们发现BMSCs经成骨、成脂和成肌诱导后，可分别形成矿化结节、脂肪滴和肌纤维（图3）。

这些结果说明所培养的细胞为BMSCs。

体外培养大鼠皮层神经元和星形胶质细胞氧糖剥夺后DDR1的表达情况

Ｈｅｐａｔｏｃｅ１ｌｕｌａｒＣａｒｃｉｎｏｍａｌ－Ｊ］．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒ。１ｏｇｙ，２０Ｉ２，１４２
（６）：ｌ２６４ — １２７３．
ＬＪ］．ｖａｃｃｉｎｅ，２Ｏ１２，３０（３８）：５５９５ — ５６０２．
胞。建立氧糖剥夺（ＯＧＤ）损伤模型并随机分为神经元正常对照组、神经元ＯＧＤ组、星形胶质细胞
正常对照组和星形胶质细胞ＯＧＤ组。噻唑蓝（ＭＴＴ）比色法测定细胞活性；免疫荧光染色及Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ方法检测各组ＤＤＲ１的表达情况。结果：与正常对照组相比，ＯＧＤ组细胞形态发生
ห้องสมุดไป่ตู้
［７］
Ａａｌａｅｉ — ＡｎｄａｂｉｌｉＳＨ，ＡｌａｖｉａｎＳＭ．ＲｅｇｕｌａｔｏｒｙＴｃｅｌｌｓａｒｅ
ｔｈｅｍｏｓｔｉｍｐｏｒｔａｎｔｄｅｔｅｒｍｉｎａｎｔｆａｃｔｏｒｏｆｈｅｐａｔｉｔｉｓＢｉｎ— ｆｅｅｔｉｏｎｐｒｏｇｎｏｓｉｓ：ａｓｙｓｔｅｍａｔｉｃｒｅｖｉｅｗａｎｄｍｅｔａ — ａｎａｌｙｓｉｓ
陕西医学杂志２０１４年２月第４３卷第２期
参考文献

反应性星形胶质细胞活化的作用研究

反应性星形胶质细胞活化的作用研究中文摘要：目的脊髓损伤后反应性胶质细胞活化增殖形成致密胶质瘢痕影响轴突的再生和神经功能的恢复。

线粒体融合蛋白2（Mfn2）亦被称为增值抑制基因蛋白，许多研究证实其抑制细胞增殖。

本实验通过建立体外星形胶质细胞机械划伤模型和大鼠脊髓损伤模型来探讨Mfn2在反应性星形胶质细胞活化中的作用。

方法第一部分：实验分为机械划伤0h组、机械划伤6h组、机械划伤12h组、机械划伤24h 组和机械划伤48h组；在划伤24h纯化的星形胶质细胞分为Adv-GFP-Mfn2组、Adv-GFP 组和对照组。

免疫荧光检测划伤后GFAP的表达变化；Western-blot检测GFAP、Ras-Raf1-ERK1/2、PCNA、CyclinD1及Mfn2等蛋白的变化情况。

第二部分：清洁级成年雌性SD大鼠(250-300g),随机分成4个组(n=10):假手术组(Sham组,n=24),脊髓损伤治疗对照组(Adv-GFP组,n=24),脊髓损伤实验组(Adv-Mfn2-GFP组,n=24),损伤对照组（SCI组,n=24）。

于术后3天取材（n=10），通过Western-Blot、免疫荧光和免疫组化等技术检测重组腺病毒能否成功转染SCI模型脊髓组织内并稳定表达目的基因Mfn2，以及高表达Mfn2对反应性胶质细胞活化的影响。

结果第一部分：星形胶质细胞在机械划伤刺激后GFAP表达持续上升；而Mfn2的表达减少，于划伤后24小时表达最低；Ras-Raf1-ERK1/2通路蛋白、CyclinD1及PCNA表达增高，于划伤后24h达到高峰。

Adv-Mfn2-GFP组高表达Mfn2，但GFAP、Ras-Raf1-ERK1/2、PCNA 及CyclinD1蛋白表达较Adv-GFP组及对照组显著下降。

第二部分：携带目的基因的重组腺病毒成功转染大鼠脊髓；通过Western Blot、免疫荧光和免疫组化技术证实转染Adv-Mfn2-GFP后损伤局部能稳定表达Mfn2；Mfn2的高表达可以显著减少GFAP和CSPGs的表达水平。

维生素K2降低体外星形胶质细胞的缺氧性损伤

维生素K2降低体外星形胶质细胞的缺氧性损伤杨日云;吴坚;尚静;郑震林;郭丰【期刊名称】《南通大学学报（医学版）》【年(卷),期】2017(037)005【摘要】目的:研究在缺氧环境下,维生素K2(vitamin K2,VK2)对星形胶质细胞的保护作用.方法:利用新生SD大鼠大脑皮层进行星形胶质细胞培养,用5-二苯基四氮唑溴盐[3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2-H-tetrazolium bromide,MTT]法检测VK2对缺氧星形胶质细胞活性的影响.用二氯二氢荧光素-乙酰乙酸酯(2',7'-dichlorofluorescin diacetate,DCF-DA)和二氢乙锭(dihydroethidium,DHE)染色检测VK2对缺氧条件下星形胶质细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)的含量和超氧化物产生的作用.用实时聚合酶链式反应(real time polymerase chain reaction,RT-PCR)检测VK2处理的缺氧星形胶质细胞内生长停滞特异性基因6(growth arrest-specific gene 6,Gas6)和抗凝血因子蛋白质S(protein S)的mRNA表达量变化.结果:在0.5μmol/L和1μmol/L浓度下VK2显著提高缺氧条件下星形胶质细胞的活性.VK2使缺氧星形胶质细胞内ROS浓度降低及Gas 6和protein S的基因表达量升高.结论:在缺氧环境下,VK2可以提高星形胶质细胞的活性和降低ROS和超氧化物的产生,而Gas6和protein S可能参与此作用过程.【总页数】6页(P413-418)【作者】杨日云;吴坚;尚静;郑震林;郭丰【作者单位】南通大学医学院基础医学研究室,南通 226001;南通大学医学院基础医学研究室,南通 226001;南通大学神经再生研究所;南通大学医学院基础医学研究室,南通 226001;南通大学附属医院生殖医学中心【正文语种】中文【中图分类】Q25【相关文献】1.星形胶质细胞正常条件培养液对体外脑缺氧/复氧损伤神经元的影响 [J], 宋岳涛;唐一鹏;洪庆涛2.体外培养新生大鼠星形胶质细胞在缺氧缺血损伤时β1整合素的表达变化 [J], 陈蓉;姚裕家;陈晓霞3.p38MAPK在体外培养星形胶质细胞缺氧/复氧损伤中的表达 [J], 龚晨;窦长新;李海亮;董瑞国4.维生素K2 通过降低D-双功能蛋白活性抑制肝癌的实验研究 [J], 孔令玉; 路欣; 姜玲玲5.维生素K2通过降低D-双功能蛋白活性抑制肝癌的实验分析 [J], 王佳;赵卿因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

壳聚糖水凝胶与星形胶质细胞体外生物相容性评价的实验研究

ｎｏａａｓｒｒｔ；ａｔｃｔｓｗｃｅｎｔｌＷｉｔｓｓｏｙｅｅａｏｒｏ— ｃｔｒｄｗｔｈｔｓｎｈｄｏｅ．ｔｅｍｏｐｏｏｉａｈｍｓｆａｔｃｔｓＷｂｅｖｄｕｄｒｌｈｌｅｕｕｉｃｉａｙｒｇ１ｈｒｈｌｇｃｅ￣ｃｓｏｓｏｙｅａｏｓｒｅｎｓｔｈｏｌｒｓｅｉ
ｎｕａｓｕｎｉｅｒｇ．ｈｔｓｎｃｌｒｅｅｒｌｓｅｅｇｎｅｉＣｏａｈｏｉ，Ｂ—ｇｙｅｏｈｓｈｔ，ａｄｈｄｏｙｔｙｅｌｌｓｒｓｄａａｔｒｌｔｒｐｒｈｔｓｎｉｔｎｌｄｌｃｒｌｏｐａｅｎｙｒｘｅｈｌｌｏｅｗｅｅｕｅｓｒｗｍａｅａｐｅａｅｃｉａｐｃｕｉｓｏｏ
ｓｃｅｓｌｒｐｒｄ；ｔｅｉｈｔｄａｔｏｙｅｅｅｓｒｌｅｎｓｅｏｄｔｎｗｔｒｎｈｆｒｔｎｐｏｅｓｓｈｅａＩｃｔｎｃｉｓｎｕｃｓｆｌｐｅａｅｈｓｅｓｃｔｓｗｒｔ — ｉ，ｉｏｃｎｉｏｉｂａｃｍａｏｒｃｓｅ；ｔｓ０ｙｅｏｈｔａｕｙｅｒａｋｄｉｈｏｉＴｓｏ
ＳｉｃｓＡａｅｙｏＭｉａｙＭｅｉｌｃｎｅ，ｃｎｅ，ｃｄｍｅｆｌｒｄａｉｃ＆ｉｔｃＳｅｚ
ＡｂＩｓ刚
１０５，ｈａ０８０Ｃ／）ｎ
：ｏｓｄｈｉｏａｉｉｔｆｃｆｏａｙｒｇｌｔｓｒｃｔｎｖｔ，ａｄｔｘｌｒｓｆａｉｉｔｓｓａｏｔｒｌｉＴｔｙｔｅｂｃｍｐｔｌｙｏ［ｔｓｎｈｄｏｅｈａｔｏｙｅｉｉｏｎｏｅｐｏｅｉｅｓｌｙａｃｆｌｍａｅｉｎｕｂｉｉｗｉｓｒｔｂｉｄａ

原代细胞的培养

原代细胞的培养原代细胞的培养不知道遭到多少研究生及博士生吐槽，其真实情况是，一边在超净工作台上哭，一边手上还在不停地提取原代细胞。

相比较细胞系细胞而言，原代细胞的培养周期长、成本高、摸索困难。

从大鼠的筛选分笼到母鼠受精怀孕，从孕育周期的看护到胎鼠的出生降临，从胎鼠脑组织的提取到神经细胞的培养，到最后的药物对原代细胞的作用机制研究。

这种复杂和辛苦的原代培养过程，其实也是最能反应药物在实验小白鼠上作用机制和效果最真实的反应。

1、大鼠的筛选和分笼首先是一个大笼子里放6只大鼠（5雌性，1雄性），每隔两天喂水和繁殖饲料，一星期给大鼠换一次垫料（给大鼠换垫料是体力活）。

舒适的空间和环境能让大鼠更好地繁殖，产下更多的胎鼠用于科学研究。

2、原代细胞的提取及培养原代细胞的提取一般是将胎鼠先用纯净水冲洗干净，在放进超净工作台处理。

先将胎鼠放入75%酒精消毒1min,再用手术剪刀将胎鼠的脑组织提取出来，放入遇冷的D-Hank's液中。

用手术剪刀将皮层的脑组织剪碎，加入等体积的0.25%胰酶进行消化，置于二氧化碳培养箱37℃培养。

（1）新生大鼠原代海马组织中神经干细胞的培养取新生24h内新生大鼠，75%乙醇浸泡消毒5min，用剪刀将头颅取下，剥离颅骨，暴露皮质下海马组织，于冰上快速取出组织放在遇冷的DMEM/F12或者PBS缓冲液中清洗，吸出置于15mLEP中，加入ACCUTASE1.5-2.0mL置于培养箱中，37℃、5%CO2混匀消化10min，取出混匀吹打组织块，1000r.5min-1离心，加入培养基重悬细胞过200目细胞筛（70μm），置于37℃、5%CO2培养箱中悬浮培养。

通过Nestin染色鉴定星形胶质细胞以确保纯度。

（2）大脑皮层原代星形胶质细胞培养细胞制备和培养从1 日龄新生Sprague-Dawley 大鼠的大脑皮层制备原代星形胶质细胞。

简而言之，分离大脑皮质并用0.25% 胰蛋白酶在37°C下消化15 分钟，然后通过70 μm 细胞过滤器过滤。

Tamoxifen对星形胶质细胞增殖的作用

ｐｉｒｕｔｒｄａｔｅｔｓｐｏｉｒｔｎｉｉｏｒｍａｙｃｌｅｓｏｙｅｒｌｅａｉｎｖｔ．ＭｅｏｓｕｒｆｏｒｈｔｄＰｉｒｕｔｒｄｒｔｃｒｃｌａｔｏｙｅｒａｄｍｌｒｍａｙｃｌｅａｏｔａｓｒｃｔｓｗｅｅｒｎｏｙｕｉ
ＷｉＵＺｉｕｎＤｐｒｎｏｅｒｌｙｏ￣ｓｉｌｏ￣ｉＭｅｉｏｌｅｕｚｏｇＵｉｒｔｏｅ，Ｙｈ— ａ．ｅａｔｔｆＮｕｏｇ，ＴｎｉＨｏｐａ，ＴｎｄｃＣｌｇ，Ｈａｈｎｎｖｓｙｆｙｍｅｏｔｌａｅｅｉ
Ｔｍｘｅｒｉ．％ＤＳｒｏｔｌｏｐ．ＡｉｅｅｔｉｏｎｓＯ，２，４ｎ８）ｔｅｃａｇｓｆａｏｉｎｏｔ０２ｆｗｈＭＯｆｎｏｇｕ）ｔｆｒｎｍｅｉ（ｈ１ｈ２ｈａｄｈ，ｈｈｎｅｏｏｃｒｒｄｆｔｐｔ４
２
脑与神经疾病杂志２１；ＦＰ多克隆抗体和Ｂｄ单克隆抗体购自美国ＧＡｒｕＮｏｒｅｓ司；ＩＣ标记的羊抗小鼠ＩＧ购自美国ｅｍａｒ公ｋＦＴｇ
Ｐｅｃ公司；ＹｉｅｒＣ３标记的驴抗兔ＩＧ购自美国Ｊｃｓｎｇａｋｏ
ａｔｃｔｓｐｏｉｒｔｎａｄｃｌｃｃｅｐｏｒｓｉｎｗｒｅｅｔｄｂｏｙｏｔｎｍｍｕｏｕｒｓｅｃｔｉｉｇｓｒｙｅｒｌｅａｉｎｅｌｙｌｒｇｅｓｏｅｅｄｔｃｅｙｆｗｃｔｍｅｒａｄｉｏｆｏｌｙｎｆｏｅｃｎｅｓａｎｎｌ

星形胶质细胞体外培养与鉴定

星形胶质细胞的培养方法与鉴定（Culture and Indentification of Astrocytes）胶质细胞是神经系统内数量众多的一大类细胞群体,约占中枢神经系统(CNS)细胞总数的90%,星形胶质细胞(astrocytes, AS)是其中主要的组成成分。

自1846年Rudolt Virchow发现神经胶质细胞以来,传统研究一直认为星形胶质细胞只对神经元起营养支持作用,而对神经信号的传递和处理不起作用, 在过去的几年中,上述观念已经发生了巨大的转变。

AS在中枢神经系统的发育及病理生理过程中起重要作用，如神经系统发育、突触传递、神经系统内环境的稳定及新陈代谢等中枢神经系统的多种正常生理活动,以及神经疾病的病理机制。

此外，它还具有摄取、灭活和供给神经递质,抗氧化、营养修复以及抑制神经元过度兴奋和帮助学习记忆等多种功能。

目前对星形胶质细胞功能的认识主要是通过对离体培养星形胶质细胞的观察获得的,然而既往文献报道的培养星形胶质细胞与在体脑内的星形胶质细胞相比较存在显著差异,例如培养的星形胶质细胞形态上通常为扁平多角,核周体丰富,仅有少量枝状突起,而在体的星形胶质细胞则一般表现为胞体较小,突起多而细长;培养条件下星形胶质细胞常过度增殖分裂直至细胞铺满支持物,且随细胞培养时间的延长细胞间的异质性逐渐消失,而成年脑内星形胶质细胞的数量稳定,不同部位星形胶质细胞具有显著的异质性。

由于在体内星形胶质细胞与其它神经细胞混杂存在,因此需要对星形胶质细胞进行纯化,才能深入了解其形态结构和生物学功能。

在限定细胞种植密度（低密度接种）,限制培养基成分及其更换次数的培养条件下,星形胶质细胞表现出阶段性的体外发育过程。

本文参照国内外培养分离胶质细胞的方法,根据多年的实验研究,改进了大鼠大脑皮质星形胶质细胞的体外培养方法,为后续实验对星形胶质细胞的生物学作用研究提供了的基本的实验模型。

1 材料与方法1. 1 实验动物新生1～3 d 的SD 乳鼠1～2 只(昆明医学院动物所提供) ,雌雄不限。

星形胶质细胞主要细胞骨架研究的最新进展

星形胶质细胞（Astrocyte，Ast）是中枢神经系统的主要细胞成分之一，约占正常成人中枢神经系统细胞总数的 40%，其功能日益受到重视。

其细胞骨架主要由微丝（MF）、微管（MT）和中间纤维（IFs）3 种蛋白质组成，其细胞骨架的复杂变化在中枢神经系统的生理和病理变化中发挥重要作用，本文就生理病理条件下 Ast 细胞骨架的复杂变化（细胞骨架的生物学特性、信号转导途径、细胞骨架的构建与其在临床疾病中变化等）作一综述。

Ast 数量巨大，约占正常成人中枢神经系统细胞总数的 40%，具有十分重要的作用，在维持脑内平衡中起关键作用，通过合成和释放神经转导物质、调节突触的活性、支持及保护神经元的代谢来维持神经元的功能。

MF、MT 和 IFs 几乎参与细胞一切重要的生命活动，如细胞内各种细胞器的空间定位及其在细胞质的位置改变、细胞运动、细胞内外物质运输、细胞信号转导、细胞增殖分裂与分化等。

一、细胞骨架的生物学特性细胞骨架是由蛋白纤维交织成的立体网状结构。

如同一种内部框架，充满整个细胞质的空间，与外侧的细胞膜和内侧的核膜存在一定的结构联系。

真核细胞骨架主要由 MF、MT 和 IFs 组成，它们分别由不同的蛋白单体组装而成，这些细胞骨架在细胞的生命活动中具有重要的作用。

（一）MFMF 是三种骨架结构中最细的，其直径约 7 nm，主要由肌动蛋白组成，以游离球状肌动蛋白（G-actin）或聚合纤维状肌动蛋白（F-actin）形式存在，只有聚合态的 F-actin 才具有生物作用。

G-actin 聚合形成 F-actin，使丝状伪足伸长，F-actin 解聚引起丝状伪足回缩。

聚合及非聚合态的肌动蛋白能与多种结合蛋白相互作用，这些结合蛋白对肌动蛋白的聚合及 MF 的稳定、长度及分布具有调节作用。

MF 骨架是细胞骨架的一种，与维持细胞形态、细胞分裂、细胞运动、细胞内物质转运及信号转导等多种功能密切相关：一般认为细胞外基质一整合素一细胞骨架轴是细胞感受外界机械信号并将其转化为生化信号的主要途径。

星形胶质细胞研究方法

星形胶质细胞研究方法
1. 免疫组织化学：利用特异性抗体标记星形胶质细胞的特定蛋白，通过荧光或显色反应在显微镜下观察其分布和形态。

2. 细胞培养：从脑组织中分离和培养星形胶质细胞，以便在体外进行实验和研究。

3. 基因表达分析：使用逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）、荧光定量 PCR（qPCR）或基因芯片等技术，检测星形胶质细胞中特定基因的表达水平。

4. 蛋白质分析：通过 Western blotting、免疫沉淀、ELISA 等方法，检测星形胶质细胞中特定蛋白质的表达、修饰和相互作用。

5. 细胞功能测定：评估星形胶质细胞的代谢活性、谷氨酸摄取、离子通道功能等。

6. 影像学技术：应用磁共振成像（MRI）、正电子发射断层扫描（PET）等影像学手段，研究星形胶质细胞在活体中的活动和功能。

7. 电生理技术：使用膜片钳、细胞外记录等电生理方法，研究星形胶质细胞的离子通道和信号传递特性。

8. 动物模型：建立星形胶质细胞相关的动物模型，如转基因或基因敲除小鼠，以研究其在疾病发生和发展中的作用。

9. 单细胞技术：应用单细胞 RNA 测序（scRNA-seq）等技术，分析星形胶质细胞的异质性和不同亚型的特征。

这些方法可以帮助我们深入了解星形胶质细胞的生物学特性、功能以及在神经系统中的作用。

具体的研究方法选择将取决于研究的具体问题和实验条件。

电针对体外培养星形胶质细胞机械性损伤后反应性胶质化的影响

１滨州医学院实验医学研究中心
【摘要】目的
烟台市
２４０；６０３２滨州医学院口腔学院
观察电针对体外培养里形胶质细胞（ｓｏｙｅｓ）Ａｔｃｔ，Ａｔ机械性损伤后反应性胶质化的影响。方法取新生３ｒｄ
龄ｓＤ大鼠的大脑皮层进行Ａｔｓ原代培养，取第三、四代细胞制作细胞机械性损伤模型，电针刺激，用倒置相差显微镜及免疫细胞化学荧光染色观察细胞生长增殖，细胞形态及胶质纤维酸性蛋白（］ｌｂｉａｃｉｐｏｅ，ＦＰ表达的变化。结果ｇｉｒｌｒａｉｃｒｉＧＡ）ａｆｌｙｄｔｎｉ模型组Ａｔｓ机械性损伤后，细胞增生，积变大，ＦＰ表达增强。电针组较模型组细胞增生减少，体ＧＡ细胞体积变化不大，ＦＰＧＡ表达较弱。结论电针刺激可以抑制体外培养Ａｔｓ机械性损伤后的增生，降低细胞内ＧＡＦＰ的表达，即电针可以抑制Ａｔｓ的反
ｉｕｙＭｅｏｓＮｏａｌｄａｅＳａｓｅｅｓｌｔｏｃｒｕｐｉａｕｔｒｏｃｒｂａａｔｃｔｓｈｅｈｎｃｌｉｕｎｒ．ｔｄｅｎｔ —ｇＤｒｔｗｒｅｃｄｔａｒｏｔｒｒｃｌｅｆｅｒｓｏｙ．Ｔｅｍｃａｉａｎｒｊｈａ３ｅｅｙｍｙｕｅｌｒｅｊｙ
应性胶质化。
【关键词】电针；星形胶质细胞；机械性损伤；反应性胶质化；胶质纤维酸性蛋白【中图分类号】Ｒ３．【３８２文献标识码】Ａ【文章编号】１００１（０００－２４００１５０２１）４０４－３

氧糖剥夺对体外培养大鼠星形胶质细胞内Cdh1蛋白表达的影响及机制

第４卷第３期第２４页１７２１０２年６月
华中科技大学学报（医学版）
ＡｃａＭｅｉｃｃｏｔｄＵｎｖＳｉＴｅｈｎｌＨｕａｈｏｚｎｇ
Ｖ０．１Ｎｏ３Ｐ．２４１４．７
Ｊｎ２１ｕ．０２
ｒｎｏｙｄｖｄｄｉｔｈｏｔｏｒｕ，ａｄｍｌｉｉｅｎｏｔｅｃｎｒｌｇｏｐＯＧＤｎｅｏｅｙ（１ｈａｄｒｃｖｒＯＧＤ／１ｈＲ）ｇｏｐ，ｒｕＯＧＤｈａｄｒｃｖｒ０ＧＤ／６ｎｅｏｅｙ（６ｈＲ）
ｇｒｐ．ｈｅｅｏｕＴｘｐｒｓｉｎｏｅｓｏｆＣｄｈｌａｎｄＳｋｐ２ｐｒｔｉａｔｃｅｉｇＷｅｔｒｂｏ．Ａｓｒｃｅｅｅｒｎｍｉｅｎｔｏｒｌｏｅｎｓｗｓｄｅｅｔｄｂｙｕｓｎｓｅｎｌｔｔｏｙｔｓｗｒａｄｏｚｄｉｏｃｎｔｏｇｒｐ，ＧＤｒｕｐａｏｕＯ６ｈｇｏｎｄｈｙｐｘｉｈｇｏｏａ６ｒｕｐ，ｎｄｔｐｒｓｉｎａｈｅｅｘｅｓｏｏｆＣｄｈｌｒｅｎｐｏｔｉｗａｔｃｅｙｕｓｎｇＷｅｓｅｎｂｌ．ｏｏｓｄｅｅｔｄｂｉｔｒｏｔＢｌｄ
氧糖剥夺对体外培养大鼠星形胶质细胞内Ｃｈｄｌ蛋白表达的影响及机制＊
邱瑾，姚文龙，张明，邹妲婧，燕琳，张传汉 △
华中科技大学同济医学院附属同济医院麻醉科，武汉

动物大脑培养实验报告

一、实验目的1. 掌握动物大脑组织的分离和培养技术。

2. 了解大脑细胞在体外培养条件下的生长特性。

3. 通过观察细胞形态和生长情况，评估培养体系的适宜性。

二、实验材料1. 新鲜动物大脑组织（小鼠或大鼠）。

2. 胰蛋白酶。

3. DMEM/F12培养基（含10%胎牛血清）。

4. 5% CO2培养箱。

5. 显微镜及配套设备。

6. 培养皿、移液枪、吸管等实验器材。

三、实验方法1. 组织分离：将新鲜动物大脑组织置于冰浴中，沿大脑中线切开，取出大脑皮层。

用胰蛋白酶消化处理，使组织离散成单个细胞。

2. 细胞培养：将离散的细胞悬液加入预消毒的培养皿中，置于5% CO2培养箱中培养。

培养条件为37℃、饱和湿度。

3. 观察与记录：定期观察细胞形态、生长情况，记录细胞数量和形态变化。

4. 实验分组：将细胞培养分为对照组和实验组，对照组使用正常培养基，实验组分别加入不同浓度的化学物质。

5. 毒性检测：观察细胞生长情况，记录细胞死亡率和形态变化，评估化学物质的毒性。

四、实验结果1. 细胞形态：培养的细胞呈圆形或多角形，细胞质均匀，细胞核清晰可见。

2. 细胞生长：细胞在体外培养条件下生长迅速，呈层状排列。

3. 毒性检测：实验组细胞生长明显受到抑制，死亡率较高，细胞形态发生改变，出现细胞核固缩、细胞膜破裂等现象。

五、讨论与分析1. 本实验成功分离和培养了动物大脑细胞，为后续研究提供了良好的细胞模型。

2. 通过观察细胞形态和生长情况，发现培养体系适宜，细胞生长状况良好。

3. 实验结果表明，化学物质对动物大脑细胞具有一定的毒性，可诱导细胞死亡和形态改变。

六、结论1. 本实验成功分离和培养了动物大脑细胞，为研究大脑细胞生物学特性提供了实验基础。

2. 通过观察细胞形态和生长情况，评估了培养体系的适宜性。

3. 实验结果表明，化学物质对动物大脑细胞具有一定的毒性，可诱导细胞死亡和形态改变。

七、展望1. 进一步优化培养体系，提高细胞生长质量和数量。

星形胶质细胞的体外生长特性

星形胶质细胞的体外生长特性蔡杰;彭会明;周洁萍;孙宗全;刘仁刚【摘要】目的研究纯化培养的星形胶质细胞的体外生长特性,作为进一步研究星形胶质细胞功能的依据.方法将纯化的星形胶质细胞分为6h 、12h 、18h 、24h 、30h 、36h 、42h 、48h 、54h 、60h 、72h 、84h 、96h 、120h 14个时间组,培养不同的时间后,采用细胞计数法绘制细胞生长曲线观察细胞的生长状况,用流式细胞学检测细胞周期各时相的变化并绘制增殖指数曲线,所得数据用SPSS软件进行统计学分析.结果①星形胶质细胞的生长曲线可明显的分为三个阶段:第一阶段为0至24h,在此时间内生长曲线平缓上升,其斜率为0.64.第二阶段为24h至84h,在此时间内生长曲线急剧上升,其斜率为2.69;此阶段中24h至48h时曲线最陡,斜率为3.94,细胞呈指数生长.第三阶段为84h至120h,在此时间内生长曲线走势平直,其斜率为-0.005.②星形胶质细胞的增殖指数在第一个细胞增殖周期内可以反映细胞的增殖状态,第一个细胞周期结束后,细胞的数量继续上升增殖指数却降低了.结论培养的星形胶质细胞的生长过程分为潜伏期、指数生长期和停滞期三个阶段,其潜伏期为0至24h,指数生长期为24h至48h,停滞期为84h以后.单纯用增殖指数等类似的指标作为细胞增殖状态的判断标准是有一定局限性的,一定要将这些指标与细胞数量结合起来分析.%Objective This study is aiming to investigate the growth characteristics of the purified as-trocytes in vitro, which the next study will base on. Methods Purified astrocytes from cerebral cortex of newborn rats were divided into 14 groups. After incubation for different hours(6h ,12h , 18h , 24h , 30h ,36h , 42h , 48h , 54h , 60h ,72h , 84h , 96h , 120h) , we observed the proliferation by cell counting and drew the growth curve of astrocytes, and we observed the cell cycle by the flow cytometerand drew the proliferation index curve of astrocytes The corresponding data were analyzed with SPSS statistical software. Results The growth curve of astrocytes were divided into three phases. The first phase continues from 0 to 24 hours, the slope rate is 0. 64. The second phase continues from 24 to 84 hours, the slope rate is 2. 69. At the first part of the phase (from 24 to 48 hours) the slope rate is 3. 94 and the growth of cells is the fastest in the total process. The cells start the third phase after 84 hours, the slope rate is -0. 005. The proliferation index of astrocytes can reflect the proliferation of astrocytes in the first cell cycle. After the first cell cycle, the proliferation index reduces but the number of the cells is increase. Conclusion The growth process of purified astrocytes can be divided into 3 phases; latent phase (from 0 to 24 hours) , logarithmic growth phase (from 24 to 48 hours) and stagnate phase (from 84 to 120 hours). By using merely the indexes, such as the proliferation index, it is circumscribed to estimate the proliferation of astrocytes.【期刊名称】《中国组织化学与细胞化学杂志》【年(卷),期】2011(020)005【总页数】5页(P486-490)【关键词】星形胶质细胞;增殖;细胞周期;生长曲线;增殖曲线【作者】蔡杰;彭会明;周洁萍;孙宗全;刘仁刚【作者单位】华中科技大学同济医学院附属协和医院心外科,武汉,430022;华中科技大学同济医学院基础医学院解剖学系,武汉,430030;华中科技大学同济医学院基础医学院解剖学系,武汉,430030;华中科技大学同济医学院附属协和医院心外科,武汉,430022;华中科技大学同济医学院基础医学院解剖学系,武汉,430030【正文语种】中文【中图分类】R329星形胶质细胞（Astrocyte，AS）是中枢神经系统内数目最多的一类细胞，它在神经系统发育、突触传递、神经组织修复与再生、神经免疫以及多种神经疾病中的病理机制等方面，都起着十分重要的作用［1-4］。

盐酸法舒地尔对体外培养星形胶质细胞氧糖剥夺损伤的保护作用

盐酸法舒地尔对体外培养星形胶质细胞氧糖剥夺损伤的保护作用孙莉;赵燕;陈诚;郭莲军;陈玉华【期刊名称】《中国药理学与毒理学杂志》【年(卷),期】2015(29)3【摘要】目的研究盐酸法舒地尔(FH)对大鼠皮质星形胶质细胞氧糖剥夺损伤(OGD)的保护作用.方法传代培养的大鼠皮质星形胶质细胞与无糖Na2S2O42 mmol· L-1孵育4h,制备OGD模型.FH 5和10μmol·L-1在OGD前2h加入.采用噻唑蓝(MTT)法检测细胞存活;比色法检测乳酸脱氢酶(LDH);乙炔基脱氧尿苷(EdU)掺入法检测星形胶质细胞DNA合成;Hoechst染色和丫啶橙(AO)/溴化乙啶(EB)荧光双染观察细胞凋亡;2,7-二氯氢化荧光素(DHCF-DA)荧光染色和硝基四氮唑蓝(NBT)还原实验检测细胞内活性氧(ROS)水平.结果与正常对照组比较,OGD模型组星形胶质细胞存活率为(24±6)％,下降了4倍(P＜0.01);OGD模型组LDH释放量显著升高至(366±7) U· L-1(P＜0.01).加入FH 5和10 μmol·L-1的预处理组,细胞存活率分别上升至(42±5)％和(43±5)％,LDH释放分别下降至290±18和(268±20) U· L-1(P＜0.01),细胞EdU阳性率由OGD模型组的(47±6)％,分别下降到(35±6)％和(29±5)％(P＜0.01).Hoechst染色及AO/EB双染实验结显示,FH能显著减少OGD损伤后细胞的凋亡及坏死,使晚期凋亡细胞比例减少(P＜0.05);DCFH-DA荧光和NBT还原实验显示,FH降低OGD损伤后ROS水平,且FH10 μmol·L-1的预处理组降低的幅度比5 μmol·L-1的预处理组更明显,但两组差异无统计学意义.结论 FH对传代培养的大鼠皮质星形胶质细胞OGD具有保护作用,其作用机制可能与降低细胞内ROS水平有关.【总页数】6页(P385-390)【作者】孙莉;赵燕;陈诚;郭莲军;陈玉华【作者单位】长江航运总医院武汉脑科医院神经内科,湖北武汉430010;华中科技大学同济医学院药理学系,湖北武汉430030;华中科技大学同济医学院药理学系,湖北武汉430030;华中科技大学同济医学院药理学系,湖北武汉430030;长江航运总医院武汉脑科医院神经内科,湖北武汉430010【正文语种】中文【中图分类】R971【相关文献】1.银杏叶提取物对氧糖剥夺诱导的体外培养大鼠星形胶质细胞损伤的影响 [J], 牟芳芳;于永娟;张泽安;陆萍萍;邵水金2.川芎嗪对大鼠星形胶质细胞在氧糖剥夺损伤中的保护作用 [J], 毛定安;尹飞;彭镜;熊洁3.HMGB1基因沉默对氧糖剥夺/复氧所致星形胶质细胞损伤的保护作用 [J], 汶海琪;罗勇;陈瑞芳;李满;庞月珊;谢宸宸4.Bcl-2基因转染对体外培养大鼠大脑皮层神经细胞氧糖剥夺损伤的保护作用 [J], 张忠胜;梅元武;苏庆杰;容琼文5.体外培养大鼠皮层神经元和星形胶质细胞氧糖剥夺后DDR1的表达情况 [J], 邢东;董辉;朱明霞因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

大鼠皮层星形胶质细胞体外培养的对比研究

低渗对体外培养星形胶质细胞增殖的影响

大鼠大脑皮层星形胶质细胞体外培养方法的建立及鉴定

体外培养星形胶质细胞缺氧／复氧后EAAT2、谷氨酰胺合成酶的表达

Long Evans大鼠视皮层星型胶质细胞的体外培养

大鼠脊髓星形胶质细胞的体外培养与鉴定

大鼠骨髓间充质干细胞的培养与鉴定

体外培养大鼠皮层神经元和星形胶质细胞氧糖剥夺后DDR1的表达情况

反应性星形胶质细胞活化的作用研究

维生素K2降低体外星形胶质细胞的缺氧性损伤

壳聚糖水凝胶与星形胶质细胞体外生物相容性评价的实验研究

原代细胞的培养

Tamoxifen对星形胶质细胞增殖的作用

星形胶质细胞体外培养与鉴定

星形胶质细胞主要细胞骨架研究的最新进展

星形胶质细胞 研究方法

电针对体外培养星形胶质细胞机械性损伤后反应性胶质化的影响

氧糖剥夺对体外培养大鼠星形胶质细胞内Cdh1蛋白表达的影响及机制

动物大脑培养实验报告

星形胶质细胞的体外生长特性

盐酸法舒地尔对体外培养星形胶质细胞氧糖剥夺损伤的保护作用

星形胶质细胞研究方法