鸡传染性支气管炎病毒沈阳分离株S1基因序列测定及同源性分析
一株鸡传染性支气管炎病毒的分离鉴定及S1基因分析
一株鸡传染性支气管炎病毒的分离鉴定及S1基因分析谢蟾龙;杨傲冰;尚书文;林德锐【摘要】广西某种鸡场一株IBV,命名为GXJLZ6/150707,对其进行鸡胚发育分析,并测定S1全基因序列.结果显示,鸡胚出现蜷缩胚或发育不良等病理现象.S1基因序列分析发现,分离株GXJLZ6/150707与疫苗株4/91等793/B型毒株为相同的基因来源,与腺胃型毒株LX4型毒株亲缘性较近,氨基酸相似性为94.8％;与经典肾型疫苗毒株D274、Gray、澳大利亚T株和Mass型经典呼吸型疫苗毒株H52、H120和W93株等亲缘性较远,氨基酸相似性为65.7～85.6％.考虑到该种鸡场长期使用活疫苗ND+H120+4/91的情况,因此推测,分离毒株GXJLZ6/150707可能是一种嵌合病毒,即H120等Mass型疫苗毒株与4/91疫苗毒发生重组后形成的新型病毒.本研究结果可为IBV的防控工作和疫苗株的选择提供科学依据.【期刊名称】《广东畜牧兽医科技》【年(卷),期】2018(043)003【总页数】5页(P29-33)【关键词】传染性支气管炎;分离;鉴定;S1基因分析【作者】谢蟾龙;杨傲冰;尚书文;林德锐【作者单位】广东永顺生物制药股份有限公司,广东广州 511356;广东永顺生物制药股份有限公司,广东广州 511356;广东永顺生物制药股份有限公司,广东广州511356;广东永顺生物制药股份有限公司,广东广州 511356【正文语种】中文【中图分类】S852.65+7鸡传染性支气管炎（IB）是由传染性支气管炎病毒（IBV）引起的高度接触性、急性传染病，以气管啰音、咳嗽和打喷嚏为特征。
可引起料肉比降低、肉鸡品质受损、产蛋量下降和蛋的品质下降等，给养殖业造成严重的经济损失［1，2］。
IBV也能在输卵管复制。
成年鸡感染后产蛋量会下降10～50%或更多，同时畸形蛋数量增多，蛋壳色泽发生改变。
感染鸡群的产蛋率一般不能再恢复到正常水平。
我国鸡传染性支气管炎病毒的遗传变异和进化分析
我国鸡传染性支气管炎病毒的遗传变异和进化分析作者：李玉杰盛媛魏秀丽徐恩民吴静刘娜马秀丽来源：《家禽科学》2021年第06期摘要：本研究测定了2020年以来本实验室从不同地区分离的44个IBV毒株的S1基因序列，并与参考株序列进行比较分析。
结果发现分离的44个IBV毒株共占据5个分支。
其中：第一分支为QX型，包括25个分离株，QX型分离株又分为ClusterⅠ亚分支（7个）和ClusterⅡ亚分支（18个）;第二分支为4/91型，包括12个分离株;第三分支为LDT3型，包括3个分离株;第四分支为Mass型，包括2个分离株;第五分支为TW型，包括2个分离株。
从毒株遗传进化分析结果可以看出，QX型仍是我国IBV流行的主要基因型。
关键词：传染性支气管炎病毒;S1基因;遗传变异;进化变异中图分类号：S858.31 文献标识码：B 文章编号：1673-1085（2021）6-0005-05传染性支气管炎（IB）是鸡的一种急性、高度接触性的病毒性呼吸道疾病，在国内流行甚广。
传染性支气管炎病毒（IBV）属于冠状病毒科冠状病毒属的成员之一，其基因组为单股线状正链RNA，含有3种主要结构蛋白，即纤突蛋白S、膜蛋白M和核蛋白N。
S1基因是IBV 基因组中最易发生变异的部位，其编码蛋白可诱导机体产生IBV特异的中和抗体和血凝抑制抗体，S1蛋白在进化上比M蛋白和N蛋白都表现活跃，因此可不断导致IBV新的血清型、亚型和变异株的产生，致使IBV疫苗免疫失败，给鸡传染性支气管炎的防制带来新的困难。
由于传染性支气管炎病毒血清型和变异株众多，各型之间无交叉反应或交叉反应差。
因此，对于传染性支气管炎的防控，首先需明确当地流行传染性支气管炎的血清型和变异株。
从分子水平揭示近年来IBV的变异情况以及不同毒株之间的进化关系，对我国今后开展传染性支气管炎的监测和综合防控具有重要的指导意义。
因此，本研究針对2020年以来从不同地区分离的44株IBV毒株进行S1基因序列测定，比较分析了分离毒株的遗传演化，明确流行的基因型与变异趋势，对疫苗选择和疾病防控具有参考价值。
鸡传染性支气管炎病毒合肥分离株S1基因序列及致病性分析
Chinese Journal of Animal Infectious Diseases中国动物传染病学报收稿日期：2021-06-16基金项目：国家蛋鸡产业技术体系（CARS-40-K13）；安徽农科院平台项目（2021YL065）；安徽省现代农业产业技术体系六安综合试验站（AHCYJSTX-06-21）作者简介：胡晓苗，男，助理研究员，主要从事家禽传染病研究通信作者：2021,29(6): 22-27·研究论文·摘 要：从安徽合肥一养殖户送检的临床样品中分离到一株鸡传染性支气管炎病毒，命名为HF200702。
分离株在鸡胚盲传3代过程中可引起典型的侏儒胚现象；基于分离株S1基因序列对毒株进行分型结果显示，分离株属于目前流行的QX 型，与H120、M41、4/91、QX 等疫苗株的同源性分别为76.1%、75.6%、78.3%、95.0%；用分离株第10代鸡胚尿囊液感染1日龄SPF 雏鸡，对雏鸡的致死率为41.6%，感染鸡出现精神沉郁、张口呼吸、气管啰音等临床症状以及气管纤毛摆动停滞、肾脏肿大、尿酸盐沉积等病理变化。
感染鸡从感染后第2 d 开始持续向外界排毒直至感染后28 d 。
该研究数据表明，从安徽合肥某养鸡场疑似发生传染性支气管炎的鸡群中分离到QX 型的IBV ，该毒株对雏鸡有较强的致病作用，研究结果为了解该地区IBV 的流行情况提供了参考数据。
关键词：鸡传染性支气管炎病毒；合肥分离株；S1基因序列分析；致病性中图分类号：S852.659.6文献标志码：A文章编号：1674-6422（2021）06-0022-06鸡传染性支气管炎病毒合肥分离株S1基因序列及致病性分析胡晓苗1，盛 豪2，郑忠毅2，卞希一2，张丹俊1，周继勇2，廖 敏2，潘孝成1（1.安徽省农科院畜牧兽医研究所 安徽省畜禽疫病研究中心 畜禽产品安全工程安徽省重点实验室，合肥230031；2.浙江大学 农业农村部动物病毒学重点实验室，杭州310058）Abstract: An Avian infectious bronchitis virus (IBV) strain HF202007 was isolated from clinical samples collected from a farm in Hefei, Anhui province. This isolate caused typical dwarf embryos during 3 blind passages. The genotyping of S1 gene of this isolate showed that it belonged to QX-like type, which was a dominant genotype in China. The allantoic fl uid of chick embryos infected the 10th passage virus was used to infect one day old SPF chickens. The mortality of infected chickens was 41.6%. All the infected chickens showed respiratory signs such as coughing, sneezing and tracheal vocalization. The kidneys of dead birds were swollen, pale and exhibited severe urate deposition. The virus-shedding from infected chickens started 2 dpi until 28 dpi. In summary, QX-like IBV strain HF202007 was isolated from Hefei, Anhui province and pathogenic to young chickens. This study provided a reference for understanding the epidemic situation of IBV in this area.Key words: Avian infectious bronchitis virus; S1gene; sequencing; pathogenicityAnalysis of S1 Gene Sequence and Pathogenicity of an Avian Infectious BronchitisVirus Isolate from Hefei, ChinaHU Xiaomiao 1, SHENG Hao 2, ZHENG Zhongyi 2, BIAN Xiyi 2, ZHANG Danjun 1, ZHOU Jiyong 2,LIAO Min 2, PAN Xiaocheng 1(1. Anhui Province Key Laboratory of Livestock and Poultry Product Safety Engineering, Livestock and Poultry Epidemic Diseases Research Center of Anhui Province, Institute of Animal Husbandry and V eterinary Medicine, Anhui Academy of Agricultural Sciences , Hefei 230031, China; 2 KeyLaboratory of Animal Virology of Ministry of Agriculture and Rural Affairs, Zhejiang University, Hangzhou 310058, China)· 23 ·第29卷第6期胡晓苗等：鸡传染性支气管炎病毒合肥分离株S1基因序列及致病性分析鸡传染性支气管炎病毒（Infectious bronchitis virus，IBV）是一种γ属冠状病毒，引起鸡传染性支气管炎（infectious bronchitis，IB）在全世界范围广泛流行，严重危害家禽的健康养殖。
鸡传染性支气管炎病毒的分离鉴定及S1基因序列分析的开题报告
鸡传染性支气管炎病毒的分离鉴定及S1基因序列分析的开题报告一、研究背景及意义鸡传染性支气管炎（Infectious bronchitis，简称IB）是一种由禽传染性支气管炎病毒（Infectious bronchitis virus，IBV）引起的高度传染性呼吸道疾病，其主要临床表现为呼吸困难、鸡冠、眼睛和面部水肿、排泄物增多或减少等，对鸡的健康和养殖业的经济效益造成了很大的损失。
目前，虽然IBV可以通过疫苗预防和控制，但疫苗种类较多，不同毒株的疫苗保护效果不同，到目前为止，还没有一种完全有效的IBV疫苗，为了更好地预防和控制IBV感染，必须进一步深入研究IBV，对其分子特性和病理机理进行深入探究。
二、研究内容及目标本研究旨在通过分离IBV病毒，对其进行鉴定，并分析其S1基因序列，以期更深入地了解IBV的分子特性和病理机理，进而为研究和控制IBV感染提供科学依据和理论支持。
具体研究内容包括以下三个方面：1. 鸡传染性支气管炎病毒的分离鉴定：本研究将从感染鸡的上呼吸道样本中提取IBV病毒，并通过细胞培养等方法进行纯化和鉴定，确定其毒株类型。
2. S1基因的PCR扩增和测序：本研究将采用PCR技术扩增IBV病毒S1基因序列，并进行测序，获取其S1基因序列。
3. S1基因序列分析：通过对IBV病毒S1基因序列进行分析，包括启动子、终止密码子、保守位点和可变位点等，在比较其与其他IBV序列差异的基础上，研究IBV病毒的分子特性和病理机理。
三、研究方法1. 实验材料：IBV感染鸡的上呼吸道样本、细胞培养液等。
2. 实验方法：（1）IBV病毒分离鉴定：将感染鸡的上呼吸道样本进行稀释后，接种于鸡胚蛋并进行细胞培养，使用酶联免疫吸附试验（ELISA）和逆转录PCR等方法对样本中IBV病毒进行鉴定。
（2）S1基因PCR扩增和测序：采用PCR技术，合成适合的引物，对IBV病毒中的S1基因进行扩增，经过聚合酶扩增反应、纯化等步骤后，得到S1基因的PCR产物，将其进行测序。
鸡传染性支气管炎病毒KIBVXJ株S1基因的克隆及序列分析
有 良好 的免 疫 原 性 ， 以刺 激 机 体 产 生 特 异性 的免 可
研 究 ＫＩ ＶＸ Ｂ Ｊ株 Ｓ １基 因 的分子 结构 、 传进化 特点 遗
是 ５ ］ 其 临床症 状 以咳嗽 、 打喷 嚏 、 管 哕音 、 气 呼吸 困难 、 肠 疫抗 体 ， 良好 的 制 苗 毒 株［ 。本 试 验从 分子 水 平 纪 ９ ０年 代 报 道 肾 型 传 染 性 支 气 管 炎 （ ｎｅｔ ｕ 及基 因型 ， Ｉｆｃｉ ｓ ｏ 为新 疫 苗研 发筛 选 新 毒株 和 Ｉ Ｂ的防控 提 ｂ ｏ ｃ ｉｓ Ｉ ） ｒｎ ｈｔ ， 以来 ， ｉ Ｂ 肾型 传 染 性 支 气 管 炎 在 我 国大 供 可靠 的理 论 依据 。 部 分地 区流行 ［ ］ 其 主要 症 状 表 现 为 腹 泻 ， １， 患病 鸡 １ 材 料与 方法 最终 因 脱 水 而 死 亡 。病 理 变 化 主要 为 肾 脏 极 度 肿 １ １ 材料 ．
变 率 导 致 了 新 基 因 型 和 变 异 株 不 断 出 现 ］ Ｉ Ｖ 。 Ｂ
郊个 体 专 业 养 鸡 场 发 病 鸡 的 肾组 织 病 料 中 分 离 获
得［， ４ 由新疆 畜 牧 科 学 院兽 医研 究 所 禽 病研 究 室 分 ］ 离 和保 存 。
１ １ ２ 菌 种 和 载 体 Ｅ ｃｌ 感 受 态 细胞 ＤＨ５ ．． ．ｏｉ ａ由
维普资讯
动物 医学进展 ，０ ８ ２ （ ） １７ ２ ０ ， ９ ７ ：－
Ｐｒ ｒ ｓ ｎ Ｖｅ ｅ ｉ ｒ ｅ ｃｎｅ ｏｇ ｅ ｓ ｉ ｔ ｒｎａ ｙ Ｍ ｄｉｉ
鸡 传 染 性 支 气 管 炎 病 毒 ＫＩ ＶＸ Ｂ Ｊ株 Ｓ １基 因 的 克 隆 及 序 列分 析
鸡传支气管炎病毒分离及S1基因特性研究
种 急 性 、高 度 接 触 性 传 染 病 。 该 病 一 年 四季 均 可发 生 ，可
感染所有 １ ３龄鸡 只 ，多 发 于 寒 冷 潮 湿 冬 春 季 节 ，雏 鸡 最 为 易
重 。给 控 制 、预 防 本 病 带 来 严 峻 考 验 。本 研 究 应 用 常 规 实 验
按 照 Ｒ Ａ提 取 试 剂 盒 说 明 书 提 取 Ｉ Ｖ Ｒ Ａ。 在 ２ ． Ｎ Ｂ Ｎ ４４ Ｌ
室方法分离广东地 区疑似 Ｉ Ｂ病 原 ．对 Ｓ 基 因 进 行 克 隆 与 特 １
性 鉴 定 ，从 分 子 水 平 解 释 免 疫 鸡 群 发 病 原 因 ，进 一 步 探 讨
（Ｂ ：５’一 ＡＧＧＣ Ｔ ＡＧＧＴ Ｔ ＧＩ Ｃ ３’ ＢＶ２ Ｉ Ｖ１ Ｃ ＣＧ ＣＡ Ｃ Ｔ ｒ 一 ：Ｉ ：５’一
Ａ Ｃ ＧＣ Ｃ Ｇ Ｔ Ｔ Ｃ Ｃ １ｒ ３ ） Ｃ Ｇ Ａ Ａ Ｃ Ａ Ｃ Ｔ Ｃ Ｔ一 ’ ，跨 度 １ ０ ｂ 。 引物 由 上 ６ ０ｐ
海英 骏公 司合 成 ，引物 使用 终浓 度 为 ２ｎ ｏｅ ｍ ，－ ０ ０ ｍ ｌｓ Ｌ ２ ℃保 存 。 ／
管 、支 气 管 、肺 、肾 等 组 织 样 品 ，样 品 １ 、 ３为 区 域 一 不 、２ 同鸡群样 品，样品 ４ 、５为 区 域 二 不 同 鸡 群 样 品 ，样 品 ６为 区域 三 不 同鸡 群 样 品 。
１１２ 材 料 ．．
培 养 １ ４ ．进 行 蓝 ／ ８２ｈ Ａ斑 筛 选 。 挑 取 生 长 良好 白 色 菌 落 接 种于 Ｌ Ｂ培 养 基 中 （ Ａ ５ ｍ ／） 含 ＭＰ Ｏ ｇ ，扩 增 培 养 。按 碱 裂解 法 Ｌ 提 取 质粒 ，以备 进 行 酶切 鉴 定 和 Ｐ Ｒ鉴 定 。 Ｃ
鸡传染性支气管炎病毒0801株的分离鉴定及S1基因序列分析
鸡传染性支气管炎病毒0801株的分离鉴定及S1基因序列分析刘巍;孔义波;张兴晓;柴同杰【摘要】2008年1月,河北沧州某产蛋鸡场鸡群出现呼吸道症状,少数鸡只出现死亡,剖检发现鸡只肾脏肿大,呈“花斑肾”样,收集患病鸡只肾脏、气管等组织,进行病毒分离培养.经新城疫病毒干扰试验、血凝试验、动物回归试验、鸡胚交叉中和试验及分子生物学鉴定,证实分离到一株鸡传染性支气管炎病毒,并命名为0801；鸡胚交叉中和试验结果表明,0801株与疫苗Ma5株中和指数最高,为同一血清亚型；对其S1基因进行克隆、序列测定与分析,表明0801株的S1基因全长1 620 bp,核苷酸序列与Massachusetts型疫苗株相似性在75％左右,氨基酸牙似性亦在75％左右.【期刊名称】《动物医学进展》【年(卷),期】2011(032)008【总页数】6页(P1-6)【关键词】传染性支气管炎病毒;交叉中和试验;S1基因;序列分析【作者】刘巍;孔义波;张兴晓;柴同杰【作者单位】山东农业大学动物医学院,山东泰安271018;山东省动物用生物制剂工程技术中心,山东烟台264003;山东省动物用生物制剂工程技术中心,山东烟台264003;山东农业大学动物医学院,山东泰安271018【正文语种】中文【中图分类】S852.659.6;Q789鸡传染性支气管炎(Infectious bronchitis,IB)是由冠状病毒科(Coronaviridae)冠状病毒属(Coronavirus)传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus,IBV)引起的一种急性高度接触性传染病。
该病毒主要侵害鸡的呼吸系统、消化系统和泌尿生殖系统,可以引起雏鸡死亡,蛋鸡产蛋量及蛋品质下降,给养禽业造成巨大的经济损失[1-3]。
IBV突出的特点是血清型众多,且新的血清型和变异株不断出现,给本病的防治带来很大困难,免疫失败现象时有发生[4]。
所以,从现地分离株中筛选疫苗株对控制IB非常重要。
2株鸡传染性支气管炎病毒的分离鉴定与S1、M和N基因序列分析
2株鸡传染性支气管炎病毒的分离鉴定与SI、M和0基因序列分析何家辉，封柯宇，李鸿鑫，宋才良，张e坤，谢青梅(华南农业大学动物科学学院，广东广州510642)摘要:为跟踪了解广东地区鸡传染性支气管炎病流行情况,2019年从广东省清远、惠州两地疑似鸡传染性支气管炎发病鸡群中采集分离到2株传染性支气管炎病毒,并对其和分析$，在鸡胚传3鸡胚的病变,死亡鸡胚全身，未亡鸡胚发育受阻，的胚、$将2个分离株分别命名为CK/CH/GD/ QY1119和CK/CH/GD/HZ1225,分别测定其半数感染量(EID5。
)，扩增其S1、M和N基因核昔酸序列，获得相应的推导氨基酸序列并对其分析$分离株CK/CH/GD/QY1119和CK/CH/GD/HZ1225的EID50分别为10「75/0.1mL和10「6c5/0.1mL，2个分离株S1基因与Mass型等疫苗株同源性为76.2%~82.%，同源性均较低。
与H120疫苗株相比，2个分离株的S1、M 和N基因存在若干氨基酸的差异，2个分离株S1基因均存在氨基酸的插入,分离株CK/CH/GD/QY1119的M基因存在氨基酸的缺失,分离株CK/CH/GD/HZ1225的M基因存在氨基酸的插入。
进化树分析显示,2个分离株分别属于LDT3型分支和QX型分支，均在S1、M n N基因进化的分属在差异$分离得到的2个分离株的S1、M n N基因在不同程，在临床防控中应引起重视。
为鸡传染性支气管炎的有效防控提供了参考依据。
关键词:鸡传染性支气管炎病毒；LDT3型；QX型；S1基因；M基因；N基因；序列分析中图分类号：S852.65文献标志码:A文章编号：0529—6005(2021)01—0010—05 Isolation,Idenhncahon and S I、M and0Gene Seqcencc Analysis ofTwo Strains of Avian Idfectiocs BroncCitis VirusHEoia-hui，FENGKe-yu，LIHong-iin，SONGCai-eiang，ZHANGYu-kun，XIEQing-mei (Co e geoeAnimaeScience，South ChinaAgeicuetueaeUnieeesity，Guangyhou510642，China) Abshact:In order to track the epidemic situation of infectious bronchitis in Guangdong,two strains of infectious bronchitis virus weeeisoeated eeom thechicken eeockssuspected tohaeeineectiousbeonchitisin Qingyuan and Huiyhou in2019，and weeeidentieied and anaeyyed.Theeesuetsshowed thatthetypicaepathoeogicaechangesoechicken embeyoappeaeed aeteetheeegeneeationsoebeind teansmission.Thewhoeebodyhemo e hageoedead chicken embeyowasobeious，and thedeeeeopmentoeundead chicken embeyowas stunted,showing obvious dwarf embryo and curling up.The two isolates were named as CK/CH/GD/QY1119and CK/CH/GD/ HZ1225，eespectieeey.TheieEID50wasdeteemined，and theie S1，M and N genenuceeotidesequencesweeeampeieied.Thededuced aminoacid sequencesoe S1，M and N genesweeeobtained and anaeyyed.TheEID50oeCKCCHCGDCQY1119and CKCCHCGDC HZ1225were10_7'5/0.1mL and10_6'75/0.1mL,respectivela.The homology of S1gene of the two isolates with the veccine strain oema&typewa&76.2%-82.1%，and thehomoeogywa&paeed with H120eaccine&teain，theeeweee&omeaminoacid di e e-ence&in S1,M and N gene&oethetwoioeate&.Theeewa&aminoacid in&eetion in S1geneoethetwoioeate&, aminoacid deeetion in M geneoeCKCCHCGDCQY1119,and aminoacid in&eetion in M geneoeCKCCHCGDCHZ1225.Thephyeogeneticteee&howed thatthe twoioeate&beeonged toLDT3typeand QXtypeee&pectieeey,and theeeweeedi e eence&in thegeneeaoe S1,M and N gene&.Theee-&uetaeo&howed thatthe S1,M and N gene&oethetwoioeate&had eaeyingdegeee&oeeaeiation,which need tobepaid moeea t ention in ceinicaepeeeention and conteoe.Thi&tudypeoeide&aeeeeeenceeoethee e ctieepeeeention and conteoeoeineectiou&beonchiti.Key word:aeian ineectiou&beonchitieieu&；LDT3；QX；S1gene；M gene；N gene；&equenceanaey&iCorre pondnng astior:XIEQing-mei,E-maie:qmi@&收稿日期：2020—04—01基金项目：广东省重点领域研发计划项目(2019B020218004)作者简介:何家辉(1996-)，男，硕士生,研究方向为禽病学, E-ma e：hih1239417073@通信作者:谢青梅,E-maii：qmx@鸡传染性支气管炎(Infectious bronchitis,II)是由传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus, IBV)引起的一种急性、触性传染病$IBV主过空气传播,也可以通过饲触式间接传播，主要侵害呼吸道、生殖道以及消化道，为打喷嚏、流鼻液、气管啰音和出血、肾脏肿大和尿酸盐沉积、腺胃病变等症状，致使鸡群生产性能下降,产蛋量下降，蛋品质降低，给养禽业带来严重的危害和较大的损失。
2011-2012年鸡传染性支气管炎病毒的分离鉴定及S1基因序列分析的开题报告
2011-2012年鸡传染性支气管炎病毒的分离鉴定及S1基因序列分析的开题报告【题目】2011-2012年鸡传染性支气管炎病毒的分离鉴定及S1基因序列分析【研究背景】传染性支气管炎是一种由传染性支气管炎病毒引起的家禽呼吸道疾病，能够导致家禽呼吸道炎症和肺部病变。
该疾病对家禽养殖业造成了重大威胁，尤其是在冬季和春季高发期间，其致死率和感染率较高，给养殖业造成了较大的经济损失。
为了更好地控制和管理传染性支气管炎，对2011-2012年鸡传染性支气管炎病毒进行分离鉴定和S1基因序列分析是非常必要的。
【研究目的】本研究旨在对2011-2012年鸡传染性支气管炎病毒进行分离鉴定，并通过S1基因序列分析，探究病毒的分布情况、遗传特征等方面的内容，为传染性支气管炎的防治和管理提供基础资料。
【研究内容】本研究将采用细胞培养和RT-PCR技术对2011-2012年鸡传染性支气管炎病毒进行分离鉴定，同时对其S1基因进行PCR扩增、克隆测序和分析，了解病毒的遗传特征、分布情况等方面的内容。
【研究方法】采用点滴法进行鸡传染性支气管炎病毒的分离培养，并通过RT-PCR技术对病毒进行鉴定。
使用PCR扩增技术对病毒S1基因进行扩增，克隆到载体上，然后进行测序。
通过序列比对和系统进化分析，探究鸡传染性支气管炎病毒的分布情况、遗传特征等方面的内容。
【预期结果】本研究将对2011-2012年鸡传染性支气管炎病毒进行分离鉴定和S1基因序列分析，明确病毒的分布情况和遗传特征，为传染性支气管炎的防治和管理提供基础数据和理论支持。
【研究意义】随着我国畜禽养殖技术的进步和养殖规模的扩大，传染性支气管炎对家禽养殖业的危害越来越大。
本研究将为传染性支气管炎的防治和管理提供基础资料和理论支持，探究病毒的分布、遗传特征等方面的内容，为科学防控这一疾病提供借鉴。
鸡传染性支气管炎病毒的分离与鉴定
目录中文摘要 (2)Abstract (3)引言 (4)1 材料与方法 (5)1.1 材料 (5)1.1.1 病料 (5)1.1.2鸡胚、鸡红细胞 (5)1.1.3 主要试剂 (6)1.1.4 主要仪器设备 (6)1.1.5 引物 (6)1.2 方法 (7)1.2.1 病料的采集和处理 (7)1.2.2 病毒的增殖与纯化 (7)1.2.3 病毒的RT-PCR检测 (7)1.2.4 鸡胚尿囊液的血凝活性测定 (8)1.2.5 鸡胚尿囊液的RT-PCR检测 (8)）的测定 (8)1.2.6 毒株半数感染量（EID502 结果与分析 (10)2.1 病鸡剖检结果分析 (10)2.2 病毒RT-PCR检测结果分析 (10)2.3 传毒结果 (11)2.4 传代鸡胚尿囊液的血凝检测结果分析 (11)2.5 传代鸡胚尿囊液的RT-PCR检测结果 (11)检测结果分析 (11)2.6 EID502.6.1 鸡胚胚病变情况 (11)的计算结果 (12)2.6.2 EID503 讨论 (12)致谢 (14)参考文献 (15)鸡传染性支气管炎病毒的分离与鉴定动物医学专业指导老师摘要：2011年4月17日，山东省临沂某大型养鸡厂送检一批疑似感染传染性支气管炎病毒的病（死）鸡，调查得知该鸡群临床上表现咳嗽、甩鼻，食欲不振，精神不佳，脱水，排白色稀粪，爪干、消瘦等症状且死亡率高，现进行病鸡剖检，病变表现为气管出血，“花斑肾”。
采集相关病料研磨并反复冻融后，进行RT-PCR检测结果发现IBV阳性，初步诊断该鸡群发生了鸡传染性支气管炎。
将病料接种10日龄SPF鸡胚进行盲传，收集各代尿囊液进行血凝试验、RT-PCR检测，同时观察对鸡胚的致病变特征，结果发现血凝试验均呈阴性，RT-PCR结果IBV表现阳性，新城疫（NDV）、禽流感（AIV）等其他外源病毒阴性，鸡胚表现蜷缩、生长阻滞现象，符合IBV的生物学特征，表示成功分离到了1株鸡传染性支气管炎病毒。
鸡传染性支气管炎病毒SY毒株生物学特性及其S1基因分子遗传变异分析
验室 指南 ［ ．第 ２版．金冬雁 ． Ｍ］ 黎盂枫 ， 云德 ， 侯 等．北 京： 科学出版社 ．９ ６ ３—６ ４ ８４ ７ １ ９ ，４ ．３ —４ ． ６
［ ２ Ｃ ｒ ｔｉ １］ ｈｉ ｅＫ，Ｇ ａａ ｓｔ ｒｈ ｍ Ｄ，Ｙ ｌ ｎ Ｒ．ｅ ．Ｐ ｉｔｍｕａ ｏｋ ｅ ｔ ｏｎ ｔ一
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ｔ ｔ ｈ ｎｅｏ ａｈ ｇｎｃｔ ｆ Ｅ ［ ］ ｏ ｒａ ｏ ｙｗｉ ｔｅｅｔｒｐ ｔｏ ｅｉｉ ｏ ｈ ｙ ＴＧ Ｖ Ｊ．Ｊ ｕｎｌ ｆ
鸡 传 染 性 支 气 管 炎 病 毒 （Ｂ 为 典 型 的 冠状 病 毒 ． 因 组 １Ｖ） 基
为单股正链 Ｒ Ａ 。固其变异频 繁 ． Ｎ 尤其 是免疫 原 ｓ 基 因的 ｌ
变 异 － ， 出 现 新 的 血 清 型 ， 各 血 清 型 毒 株 问交 叉 免 疫 性 较 常 且
析其 ｓ 基 因的桉苷酸序列及推导氨基酸序列的遗 传与变异 性。 ｌ
中 图分 类 号 ： ５． ５ Ｓ８ ２ ６ 文 献标 识 码 ：Ａ 文 章 编 号 ：１０－４ ９２ ０ ） ４００ —３ ００６ １ （０ ２ ０－０ ７０ 弱 或 几乎 无交 叉保 护性 ， 常导 致 免疫 鸡 群 暴 发 『 。本 研 究 旨在 Ｈ 对 分 离 自沈 阳 地 区 的 Ｉ Ｖ Ｓ 毒 株 进 行 生 物 学 特 性 研 究 ， 分 Ｂ Ｙ 并
Ｖｉ ｌ ｇ ， ９ ７ ７ （ ） ３ ８ － ２ ７ ｒ ０ Ｙ １ ９ ， １ ４ ： ２ ５３ ８ ． ｏ
鸡传染性支气管炎病毒中国地方分离株膜蛋白基因的克隆及序列分析
摘 要 ： 研 究 选 取 有 代 表 意 义 的 ９株 鸡 传 染 性 支 气 管 炎病 毒 （ Ｖ） 内分 离 株 ． 用 昕 设 计 的 一 对 特 异 引 物 ， 过 Ｒ 本 Ｉ Ｂ 国 利 通 Ｔ—
Ｐ Ｒ 的 方 法 成 功 地 扩 增 了膜 蛋 白基 因 即 Ｍ 基 因 全 长 片段 ．通 过 克隆 、 列 测 定 获 得 了 ９个分 离 毒 株 Ｍ 基 因 的 全 长 核 苷 酸 序 Ｃ 序 列 。 将 各 ＩＶ 国 内分 离株 与Ｇ ｎ ａ ｋ巾注 册 的 一 毒 株 的 Ｍ 基 因核 苷 酸序 列 及 推 导 的 氨 基 酸 序 列进 行 比较 、 并 Ｂ ｅＢ ｎ 些 系统 进 化关 系 分 析 发 现 ： Ｖ 中 国 地 方 分 离 毒 株 大 部 分 属 于 Ｍａｓ型 ： 同 毒 株 间 存 着 重 组 、 失 、 入 及 点 突 变 等 变 异 ， ＡＴ 至第 １ ｏｂ Ｉ Ｂ ｓ 不 缺 插 从 Ｇ ｊ ｐ 区 段 的核 苷 酸 序 列 变异 频率 最 高 ； Ｖ 中 国 地 方 分 离 株 Ｍ 基 因的 变 异 属 于 高 频 率 的 同 义 突 变 ； 内的 Ｉ Ｖ 分 离 株 分 为 两 个 基 Ｉ Ｂ 国 Ｂ 因 群 ，ｌ 分 离 毒 株 与Ｇｅ Ｂ ｎ 群 ｎ ａ ｋ中Ｍａｓ型 的 毒 株 亲 缘 关 系较 近 ． 株 间 核 苷 酸 序 列 同 源性 为９ ． ～ １０ ， 相 应 的 氨 基 酸 ｓ 毒 ｊ７ ｆ 其 ） 序 列 同源 性 为９ ． ～１） ； 群 分 离 毒 株 与 众 多 参 考 毒 株 的 亲 缘关 系 都 比较 远 ， 株 间彼 此 核苷 酸序 列 同 源性 为８ ． ～ ８２ ｆ Ⅱ （ ］ 毒 ９７
ＲＥＮ ｏ 一。ＩＩ Ｔａ ．ＡＯ ｉ ｇ 。．ＣＡＯ ｅ — ｈｅ ｇ 一．ＸＩ Ｃｈａ — ｎ ・ Ｍ ｎ 。 Ｗ ｉｓ ｎ Ｎ ｏ ａ 。
鸡传染性支气管炎病毒分离株与疫苗株抗原相关性和S1基因序列分析
ＹＡ ｈ ｏ—ｈ ａ，．Ｌ ｉｎ—ｌ ｎ ＮＧ Ｓ ａ ｕ ｒ ＩＪ ａ ｉ ｇ 。ＨＵ Ｂ ｉ ｉ ａ ｅ —ｘａ ， 。
（ ． ｏｌ ｅｏ ｉ ａ Ｓ ｉ ｃ ，Ｓ ａｄｎ ｃｌ ｒ Ｕ ｉｅｓｙ ｈｎ ｏｇＰｏｉｃ ，Ｔｉｎ２ １ １ ， ｈｎ ； １Ｃ ｌ ｇ ｆ ｍ ｌ ｃｅ ｅ ｈｎ ｏｇＡ ｕｔ ｅ ｎ ｒｉ ，Ｓ ａｄｎ ｒ ｎ ｅ ａａ ７ ０ ８ Ｃ ｉａ ｅ Ａｎ ｎ ｕ ｖ ｔ ｖ ２ Ｉｓｔｔ ｏ ｎｍａ Ｓｉｎｅａ ｄＶ ｔ ｉａｙＭｅ ｉｎ ｈｎ ｏｇＡ ａｅ ｆＡ ｃｌ ｒｌ ｃｅｃｓＪ ａ ５ １０ Ｃ ｉａ ．ｎｔｕｅ ｆＡ ｉ ｌ ｃ ｃ ｎ ｅ ｒ ｒ ｄｃ ｅＳ ａｄｎ ｃｄｍｙｏ ｕｔ ａ Ｓ ｉ ｅ ，ｉ ｎ２ ０ ０ ， ｈｎ ） ｉ ｅ ｅｎ ｉ ｕ ｎ ｎ
个分离株 与 Ｈ ２ １０和 ４ １ ９ 不属 于同一个 血清型。结合 ｓ １基 因序 列分析发 现 ，１基 因序列 分析 与血清 中和结 果 Ｓ
二者 不具有 明显的相关性 Fra bibliotek ８个分离株分属三个基 因群 ， 中 Ｓ Ｔ ０ １ １ Ｈ ２ 其 Ｄ Ａ ６ １ 与 １０等 同属 一个基 因群 ， 血清中 但
鸡 传 染 性 支 气 管炎 病 毒 分 离株 与 疫 苗 株 抗原相关性 和 Ｓ １基 因序 列 分 析
任 海松 张秀美 ， ， 崔言顺 许传 田 ， 少华 ， ， 杨 李建亮 胡北侠 ， ＇ 。
（ ．山东农业大学动物科技学 院， １ 山东 泰安 ２１１；． ７０８２ 山东农科院畜牧兽 医研究所 ；
３ 山东省 畜禽疫病防治与繁育重点实验室， ． 山东 济南 ２０ ０ ） ５ １０
摘要 ： 本实验挑选 ８株近年来 山东省 Ｉ Ｖ分离株与疫苗株 Ｈ ２ Ｂ １０和 ４ １ 利用 Ｓ Ｆ鸡分 别制备 了高免 阳性血清 ， ９， Ｐ 进行鸡胚交叉 中和试验 ， 计算其抗 原相 关系数 ， 鉴定其血清型 ， 并结合 ｓ 基 因序列分析 ， 究其 血清 型和基因型 １ 研 之 间的关 系。结果显示 ：Ｄ ０ ０ 、Ｄ Ｙ ６ ２ Ｓ Ｌ ００ Ｓ ＷＦ ６ ８ Ｓ Ｌ ０ １ 、Ｄ Ｙ ７ １与疫 苗株 Ｈ１０同属 Ｍ ｓ 血清 型的不 同亚型 ， ２ ａｓ 其它 ５
鸡传染性支气管炎病毒沈阳分离株组织嗜性的研究
１ Ｖ 感 染 后 的 Ｓ Ｆ 鸡 不 同 脏 器 和 病 理 变 化 及 抗 原 Ｂ Ｐ 定位 进 行 了研 究 。 １ 材 料 与 方 法 １ １ 毒 株 沈 阳分 离 株 （ Ｙ） 本 课 题 组 保 存 ， 经 ． Ｓ 由 并 过 理 化 特 性 等 鉴 定 ， 清 型 与 澳 大利 亚 Ｔ 株 相 同 。 血
肿 。 大 量 的 淋 巴 细 胞 和 巨 噬 细 胞 浸 润 。 集 在 血 管 有 聚
１ ３ 标 准 阳 性 血 清 抗 澳 大 利 亚 Ｔ 株 的 阳 性 血 清 ． 由本课 题 组 保存 。 １ ４ 荧 光 素 标 记 的 兔 抗 鸡 ＩＧ Ｓｇ ． ｇ ｉｍａ公 司 生 产 、 工 作 浓 度 为 １： ０ ８。 １ ５ 试 剂 及 仪 器 福 尔 马 林 ， ． １ ｐ ． Ｂ ． ０ ０ Ｍ Ｈ０ ２Ｐ Ｓ 缓 冲液 ， 酮 ， 冻切 片 机 ， 光显 微镜 等 。 丙 冰 荧 １ ６ 病 毒 接 种 及 病 料 的 采 集 将 雏 鸡 按 １ ｓ Ｉ ． ０Ｅ Ｄ 。 接 种 Ｉ Ｖ Ｓ 株 ， 接 种 后 第 ７天 、 １ Ｂ Ｙ 在 第 ０天 、 １ 第 ４ 天、 ２ 第 １天 和 第 ２ ８天 ， 组 各 捕 杀 ４只 鸡 ， 别 采 每 分 取气 管 、 脏 、 脏 、 脏 和 脾 脏 等 脏 器 ， 成 两 份 ， 肾 肺 肝 分
胞 浸 润 ， 管 区结 缔 组 织 增 生 ， 巴细 胞 灶 状 增 生 ； 汇 淋 肺 脏 有 的 发 生 瘀 血 ， 泡 隔 上 皮 细 胞 活 化 增 生 ． 皮 肺 上 细 胞 坏 死 ， 级 支 气 管 黏 膜 增 生 ． 膜 下 有 少 量 的 淋 二 黏 巴细 胞 浸 润 ； 管纤 毛层 脱 落 ， 膜 上 皮 增 生 坏 死 ． 气 黏
传染性支气管炎病毒的分离及其S1基因高变区Ⅰ的遗传变异性分析
密码 后第 １ ９ ４ ｎ 处 存在 一 个高 变 区（ ５ ～４ ４ ｔ ＨＶＲ） 其 ， 中 的一 个 相 对 保 守 区又 将 Ｈ ＶＲ分 隔为 ＨＶＲ Ｉ和
ＨＶＲ Ⅱ 】 那些 遗 传起 源接 近血 清型 不 同的毒 株 Ｒ 。
Ｉ的序 列分 析 或 ＲＦ Ｉ Ｐ分析 就 可 以对 大 多数 不 同 的 Ｉ Ｖ 毒 株进行 基 因分 型 。 Ｂ 广 西 南 宁 市 某公 司送 检 的两 群 发病 鸡 （ ７日龄
研究。 ｌ 材 料 与 方 法
扩增 产物 与 ２ｖ ×Ｌ ａ ｉｇＤｙ ｏｕｉｎ混 合 ， ｌ ６ ｏ ｄｎ ｅＳ ｌｔ ｏ 加
入 含溴化 乙锭 的 １ 琼脂 糖凝 胶上 以 ６ ～８ 电压 ０ ０Ｖ 进行 电泳 ５ ～６ ｉ ， ０ ０ｒ ｎ 在凝 胶 成像 系统 下观 察 结 果 ａ 并拍 照记 录 。
取 ６ｖ Ｐ Ｒ ｌ Ｃ
重 的呼 吸 音 ， 检病 变 为气 管 出血 、 黏 液 ， 剖 有 临床 诊 断疑 为 Ｉ Ｖ 感 染 。两群鸡 均 曾在 １日龄 时用 商 品 Ｂ 弱毒 疫 苗 Ｍａ ５株免 疫 过 。对 疑似 病鸡 群 进行 剖 检 ， 无 菌 采 集 病 鸡 肾 、 管 、 气 管作 为病 料 进 行 了本 气 支
传染 病 之一 。 原Ｉ Ｖ 血 清 型众 多 ， 病 Ｂ 各血 清型Ｉ Ｖ 之 Ｂ 间仅 有部 分 或 完全 没有 交 叉保 护作 用 ， 异 株 又不 变 断出现 ， 因此免 疫鸡 群 也会 暴发 疾病 。
Ｉ Ｖ 三个 主要 结构 蛋 白包 括Ｓ Ｍ 、 蛋 白。 Ｂ 、 Ｎ Ｓ蛋
囊腔 接 种 ９日龄鸡 胚 ， ３ （孵育 ， 置 ７、 弃去 ２ ４ｈ内死亡
（ 西大 学 动 物 科 技 学 院 ， 西 南 宁 ５ ０ ０ ） 广 广 ３ ０ ５ 中 图 分 类 号 ： ８ ２ ６ ￥ ５．５ 文献 标 识 码 ： Ａ 文 章 编 号 ： ５ ９ ６ ０ （ ０ ６ ０ — ０ ０ ０２ —０ ５ ２ ０ ） ８０ １－２ ３
2010_2013年我国鸡传染性_省略_炎病毒分离株S1基因分子特性分析_尤永君.
中国农业大学学报 ２０１５，２０（２）：１３７－１４８Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｈｉｎａ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙｈｔｔｐ：∥ｘｕｅｂａｏ．ｃａｕ．ｅｄｕ．ｃｎＤＯＩ：１０．１１８４１／ｊ．ｉｓｓｎ．１００７－４３３３．２０１５．０２．１８２０１０—２０１３年我国鸡传染性支气管炎病毒分离株Ｓ１基因分子特性分析尤永君１ 张国中１＊ 刘月焕２ 梁武３ 王腾３ 刘兴彩３ 沈元３ 王友３（１．中国农业大学动物医学院，北京１００１９３；２．中国农业科学院北京畜牧兽医研究所，北京１００１９３；３．天津瑞普生物技术股份有限公司技术服务部，天津３００３０８）摘 要 为掌握近年来我国传染性支气管炎病毒的流行动态和变化规律，利用检测转化至克隆载体鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）Ｓ１基因序列，应用ＭＥＧＡ５分析软件进行聚类分析，并对瑞普生物疫病诊断研究服务中心２０１０—２０１３年间从我国野外分离并测定的３０株传染性支气管炎的Ｓ１基因序列与常用疫苗毒株和ＧｅｎＢａｎｋ中代表性ＩＢＶ毒株的对应基因序列进行比较，结果发现：１）３０株野外分离株可分为２个基因型：ＬＸ４型和ＴＷ型，分别占总数的９３．３％和６．７％；２）ＬＸ４型分离株Ｓ１基因和氨基酸序列与常见疫苗毒株序列差别很大，同源性仅分别为７７．６％～８６．３％和７５．８％～８５．７％；３）分析Ｓ基因裂解位点时发现同一基因型毒株的裂解位点氨基酸序列高度趋同，且型间差异性较大。
可见，近年来我国主要ＩＢＶ分离株属于ＬＸ４型，并且彼此间亲缘关系较近，与我国现用传染性支气管炎主要弱毒疫苗和国外参考株属于不同的基因型，这可能是导致疫苗免疫失败，传染性支气管炎（ＩＢ）在鸡群中爆发的主要原因。
该研究结果为筛选针对我国目前流行ＩＢＶ毒株的疫苗株提供参考。
关键词 鸡；传染性支气管炎病毒；Ｓ１基因；基因型；裂解位点；分子特征中图分类号 Ｓ ８５８．３１；Ｓ ８５５．３ 文章编号 １００７－４３３３（２０１５）０２－０１３７－１２ 文献标志码 Ａ收稿日期：２０１４－０５－２９基金项目：农业技术服务创新项目（农财发［２０１３］１４号）第一作者：尤永君，博士研究生，Ｅ－ｍａｉｌ：ｙｙｊｒｉｎｇｐｕ＠１６３．ｃｏｍ通讯作者：张国中，副研究员，主要从事禽类病毒及其分子生物学研究，Ｅ－ｍａｉｌ：Ｚｈａｎｇｇｚ＠ｃａｕ．ｅｄｕ．ｃｎＣｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ａｎｄ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｔｈｅ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ ｏｆｔｈｅ Ｓ１ ｇｅｎｅ ｏｆ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｃｈｉｃｋｅｎ ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ ｂｒｏｎｃｈｉｔｉｓｖｉｒｕｓｅｆｒｏｍ２０１０ｔｏ ２０１３ｉｎ ＣｈｉｎａＹＯＵ Ｙｏｎｇ－ｊｕｎ１，ＺＨＡＮＧ Ｇｕｏ－ｚｈｏｎｇ１＊，ＬＩＵ Ｙｕｅ－ｈｕａｎ２，ＬＩＡＮＧ Ｗｕ３，ＷＡＮＧ Ｔｅｎｇ３，ＬＩＵ Ｘｉｎｇ－ｃａｉ ３，ＳＨＥＮ Ｙｕａｎ３，ＷＡＮＧ Ｙｏｕ３（１．ＶｅｔｅｒｉｎａｒｙＳｃｈｏｏｌ，Ｃｈｉｎａ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｂｅｉｊｉｎｇ １００１９３，Ｃｈｉｎａ；２．Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ａｎｉｍａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｂｅｉｊｉｎｇ １００１９３，Ｃｈｉｎａ；３．Ｔｉａｎｊｉｎ Ｒｉｎｇｐｕ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏ．Ｌｔｄ．，Ｔｅｃｈｎｉｃ Ｓｕｐｐｏｒｔ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ，Ｔｉａｎｊｉｎ ３００３０８，Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ ｂｒｏｎｃｈｉｔｉｓ ｖｉｒｕｓ（ＩＢＶ）ｂｅｌｏｎｇｓ ｔｏ ｆａｍｉｌｙ Ｃｏｒｏｎａｖｉｒｉｄａｅ ａｎｄ ｇｅｎｕｓ Ｇａｍｍａｃｏｒｏｎａｖｉｒｕｓ，ｗｈｉｃｈ ｈａｖｅｃａｕｓｅｄ ｈｕｇｅ ｅｃｏｎｏｍｉｃ ｌｏｓｓｅｓ ｉｎ ｃｏｍｍｅｒｃｉａｌ ｃｈｉｃｋｅｎ ｆｌｏｃｋｓ ｏｆ Ｃｈｉｎａ．Ｉｎ ｏｒｄｅｒ ｔｏ ｅｘｐａｎｄ ｔｈｅ ｋｎｏｗｌｅｄｇｅ ｏｆ ｔｈｅ ｍｏｌｅｃｕｌａｒｆｅａｔｕｒｅｓ ｏｆ ｔｈｅ ＩＢＶ ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ ｉｎ Ｃｈｉｎａ ｎｏｗａｄａｙｓ，ｔｈｉｒｔｙ ｗｉｌｄ ＩＢＶ ｓｔｒａｉｎｓ ｉｎ Ｃｈｉｎａ ｗｅｒｅ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｂｅｔｗｅｅｎ ２０１０ａｎｄ ２０１３ｂｙ ｔｈｅ Ｒｉｎｇｐｕ Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ａｎｄ Ｓｅｒｖｉｃｅ Ｃｅｎｔｅｒ．Ｔｈｅ Ｓ１ ｇｅｎｅ ｏｆ ｔｈｅｓｅ ｖｉｒｕｓｅｓ ｗａｓ ｃｌｏｎｅｄ，ｓｅｑｕｅｎｃｅｄ，ａｎｄａｎａｌｙｚｅｄ ｂｙ ＤＮＡＳＴＡＲ ａｎｄ ＭＥＧＡ．Ｃｏｍｐａｒｉｎｇ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｒｅｇｕｌａｒ ｃｏｍｍｅｒｃｉａｌ ｖａｃｃｉｎｅ ｓｔｒａｉｎｓ ａｎｄ ｒｅｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｖｅ ＩＢＶｓｔｒａｉｎｓ ｐｕｂｌｉｓｈｅｄ ｉｎ Ｇｅｎｂａｎｋ，Ｉｔ ｈａｓ ｂｅｅｎ ｆｏｕｎｄ ｔｈａｔ １）ｔｈｅｓｅ ３０ｉｓｏｌａｔｅｄ ｓｔｒａｉｎｓ ｗｅｒｅ ｄｉｖｉｄｅｄ ｉｎｔｏ ２ｇｅｎｏｔｙｐｅｓ：ＬＸ４ｔｙｐｅ ａｎｄ ＴＷ ｔｙｐｅ，ｔｈｅ ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅｓ ｏｆ ｔｈｅｍ ｗｅｒｅ ９０％ａｎｄ １０％ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ；２）ｔｈｅｒｅ ｗａｓ ａ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ ｏｆｔｈｅ ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ａｎｄ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｈｅ ＬＸ４ｔｙｐｅ ｉｓｏｌａｔｅｓ ａｎｄ ｔｈｅ ｒｅｇｕｌａｒ ｖａｃｃｉｎｅ ｓｔｒａｉｎｓ，ｔｈｅｈｏｍｏｌｏｇｙ ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅｓ ｗｅｒｅ ７７．６％－８６．３％ａｎｄ ７５．８％－８５．７％ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ；３）ｔｈｅ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ａｎｄ中国农业大学学报２０１５年第２０卷 ｃｌｅａｖａｇｅ ｓｉｔｅｓ ｗｅｒｅ ｏｆ ｈｉｇｈ ｈｏｍｏｌｏｇｙ ｉｎ Ｓ ｇｅｎｅ ｏｆ ｔｈｅ ｓａｍｅ ｇｅｎｏｔｙｐｅ ｖｉｒｕｓｅｓ，ｗｈｉｌｅ ｔｈｅｙ ｗｅｒｅ ｑｕｉｔｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｂｅｔｗｅｅｎｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｇｅｎｏｔｙｐｅｓ．Ｔｈｅｒｅｆｏｒｅ，ｔｈｅ ｍａｉｎ ｃｕｒｒｅｎｔ ｅｐｉｄｅｍｉｃ ＩＢＶ ｓｔｒａｉｎｓ ｂｅｌｏｎｇ ｔｏ ＬＸ４ｔｙｐｅ ａｎｄ ｗｅｒｅ ａｌｓｏ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｆｒｏｍ ｔｈｅｗｉｄｅｌｙ ａｐｐｌｉｅｄ ｃｏｍｍｅｒｃｉａｌ ｖａｃｃｉｎｅ ｓｔｒａｉｎ ｖｉｒｕｓｅｓ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ．Ｔｈｉｓ ｍｉｇｈｔ ｂｅ ｔｈｅ ｒｅａｓｏｎ ｆｏｒ ｔｈｅ ｉｍｍｕｎｉｔｙ ｆａｉｌｕｒｅ ａｎｄ ＩＢｏｕｔｂｒｅａｋｓ ｏｆ ｃｈｉｃｋｅｎ ｆｌｏｃｋｓ．Ｔｈｉｓ ｓｔｕｄｙ ｄｉｄ ｌａｙ ａ ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ ｆｏｒ ｔｈｅ ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ａ ｂｅｔｔｅｒ ａｎｄ ｓｕｉｔａｂｌｅ ＩＢＶ ｓｔｒａｉｎ ａｓ ａｂｒａｎｄ ｎｅｗ ｖａｃｃｉｎｅ ｖｉｒｕｓ ｉｎ Ｃｈｉｎａ．Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ ｃｈｉｃｋｅｎ；ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ ｂｒｏｎｃｈｉｔｉｓ（ＩＢＶ）；Ｓ１ ｇｅｎｅ；ｇｅｎｏｔｙｐｅ；ｃｌｅａｖａｇｅ ｓｉｔｅ；ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ 传染性支气管炎（ＩＢ）是鸡的一种急性、高度传染性的呼吸道疾病，已呈世界性分布，对养鸡业的危害极大。
鸡传染性支气管炎强毒分离株遗传进化分析和免疫保护试验
鸡传染性支气管炎强毒分离株遗传进化分析和免疫保护试验胡北侠;黄庆华;杨少华;许传田;张伟;张琳;王莉莉;黄艳艳;张秀美【摘要】从山东省发病鸡群中分离鉴定了一株鸡传染性支气管炎病毒（Infectious bronchitis virus, IBV）强毒株SDIB821/2012，对其进行S1基因序列测定分析和免疫保护试验。
S1基因遗传进化分析结果显示，SDIB821/2012属于以QXIBV 为代表的基因型，与同属一个基因型的IBV参考株氨基酸同源性为91.6%~98.5%，与疫苗株491同源性为77.6%，与H120和MA5同源性均为74.8%。
免疫保护试验结果显示，根据试验鸡临床症状和发病死亡情况，弱毒活疫苗491对SDIB821/2012的保护率为90%，而H120和MA5对SDIB821/2012的保护率分别仅为40%和33%。
攻毒后各免疫组喉头、泄殖腔棉拭样品以及气管、肺脏和肾脏组织均可检测到病毒，表明3种IB疫苗均不能对SDIB821/2012提供完全的免疫保护。
%A virulent avian Infectious bronchitis virus (IBV) was isolated in 2012 from diseased chickens in Shandong Province and designated as IBV strain SDIB821/2012. The S1 gene of SDIB821/2012 was sequenced and compared with published IBV strains in GenBank. Phylogenetic analysis on the S1 gene sequence revealed that SDIB821/2012 together with twelve Shandong IBV isolates belonged to QX genotype. The IBV strainSDIB821/2012 shared amino acid identity at 91.6%-98.5%, 77.6%and74.8%with other strains of QX type, vaccine strain 491, and vaccine strainsH120 and MA5, respectively. A vaccination-challenge experiment was performed to evaluate if the currently used live vaccines could provide satisfactory protection against challenge of SDIB821/2012. The results showed that 90% of chickens immunized with vaccine strain 491 wereprotected against subsequent challenge with SDIB821/2012 based on clinical signs and deaths while only 40%and 33%of chickens vaccinated with H120 and MA5 were protected. The avian Infectious bronchitis virus was recovered from laryngeal and cloacal swabs, trachea, lung and kidney tissues of vaccinated-challenged birds. These results suggested that the current 3 live vaccines could not provide complete protection against challenge of the recently isolated IBV strain SDIB821/2012.【期刊名称】《中国动物传染病学报》【年(卷),期】2014(000)003【总页数】6页(P8-13)【关键词】传染性支气管炎病毒;基因型;活疫苗;免疫保护试验【作者】胡北侠;黄庆华;杨少华;许传田;张伟;张琳;王莉莉;黄艳艳;张秀美【作者单位】山东省农业科学院畜牧兽医研究所山东省畜禽疫病防治与繁育重点实验室，济南250100;山东省农业科学院畜牧兽医研究所山东省畜禽疫病防治与繁育重点实验室，济南250100;山东省农业科学院畜牧兽医研究所山东省畜禽疫病防治与繁育重点实验室，济南250100;山东省农业科学院畜牧兽医研究所山东省畜禽疫病防治与繁育重点实验室，济南250100;山东省农业科学院畜牧兽医研究所山东省畜禽疫病防治与繁育重点实验室，济南250100;山东省农业科学院畜牧兽医研究所山东省畜禽疫病防治与繁育重点实验室，济南250100;山东省微山畜牧局，微山277600;山东省农业科学院畜牧兽医研究所山东省畜禽疫病防治与繁育重点实验室，济南250100;山东省农业科学院畜牧兽医研究所山东省畜禽疫病防治与繁育重点实验室，济南250100【正文语种】中文【中图分类】S852.659.1鸡传染性支气管炎（infectious bronchitious，IB）是由鸡传染性支气管炎病毒（Infectious bronchitious virus，IBV）引起的一种急性、高度接触性传染性疾病。
鸡传染性支气管炎病毒SC株N基因序列测定与同源性分析
鸡传染性支气管炎病毒SC株N基因序列测定与同源性分析李广兴;马德星【期刊名称】《吉林畜牧兽医》【年(卷),期】2004(000)007【摘要】从我国四川省一疑似鸡传染性支气管炎(Avian infectious bronchitisvirus,IB)的雏鸡病料中成功分离到一株鸡传染性支气管炎病毒(Infectious Bronchitis Virus,IBV),命名为SC.病毒经鸡胚传代、血凝试验监测和负染电镜检查证实为IBV.自接毒鸡胚尿囊液中提取RNA后应用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增得到了IBVSC株mRNA6cDNA(编码N蛋白).应用DNAstar5.06,C1ustal1.8分析软件将克隆测序的N蛋白基因与Genbank中11株国内外参考毒株进行序列比较分析和同源性分析,发现IBV SC株变异独特,明显不同于国内外参考毒株.【总页数】4页(P19-21,34)【作者】李广兴;马德星【作者单位】东北农业大学动物医学院,黑龙江,哈尔滨,150030;东北农业大学动物医学院,黑龙江,哈尔滨,150030【正文语种】中文【中图分类】S851.34+7.2【相关文献】1.鸡传染性支气管炎病毒沈阳分离株S1基因序列测定及同源性分析 [J], 刘明春;江国托;康丽娟;刘思国;赵玉军2.肾型鸡传染性支气管炎病毒X株S1基因序列的测定及同源性分析 [J], 赵宝华;李尚波;王文成;尹广东;卫广森;许崇波3.鸡传染性支气管炎病毒华南分离株核蛋白基因的序列测定及同源性分析 [J], 刘思国;江国托;康丽娟;刘忠贵;卢景良;刘明春4.3株致病性鸡大肠杆菌P型菌毛结构基因的克隆、序列测定及同源性分析 [J], 苗玉和;王文成;张贵刚5.3株新城疫山东分离株HN基因全序列测定和分析 [J], 刘栋;莫贞峰;赫静;王娟;朱剑英;牛钟相因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
鸡传染性支气管炎病毒SC株S1基因的序列分析
鸡传染性支气管炎病毒SC株S1基因的序列分析
刘洪义;刘兴友
【期刊名称】《中国兽医科技》
【年(卷),期】2003(33)12
【摘要】用RT PCR扩增了鸡传染性支气管炎病毒 (IBV)SC株S1基因 ,连接到pMD 18 T载体上 ,克隆后进行了核酸序列分析 ,证实SC株S1基因与基因库中收录的国外毒株H12 0和M 4 1的同源性较低 ,分别为 81.1%和 80 .0 % ,而与国内JX990 1株的同源性达到 91.3% ,初步证实国内存在IBV新毒株。
【总页数】4页(P47-50)
【关键词】鸡;传染性支气管炎;病毒;SC株;S1基因;序列分析
【作者】刘洪义;刘兴友
【作者单位】西南科技大学;郑州牧业工程高等专科学校
【正文语种】中文
【中图分类】S858.31
【相关文献】
1.鸡传染性支气管炎病毒分离株与疫苗株抗原相关性和S1基因序列分析 [J], 任海松;张秀美;崔言顺;许传田;杨少华;李建亮;胡北侠
2.30株鸡传染性支气管炎病毒标准株与分离株S1基因的克隆及序列分析 [J], 谢志勤;谢芝勋;吕华刚
3.2株鸡传染性支气管炎病毒的分离鉴定与S1、M和N基因序列分析 [J], 何家
辉;封柯宇;李鸿鑫;宋才良;张钰坤;谢青梅
4.2株鸡传染性支气管炎病毒的分离鉴定与S1、M和N基因序列分析 [J], 何家辉;封柯宇;李鸿鑫;宋才良;张钰坤;谢青梅
5.七株鸡传染性支气管炎病毒S1和N基因序列分析 [J], 周洁;邝瑞欢;黄允真;董嘉文;汪招雄;孙敏华
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鸡传 染性 支气 管炎病 毒 （Ｂ ） ＩＶ 因其 变异频 繁 ， 各
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１ 材料 和方法
性， 常导致免疫 鸡 群暴 发传染性 支气管 炎 ， 给养禽业
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第 ２ 卷 第 ｌ ４ 期
２ＯＯ ２年 １ 月
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ｖ ．４ ｄ ２ ， Ｎｏ １ ．
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１１２ 菌 种 和载 体 质 粒 ： ．ｏｉＤｋ 和 克 隆质 粒 ．． ｃｌ ｌ 载体 ｐ Ｃ９由 中国农 业 科学 院 哈 尔 滨 兽 医研 究 所 Ｕ１ 兽医生 物技术 国家 重点实验 室提 供 。 １２ 主要 酶及试 剂 ． Ａ Ｖ反 转录 酶 、 Ｄ Ａ聚合 Ｍ Ｔ Ｎ 酶 、４ Ｎ 连接 酶 及 限 制 性 核 酸 内切 酶 Ｂｍ ＴＤ Ａ ａ Ｈ Ｉ、 Ｅｏ ｃＲＩ、 ｍ ｉ Ｄ Ａ快 速 回收试 剂 盒 等 均为美 国 １ ｓ ￣ ｎ和 Ｎ
中图分类号 ：￥５ ．６ ｏ ８ ８２ ６ ； ７
文献标识码 ： Ａ
文章 编号 ： ０８０ ８（０２ ０－０ １ ３ １０－５９ ２０ ） １ ０－ ０ ０
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摘要 ： 通过反转 录－ 聚合酶链反应 （ Ｆ ｌ 扩增 出鸡传染性支气管炎病毒沈阳分离株 （Ｙ株 ） Ｉ Ｃｔ ￣－ ） ｓ 的免疫原 ｓ 基 因 ｅ Ｎ 将 ｌ Ｄ Ａ， 该 片段连接到克隆质粒载体 ｐ Ｃ ９的 Ｅｏ Ｕ１ ｃＲＩ／ ａ ＨＩ酶切位点中， Ｂｍ 测定 插＾ 片段核背酸 序列 ， 并推导 出其氨基酸序列 。序列
ａｄ ｄｄ ｃｄ 衄 ｉ ａ ｓｓｑ ｅ ｏ ｅｅｌｄｔａ ｔｅ ｉ 【 ｎ ｅｕ ｅ 呻 ｄｄ ｅ ｕ ｎ ￣ｒｖ￣ｅ ｈ ｔ ｈ Ｂ ｅ盯 ｈｃ ｅｓｔａ ０ ｓ Ｉ ｔ ｉＩ ｈ 山 ａ ｓ ｈ ｎ ８ ％ ｉ ￣ ｙ ｗｔ ｔｅ咖 Ｉ ｅｅｍ ￣ ｕｗｎ － ｅ 、 Ｉ ｌｌ ｍｉ Ｉ ｄ ｒｆｒ ａ ｓＢ ￣ 、
１ １１ ＩＶ毒 株 ：Ｓ ．． Ｂ Ｙ毒 株 分离 自辽 宁 省 沈 阳 地 区
某鸡场 。
研究 ， 其 是 ＩＶ免疫 原 ｓ 尤 Ｂ ｌ基 因遗 传 与 变 异 的研
究． 一直 是广 大 学者 致 力 的 热 点 ， 已取 得 一 定 进 并 展 ＿“Ｊ ｌ 。本 研究通 过 Ｒ －Ｇ ＴＰ Ｒ技 术成 功 地扩 增 了鸡
分析表明 ．Ｙ毒株 ｓ 基因桉苷酸序刊及所推导 的氨 基酸序列与 参考毒 株 Ｂａ 、 、 Ｎ －２ Ｇａ、／ ２ ＾ ９等毒株 的同 ｓ １ ｅｕ ｕ ｝∞、 １ 、 ｒｙ６ ８ 、 Ｔ ６ 圆 源百分率都低于 ８ ％。 ０ 关键词 ：鸡传染性 支气管炎病毒 ； ｓ 基因； 测序 ］ ｄ Ｉｈ ￣ｔ Ｉ
州 ｅ ｅ Ⅱ № 蛐ｄｐ ｙ ∞ ｅｓ ａｔ Ｒ －Ｃ ） ｄｂ ｙ ａ ｐ ｄｍ ｈｌ ｅ￣（ ＴＦ Ｒ ， ｎｍ ｉ
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Ｊｎ ２０ ａ． ０２
鸡传 染 性 支气管炎 病 毒沈 阳分离 株 ｓ 基 因 ｌ 序列测定及同源性分析
刘明春 汪 国托 康 丽娟 刘思 国 赵 玉军 ， ， ， ，
（ ． 阳农业大学 畜牧兽医学院． １沈 辽宁 沈 阳 １ １１ ２ 大连三仪生物 工程研究所 ． １ ６； ． ０ 辽宁 大连 １￣Ｏ ； Ｖ ０ ３ 大莲市畜牧兽医技术服务中心． ． 辽宁 大连 １ ０３ １ １； ６ ４ 中国农业科学 院晗尔滨兽医研究所 兽 医生物技术 国家重点实验宣 ． ． 黑龙江 啥尔滨 １ Ｏ １ ． Ｏ） ｓ Ｏ