waters日常维护及操作
waters超高效液相色谱仪操作步骤
第一部分：仪器准备1. 确保waters超高效液相色谱仪处于正常工作状态，检查仪器是否连接电源，是否有故障指示灯显示。
2. 打开色谱仪软件，检查仪器参数设置是否符合实验要求，包括流速、温度、检测波长等。
3. 准备所需的色谱柱、色谱柱连接器、进样器以及其他实验所需的耗材。
第二部分：样品准备1. 准备实验所需的样品，确保样品已经滤过或者处理过以去除杂质。
2. 根据实验要求，将样品溶解在适当的溶剂中，并进行稀释或者稀释。
第三部分：超高效液相色谱仪操作步骤1. 开始操作前，先进行系统平衡。
具体操作步骤为：将色谱柱连接至色谱柱连接器上，然后连接至色谱仪，用洗脱液平衡色谱柱。
2. 设置色谱仪的操作参数，包括流速、温度、检测波长等。
3. 进行样品进样，具体操作步骤为：将进样器连接至色谱仪，将稀释好的样品注入进样器中，设置好进样量。
4. 开始进行实验，监控色谱图谱的变化，记录实验数据。
5. 实验结束后，对色谱柱和色谱仪进行清洗和维护，确保仪器干净、整洁。
第四部分：数据处理和分析1. 对实验获得的数据进行处理和分析，比对标准曲线，计算样品中所含物质的浓度或者纯度。
2. 对实验结果进行统计分析，进行数据呈现，如绘制色谱图谱、制作数据统计图表等。
3. 通过数据处理和分析，得出实验结论，对实验结果进行解释和讨论。
第五部分：实验安全及注意事项1. 在操作过程中，注意个人安全，避免发生化学品溅泼或者接触有害物质。
2. 操作过程中需严格按照实验要求和操作规程进行，如有疑问请及时向实验指导老师或专业人士请教。
3. 实验结束后，及时清理实验台面和仪器设备，妥善存放试剂和耗材。
通过以上步骤的操作，可以保证在使用waters超高效液相色谱仪进行实验时，能够得到准确、可靠的实验结果，为科研工作和学术研究提供有力支持。
第六部分：精密控制与调试1. 在进行实验操作前，要确保色谱仪的各项参数已经精确调试完毕。
这包括流速、温度、压力、检测波长等参数的精准控制。
Waters液相色谱仪的日常维护与保养
Waters液相色谱仪的日常维护与保养
1.分析检测前，至少须让检测器或D2灯源“热机”30分钟以上。
2. 所使用的流动相需先过滤，再超声5分钟，方可使用。
3. 当使用盐类流动相后，须以超纯水冲洗30分钟，再以甲醇冲洗30分钟。
4.每周日定期冲洗检测池：把色谱柱卸下，将管路A、B、C、D捆绑抽液，在流速1.0ml/min的状态下先用超纯水冲洗30分钟，然后用30%磷酸（色谱级）冲洗30分钟，再用超纯水冲洗至流出液为中性，最后用甲醇冲洗30分钟。
5. 每周日定期清洗在线过滤器：把在线过滤器卸下，先用甲醇超声30分钟，最后用超纯水超声30分钟。
6. 每月一号定期交换流动相的管路：管路A、B、C、D互换使用，以防管路堵塞。
Waters常见故障分析及日常保养知识
感谢您的观看
THANKS
详细描述
这类故障可能与样品、试剂或仪器内部组件有关。首先检查样品和试剂是否符合 仪器要求，然后检查仪器内部组件是否正常工作，如泵、阀、检测器等。如果问 题依然存在，可能需要进一步检查仪器硬件或联系技术支持进行维修。
仪器显示故障
总结词
仪器显示故障通常表现为仪器屏幕无显示、显示异常或数据显示不准确。
详细描述
详细描述
这类故障可能与硬件问题或软件故障有关。首先检查仪器各 部件是否正常连接，特别是与主机连接的端口和电缆。如果 仪器自检失败并显示错误代码，应参考Waters仪器的用户手 册或联系技术支持获取解决方案。
仪器运行故障
总结词
仪器运行故障表现为仪器在运行过程中出现异常情况，如数据不准确、流路异常 等。
清洗进样阀
根据需要清洗进样阀，特 别是使用高粘度样品后， 以防止进样阀堵塞。
仪器部件更换与维修
更换密封圈
仪器密封圈老化或损坏时，应及时更换以保证仪器密 封性。
更换过滤器
定期更换仪器内部的过滤器，以防止杂质和颗粒物进 入仪器内部。
维修与保养
如遇到仪器故障，应及时联系专业维修人员进行维修 保养，以确保仪器正常运行。
waters常见故障分析及日常 保养知识
目录
• Waters仪器常见故障分析 • Waters仪器日常保养知识 • Waters仪器故障排除方法 • Waters仪器保养建议
01
Waters仪器常见故障分析
电源故障
总结词
电源故障是Waters仪器最常见的故障之 一，可能导致仪器无法正常启动或运行 。
VS
详细描述
电源故障可能由于电源线损坏、电源插头 松动或电源供应不稳等原因引起。当仪器 无法正常启动时，首先应检查电源是否正 常连接，并确保电源插头紧固。如果仪器 在运行过程中突然断电，可能会导致数据 丢失或仪器损坏，因此建议使用UPS（不 间断电源）来保证仪器稳定运行。
waters-液质联用
1．适用范围本设备配备ACQUITY UPLC液相色谱仪、Xevo TQ-Smicro MS/MS 质谱仪，适用于食品、药品中各种有机物的定性、定量分析，是一种具有高灵敏度的检测仪器，仪器由主机、计算机和数据处理软件等组成。
2. 职责2.1 操作人员按照本规程操作仪器，认真填写实验使用记录。
2.2 保管人员负责对仪器进行定期维护和保养。
2.3 科室负责人负责监督检查规程的执行。
3．操作程序日常操作步骤：准备UPLC —→设置样品表—→运行样品—→定量—→打印报告。
注：如果一个星期内不运行样品请不要关质谱仪，使其保持真空。
建立新方法和project的操作步骤：准备UPLC —→建立新的project —→用标准品调谐—→编辑质谱方法—→编辑UPLC方法—→设置样品表—→运行样品—→定量—→打印报告。
3.1开机：3.1.1 彻底开机顺序（仪器已关闭）确定MS及其它仪器电源电缆已连接，开氮气发生器、开氩气，小表<0.1mpa。
打开计算机电源 > 等待windows正常启动 >电脑界面右下角网络图标红叉。
打开UPLC 自动进样器电源，等到电脑界面右下角网络图标出现感叹号！。
打开UPLC泵电源，等约30s或者是有响声。
打开质谱电源，等待5min，离子源透视镜里面亮。
打开Masslynx软件，masslynx主界面 -----左侧instrument----Mass tune---界面菜单栏vacuum---pump 同样界面左侧偏上diagnostics---vacuum---analyser MS1 turbo speed[%]要在5分钟内升到80。
至少抽真空4个小时 > 查看真空状态主界面mass console---界面左侧xevo tq ms detector加号展开---ms display > 碰撞室真空度 >达到 1.32E-5 mBar。
3.1.2 日常开机顺序（仪器未关闭）开氮气发生器、开氩气，小表<0.1mpa，打开Masslynx软件，进入工作站。
Waters高效液相色谱仪使用及维护
• 待系统平衡后，单击“中断” 监视基线。
，终止
单进样
• 待系统平衡好，在此页面输入进样信息，
点击
进样
序列进样
确认样品组名称正确，其他选项保持默认值，点击运行
• 跳出该窗口，点击确定，进行修改序列。
• 修改完毕点击
继续运行样品组。
•
图谱处理
•
图谱打印
图谱处理
• 选择所要处理的项目名称，点击确定
• 30%磷酸溶液，超声30分钟
一、每周一次，仪器面板操作。
• Purge Injector：面板操作: 打开状态 (Statas)画面→ →按右下角Direct Function功能键→ →选Purge Injector命令 → →选OK即可进行注射器的排气。
• Seal Wash：面板操作: 打开状态(Statas) 画面→ 按下面板上Menu/ Statas 键→按右 下角Diiag功能键→ →选Prime Seal Wash 命令→ →选Start即可，默认运行10分钟。
出现如下窗口
• （2.）编辑仪器方法 • （3.）保存方法：
• （4.）关闭“仪器方法编辑器”窗口
• 6.创建方法组：①选中所要的仪器方法，单 击“下一步” ②出现如下窗口选择处理方法、
报告方法以及导出方法，单击“下一步”
• ③命名
方法调用及平衡基线
•在
选择仪器方法，并点击
“监视器”，平衡系统监视基线
创建项目
• 在此对话框下需要确定项目根目录下还是项目层次结构的 一部分（作为父项目的一个子项目）。这种层次结构允许 将多个项目组织在一个公用项目结构中。
• 注：要将项目创建为新的顶级项目（父项目），单击“项 目”文件夹；要将项目创建为现有项目的子项目，单击现 有父项目的文件夹。
Waters_LC-MS_日常维护参考手册
TargetLynx™首先，大家请看这里。
（点击）是不是有人一看到这些光谱就感觉头疼？与UV 相比，MS分析更加灵敏。
由于其具有高灵敏度的特点，因此经常能看到许多不想看到的东西。
也就是说，除了峰值外，污染也更加明显。
另外，是不是有人正在使用这样的离子源来进行检测？MS分析不会像LC那样产生废液。
通过离子源喷雾的样本，全部会进入MS的内部。
这样势必会造成污染。
离子源受到污染后会有什么后果呢？具有代表性的结果就是导致灵敏度下降。
虽然MS是高灵敏度的分析方法，但如果管理与使用方法不当，会产生适得其反的效果。
虽说今天应该将焦点放在<熟练使用LC/MS的方法>这一课题上，但还是有必要说一下熟练使用所需的注意事项。
以下列举3点。
保持仪器环境条件处于良好状态。
减少故障。
发生故障时，能迅速妥善处理。
以上就是这3点。
其中重要的内容是（点击）日常维护。
接下来，这里所说的维护指的是什么维护内容呢？为确保仪器持续正常运作的保养、点检作业，（点击）建议客户实施日常维护。
客户也可实施日常维护。
既然建议客户实施维护作业，对于至今尚未实施过的各位，需要注意哪些要点呢？又该怎么执行呢？有哪些复杂的操作呢？这些问题将造成您心中的疑问与不安。
（点击）其实，并没有必要担心。
LC/MS是一套系统，所以看上去可能很复杂。
但如果能够区分各功能模块，并理解其功能要点，绝对不难。
接下来，（点击）将对日常维护的内容，进行相关说明。
首先，在此，先按照LC、MS、附属设备这3大类，对LC/MS系统进行分类。
然后，将HPLC细分为泵与自动进样器，将MS细分为离子源、Probe、分析器，将附属设备细分为真空泵、氮气发生仪器、数据系统。
接下来说明一下各模块的功能。
如果能理解其功能，就自然而然能理解注意要点，理解了注意要点后，应该就能理解维护的内容了。
LC/MS是一套系统。
正如您所知，它是由各种设备与模块组成。
首先，我个人认为，逐个理解各设备与模块，是理解LC/MS系统攻略的捷径。
Waters 液质联用仪的使用与维护保养标准操作规程
Waters Quattro Premier液质联用仪的使用与维护保养标准操作规程（SOP）2004-11-09目录1．简述 (1)1.1样品入口 (2)1.2真空系统 (2)1.3数据系统 (2)2．环境要求 (3)3．仪器使用 (3)3.1开机步骤 (3)3.2质谱调谐窗口各项参数设定 (5)3.3创建项目 (6)3.4质量校正 (7)3.5调谐(Tuning) (14)3.6信号采集 (15)3.7 2695型液相色谱（Inlet Method） (19)3.8创建质谱方法 (25)3.9创建样品列表 (27)3.10 运行样品列表（ Sample List） (30)3.11 QuanLynx来编辑定量方法 (39)3.12 用QuanLynx进行批处理 (44)3.13 查看QuanLynx定量结果 (47)3.14关机 (52)4．注意事项 (53)5．维护与保养 (54)1. 简述Quattro Premier (Figure 1-1 )是一台高效串联四极杆质谱仪，用于常规LC/MS/MS分析。
Figure 1-1 Quattro Premier Mass Spectrometer样品的离子化发生在处于大气压状态下的离子源中。
离子通过取样锥孔进入真空系统，然后穿过源travelling-wave（T-Wave TM）进入第一级四极杆，在此按照质/荷比(m/z)过滤(Figure 1-2 )。
按照质量数分开的离子进入T-Wave碰撞室，进一步发生碰撞诱导裂解（CID）或者直接进入第二级四极杆。
碎片离子通过第二级四极杆进行质量分析。
离子最后经过倍增电极，phosphor和光电倍增器检测系统检测。
输出信号被放大，数字化后传给信号系统。
Figure 1-2 Quattro Premier Schematic1.1 样品入口该仪器可以与下列两种进样方式组合：a. HPLC系统，可以提供LC流出组分的分子量信息，进行目标分析和定量。
沃特世液相色谱管路安全操作及保养规程
沃特世液相色谱管路安全操作及保养规程1. 引言本文档旨在为用户提供沃特世液相色谱管路的安全操作以及保养规程，以确保实验室操作人员的安全，并保证仪器的正常运行和寿命。
请在使用前仔细阅读本规程，并按照规程进行操作和维护。
2. 安全注意事项在操作沃特世液相色谱仪时，请务必注意以下事项：2.1 个人安全•在进行操作前，务必佩戴防护手套和安全眼镜。
•确保操作区域通风良好，避免吸入有害气体。
•避免将手指或其他物体靠近运行中的色谱仪部件。
2.2 电气安全•在操作前确保色谱仪接地良好，防止电击风险。
•当操作发生带电部件时，确保使用绝缘工具。
2.3 化学品安全•在操作前，确保了解实验所使用的化学品的性质，并按照安全操作规程使用。
•处理化学品时，请佩戴适当的防护装备，避免直接接触皮肤。
2.4 火灾安全•禁止在实验室中吸烟或使用明火。
•有机溶剂使用时，请确保操作区域没有明火或火源。
3. 管路操作规程沃特世液相色谱管路的正确操作可确保仪器顺利运行和保证结果的准确性。
3.1 准备工作•确保仪器连接的电源和通气管路正常。
•打开液相色谱仪主机并进行预热，直至温度稳定在设定值。
3.2 采样操作•使用适当的采样器进行样品采集。
•保证采集样品的容器干净，并避免使用不相容的容器存储样品。
3.3 进样操作•使用适当的进样器将采样的样品导入到进样口。
•在进样前，务必检查进样器和进样口的清洁状态。
3.4 液相流动操作•确保液相流动系统正常启动，且没有任何泄漏。
•监测流速和压力的变化，确保其在正常范围内。
•定期检查管路连接部位，如发现松动或渗漏，应及时处理。
3.5 柱操作•使用适当的柱子，并按照规定的流程进行装置和拆卸。
•在更换柱子时，务必关闭流动系统，并清洗好柱子。
3.6 峰检测•监测和记录色谱图，确保峰的数值和形状在预期范围内。
•如发现异常峰或其他问题，请参照仪器操作手册进行分析和处理。
4. 仪器保养规程正确的仪器保养可以延长仪器寿命并提高仪器的性能。
Waters检测器维修保养
2489检测器维护保养1. 更换灯。
检测器的灯仅在4小时以上不用时,才需关灯，频繁开关灯也会影响灯寿命。
如果在开机时发现灯故障，不一定时灯本身的问题，有可能是流动通池污染造成的，可按上一节清洗流通池流程冲洗后在开灯。
如果灯连续多次无法点亮或检测器无法校正，建议您更换检测器灯。
自购买之日起一年或使用2000 个小时以内（以先到期限者为准），Waters 保证灯能够点亮并且通过启动诊断测试。
拆卸灯。
流程如下：（1）通过按 <Shift> <Lamp>，然后再按 <Shift> <Lamp>，使用小键盘熄灭灯。
提示：因为仪器冷却风扇将保持运行，所以使用小键盘熄灭灯可让灯冷却得更快。
要使用定时事件关闭灯的电源，请参阅 Empower 或 MassLynx “帮助”中的说明。
（2）关闭检测器的电源并拔下电源线。
（3）熄灭灯后，使其冷却至少 30 分钟。
（4）取下左前面板盖。
这里要注意，灯罩在运行期间非常热。
为防止灼伤， 请在拆卸灯之前让其冷却 30 分钟。
操作灯时，使灯处在灯罩中，为避免接触到紫外线而使眼睛受伤，在更换灯之前关闭检测器的电源，佩戴可过滤紫外线的护目镜。
操作期间使灯处在灯罩中。
（5）关闭灯的电源，并断开电源线。
（6）拧松灯座中的两个装配螺钉。
（7） 从灯室中取出灯装置。
注意：灯气体处于微负压状态下。
为防止玻璃碎片飞溅，在处理灯时应谨慎。
在处理旧灯之前将其置于新灯的包装材料中以使其得到合适的缓冲。
2. 安装新灯为避免眼睛受到有害的紫外线辐射，请勿在灯位于仪器之外或未正确固定到位时点亮灯。
不要触摸新灯的玻璃灯泡。
灯泡上的污垢或指纹会对检测器运行产生不良影响。
如果灯需要清洗，请用乙醇和镜头薄纸轻轻擦拭。
不要使用粗糙的纸或施加过大压力。
在开始之前，从包装材料中取出灯，检查新灯是否有颗粒或污垢。
如有必要，请用气体除尘器或擦镜纸清洁灯。
记录序列号（位于灯连接器线附加的标签上）。
WatersUPLCA标准操作规范维护及校正
W a t e r s U P L C A标准操作规范维护及校正内部编号：（YUUT-TBBY-MMUT-URRUY-UOOY-DBUYI-0128）一、目的建立一个正确的标准操作规程，提高工作效率。
二、适用范围本程序仅适用于Waters UPLC QDA 系统操作。
三、责任者3.1、仪器操作人员负责分析仪器的操作和日常维护。
3.2、设备管理员负责分析仪器的定期维护保养及校准或校验。
四、引用标准Waters UPLC QDA化学工作站标准操作培训。
五、实施细则5.1、开机前准备5.1.1、按品种项下规定制备供试液、对照品、流动相等。
5.1.2、准备测量用具：一次性0.22um滤器、一次性注射器、稀释用溶剂、清洗用溶剂、废液瓶等。
5.1.3、更换测定需要的色谱柱，更换制备好的所需用的流动相。
5.1.4、确认仪器和电源连接，仪器正确连接。
5.2、开机5.2.1、开启氮气发生器，待压力稳定在100psi时，则达到QDa正常操作压力。
5.2.2、打开计算机,进入Windows?系统,?按流路顺序打开各模块电源(先打开Sample Manager FTN)。
5.2.3、双击打开“Masslynx V4.1”，待自检结束后点击菜单栏中的“Shortcut”,选择“Instrument”中的“MS Console”和“Openlynx”中的“OA Manager”。
5.2.4、将溶剂放入仪器的溶剂柜中，接入对应的管路，开始对溶剂进行脱气。
点击“MS Console”中“System”下拉菜单中的“Quaternary Solvent Manager”,点击右边菜单栏中的“Control”中的“Prime Solvent ”或“Prime Seal Wash”，选择需要脱气的溶剂脱气。
5.2.5、初始化系统点击Methods的文件夹（Load a Method），单击选择所需要的分析方法，再点击“OK”；平衡系统。
waters仪器操作规程,1200字
waters仪器操作规程水的仪器操作规程是指在水处理、实验室测试、水质监测等过程中，使用各种仪器设备来进行水样的采集、分析、测试、处理等工作时所需要遵守的一系列规定和标准。
下面是一个大致的waters仪器操作规程，供参考：一、实验室安全操作规程1. 实验室内禁止吸烟、喝水、饮食等行为。
2. 操作时应做好个人防护措施，包括佩戴实验室服、手套、安全眼镜等。
3. 操作结束后，应及时清理实验台面、仪器设备、废液等。
二、waters仪器设备的操作规程1. 前期准备工作（1）根据实验要求准备所需的仪器、试剂、标准溶液等。
（2）检查仪器设备是否完好，确保设备正常、安全使用。
（3）根据操作手册确保仪器的电源、气源、水源等已连接正确。
（4）根据实验要求调整仪器的参数，如流速、温度、波长等。
2. 操作步骤（1）根据样品的性质选择相应的采样方法，并在操作前准备好采样瓶、采样管等。
（2）按照仪器操作手册的要求进行样品的进样，各种试剂的加入等操作步骤。
（3）注意保持仪器的干净和卫生，避免样品间的污染和交叉污染。
（4）根据测试要求进行数据的记录，如时间、温度、体积、含量等。
（5）操作结束后，及时关闭仪器设备，并清理仪器表面的污物。
（6）妥善保管好已用过的试剂、标准品等，避免受潮、受热等损害。
三、标准溶液的配制和保存1. 标准溶液的配制（1）根据要求准备好所需的试剂、水质和容器等。
（2）称量准确的试剂，并按照配比要求依次加入到容器中。
（3）加入水质并搅拌至完全溶解。
（4）根据要求进行标定和调整，确保标准溶液的准确度和稳定性。
2. 标准溶液的保存（1）标准溶液应保存在干燥、阴凉、避光、无尘、无异味的环境中。
（2）标准溶液应密封保存，避免受潮、挥发等现象发生。
（3）按照仪器操作手册的要求检测标准溶液的溶液浓度和稳定性，并及时更换或重新调整。
四、实验操作记录1. 操作前需要准备好实验记录表格，包括实验日期、实验人员、样品编号、操作步骤等。
Waters_LC-MS_日常维护参考手册
©2008 Nihon Waters K.K. 16
Probe的维护
不锈钢毛细管的更换
Probe 探头的更换
— 喷雾气体（喷雾样本的气体）不稳定
©2008 Nihon Waters K.K.
3
什么是维护
什么是维护？
— 确保仪器持续正常运作的保养、点检作业
o 仪器的环境条件保持最佳状态。同时，为防患于未然，避免发生故障，
建议客户实施的日常维护
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建议客户实施的维护
LC/MS需要注意哪些要点？ 需要实施哪些维护？
有哪些复杂的操作？
确认真空度
— 确认分析器与碰撞室的真空度
o 通过每日确认，明确仪器的环境条件 。
仪器周围的温度
— 温度变化引起的质量轴偏离 o 特别要注意短时间内急剧的温度变化
©2008 Nihon Waters K.K.
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质量分离部（分析器）的维护
校准
— 必须定期进行质量轴的修正（校准）
o 抽真空后
9泵机的注意要点?泵确认压力o确认压力确认压力的变动值?如压力发生变动则基线与稳定时间会出错确认流动相o使用符合hplc要求等级与lcms要求等级的流动相?避免使用无挥发性的缓冲剂磷酸缓冲剂等o流动相排气o定期更换流动相?保持使用新鲜的水?更换时泵的各管路残留溶剂不应继续使用
LC/MS的熟练使用方法
©2008 Nihon Waters K.K.
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泵机的维护
泵的维护
— LC系统的清洗
waters液相色谱仪的维护与常见故障
4、色谱柱
1)塔板数下降 a. 样品处理不合适，选择适当的样 净化方法，选择合适流动相。 b. 柱头塌陷,考虑重新购买。
2)峰形变坏 a. 出现拖尾峰，分叉峰，非高斯峰。 b. 与塔板数下降有关，峰形坏保留时间不 变，可能是柱堵塞(不锈钢烧结片)，或 柱头有死体积（常见于使用Peek接头）。
©2007 Waters Corporation 44
3、进样系统
自动进样系统 d. 样品滞留：空白溶剂出色谱峰.
加倍清洗，或调整样品瓶顺序， （从低浓度开始，高浓度放后
面）或在样品瓶前放清洗液瓶.
©2007 Waters Corporation 36
自动进样器（717/2690/2695）
©2007 Waters Corporation 37
自动进样器（717/2690/2695）
溶剂过滤头
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1、流动相及溶剂瓶
溶剂瓶或流动相被污染
产生有规则的噪声； 基线上升，梯度洗脱出鬼峰； 原因: 溶剂质量差（含杂质多）； 配流动相的玻璃器皿不合格,微生物 影响； 配制流动相的操作不当（过滤、脱 气、搅拌).
©2007 Waters Corporation 21
进样器
停机前一定冲洗干净进样 器内残留的样品或缓冲盐，防 止样品和无机盐沉积造成样品 交叉污染，硬件磨损或管路堵 塞。
注射器，样品瓶最好使用 仪器自配的，不要用其它仪器 的。
©2007 Waters Corporation 11
柱—防止柱性能下降
1 溶剂的化学腐蚀性不能太强； 2 避免颗粒物在柱头沉降； 3 柱压不能太高，防止冲击太大； 4 流动相pH值小于7时，最好用大粒度同种填料的预
Waters高效液相色谱维护与保养
术语
15、死时间（t0）:不被固定相滞留的组分，从进 样到出峰最大之所需的时间
16、保留时间（tR）：组分从进样到出峰最大之 所需的时间。
17、死体积（V0）：不被固定相滞留的组分，从 进样到出峰最大之所需的流动相的体积
18、柱外体积 ：从进样系统到检测器之间色谱柱 以外的液路部分中流动相所占有的体积。
3、流动相不互溶
3、选择互溶的流动相
4、混合器混合效果不好 4、维修或更换混合器，
或者不走梯度时用单一泵
5、氘灯能量不足
5、更换氘灯
26
Waters高效液相色谱维护与保养
C.保留时间变化
原因
1、温度变化 2、系统未平衡 3、流动相组成变化 4、色谱柱污染 5、色谱柱寿命 6、流速变化 7、柱压变化
b、更换色谱柱
3、流动相使用不当 3、a、使用恰当的流动相
或缓冲盐的结晶沉
b、冲洗色谱柱
淀
4、色谱柱选择不当 4、选择恰当的色谱柱
5、柱温过低
5、提高温度
6、保护柱阻塞
6、清洗或更换保护柱
7、在线过滤器阻塞Waters7高、效液相清色谱洗维护或与保养更换在线过滤器 22
D、压力低
“漏”
原因
1、流速设定过低
Waters高效液相色谱维护与保养
第四部分色谱柱的维护与保养
4柱子的再生步骤：
1） 配制500ml的再生溶液（500mg EDTA_Ca/L 2） 把柱子流路方向反过来，在90℃下以 0.5ml/min的流速冲洗一整夜； 3） 再生之后回到正常方向使用。 当柱子反冲时，很重要的一点是需要保持溶剂的温 度从而确保正确的冲洗，用冷的溶剂将会延缓冲洗 的过程。
Waterse2695高效液相色谱仪操作维护规程
1. 目的本标准操作规程（SOP）规范了Waters e2695型高效液相色谱仪的操作维护，以保证检验数据的准确性和仪器安全规范操作，保证测定结果的准确无误。
2. 范围本SOP适用于Waters e2695型高效液相色谱仪的操作维护。
3. 职责质量部QC主管、Waters e2695型高效液相色谱仪使用人员对本规程实施负责。
4. 定义无。
5. 程序5.1 对仪器的一般要求设备放在通风性好的房间，避免阳光直射。
5.2 操作前准备5.2.1 流动相：按方法要求配制流动相，超声波脱气2分钟左右。
缓冲盐流动相经用0.45μm相兼容材质滤膜过滤。
5.2.2 样品溶液：按方法要求配制样品溶液，并以过滤或10000转以上高速离心方式除去溶液中的固体微粒。
5.2.3 将e2695泵清洗管路（不通明管）、洗针管路（绿管）以及ABCD管路分别放入适当的溶剂中。
5.3 开机5.3.1 打开计算机，等操作系统启动完全。
5.3.2 打开仪器电源，待仪器各部分自检完成后进行以下操作：5.3.2.1 Prime seal wash：Diag →Prime seal wash，直至入口管没有可见气泡，按Halt键停止Prime，再按close关闭界面；5.3.2.2 Prime needle wash：Diag →Prime needl e wash，清洗进样针1-2此。
Close并Exit，退出Diag界面。
5.3.2.3 Dry Prime：打开泵抽液阀→Menu/Status →Direct Function →Dry Prime →依次选择A、B、C、D，同时用注射器抽取液体，结束后按cancel，切记完成后将抽液阀关闭；5.3.2.4 Wet Prime：依次将实验所涉及的流路设为100% →Direct Function →Wet Prime，确保流路中为新鲜溶剂；5.3.2.5 设定流速、柱温等参数，平衡系统约30分钟；5.3.2.6 Purge injection：Direct Function →Purge injection。
Waters检测器维修保养
2489检测器维护保养1. 更换灯。
检测器的灯仅在4小时以上不用时,才需关灯，频繁开关灯也会影响灯寿命。
如果在开机时发现灯故障，不一定时灯本身的问题，有可能是流动通池污染造成的，可按上一节清洗流通池流程冲洗后在开灯。
如果灯连续多次无法点亮或检测器无法校正，建议您更换检测器灯。
自购买之日起一年或使用2000 个小时以内（以先到期限者为准），Waters 保证灯能够点亮并且通过启动诊断测试。
拆卸灯。
流程如下：（1）通过按 <Shift> <Lamp>，然后再按 <Shift> <Lamp>，使用小键盘熄灭灯。
提示：因为仪器冷却风扇将保持运行，所以使用小键盘熄灭灯可让灯冷却得更快。
要使用定时事件关闭灯的电源，请参阅 Empower 或 MassLynx “帮助”中的说明。
（2）关闭检测器的电源并拔下电源线。
（3）熄灭灯后，使其冷却至少 30 分钟。
（4）取下左前面板盖。
这里要注意，灯罩在运行期间非常热。
为防止灼伤， 请在拆卸灯之前让其冷却 30 分钟。
操作灯时，使灯处在灯罩中，为避免接触到紫外线而使眼睛受伤，在更换灯之前关闭检测器的电源，佩戴可过滤紫外线的护目镜。
操作期间使灯处在灯罩中。
（5）关闭灯的电源，并断开电源线。
（6）拧松灯座中的两个装配螺钉。
（7） 从灯室中取出灯装置。
注意：灯气体处于微负压状态下。
为防止玻璃碎片飞溅，在处理灯时应谨慎。
在处理旧灯之前将其置于新灯的包装材料中以使其得到合适的缓冲。
2. 安装新灯为避免眼睛受到有害的紫外线辐射，请勿在灯位于仪器之外或未正确固定到位时点亮灯。
不要触摸新灯的玻璃灯泡。
灯泡上的污垢或指纹会对检测器运行产生不良影响。
如果灯需要清洗，请用乙醇和镜头薄纸轻轻擦拭。
不要使用粗糙的纸或施加过大压力。
在开始之前，从包装材料中取出灯，检查新灯是否有颗粒或污垢。
如有必要，请用气体除尘器或擦镜纸清洁灯。
记录序列号（位于灯连接器线附加的标签上）。
waters高效液相色谱系统操作规程(入门)
1.目的规范Waters 高效液相色谱系统的使用和维护。
2.范围本规程适用于Waters 高效液相色谱系统的使用和维护。
3.职责质检室仪器分析员负责Waters 高效液相色谱系统的日常使用和维护。
4. 系统组成本系统由Waters 600E 多溶剂输送系统（有梯度控制器的高压输液泵）、Waters 在线脱气机、Rheodyne 7725i 手动进样阀、Waters 2487 双通道紫外检测器、Millennium32 色谱工作站/ 电脑等组成，另外还包括打印机、断电保护器和通风柜等辅助设备。
5. 程序5.1. 准备5.1.1.使用前应根据待检样品的检验方法准备所需的流动相（应足够；流动相必须用0.45 ym滤膜过滤）、样品和标准溶液（也可在平衡系统时配制），更换合适的色谱柱（柱进出口位置应与流动相流向一致）和定量环。
5.1.2.通电前应检查仪器设备之间的电源线、数据线和输液管道是否连接正常。
5.2.开机和泵操作5.2.1.开机5.2.1.1.接通断电保护器的电源，依次打开断电保护器、脱气机、600E 泵、2487 检测器，待检测器自检结束显示测量状态时，打开打印机、电脑显示器、主机。
5.2.1.2.打开Millennium32 软件，按「Login...」，输入用户名和密码，按「OK」注册进入系统主界面。
在Project 档内选择所需的项目，右击『Run Samples 』图标，选择色谱系统“600_2487” 后打开QuickSet 窗口。
5.2.2.更换溶剂5.2.2.1.打开600E 泵后，转动进口集合管阀手柄（以下简称手柄）至RUN 位置；5.2.2.2.将一塑料烧杯放在参照阀出口管下以收集分流的溶剂，向右打开参照阀（断开柱和进样器）；5.2.2.3.按］Direct ］键使其显示直接控制屏幕，设流速为1ml/min （梯度配比阀在0ml/min 时不工作）；5.2.2.4. 选择欲使用的某一溶剂通道，设其比例为100% ，其它为0% ；5.2.2.5.将输液管从原有溶剂瓶中取出，放入一干净的空瓶中；5.2.2.6. 逆时钟转动手柄至DRAW 位置，用启动注射器从进口集合管阀的接口抽出约2ml溶剂；5.2.2.7.再将输液管放入新溶剂瓶内，继续抽吸直到新溶剂出来并无气泡为止；5.2.2.8.转动手柄至RUN 位置，将启动注射器取下并排掉筒内的溶剂。
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保存于聚乙烯瓶中的超纯水
测试条件 水样: 40ml trace enrichment @ 2.0 ml/min 色谱柱: C18 反相柱 (Waters) 梯度: 线性 100% 水－ 100% 乙腈 波长: 254 nm
色谱柱安装及连接的机械因素
连接适当
连接不妥，造成漏液
连接不妥
谱带展宽
色谱泵
色谱泵运行
注意∶
排气后，先设流速为 0 恢复排气时断开的部分，如∶进样器、色谱柱 根据色谱柱的不同，逐渐提高流速到设定值
色谱泵在停用时,应先用水洗去缓冲盐,然后用纯 甲醇充满泵头及管路,并保存在纯甲醇中
色谱泵
— 用纯甲醇过渡，浸润泵头及管路，备用
紫外检测器
保持清洁，每天用后与色谱柱一起清洗；
使用脱过气的流动相，防止气泡滞留池内； 检测器灯有一定寿命，超过4小时不用时可以不开灯； 尽量避免使用pH>9.5的流动相，以防腐蚀流通池石英 窗，避免使用可能析晶的流动相，防止流通池堵塞。
HPLC常见故障分析
干灌注和湿灌注
按主机上的“Menu/Status” 键，进入Status界面。检查真 空脱气机degasser的模式mode 是否为on。（一般为on）
当溶剂的管子是空的时候，或 不小心走干溶剂的时候执行干 灌注 (Dry Prime) 当需要排除气泡时，或平时更 换流动相时执行湿灌注 (Wet Prime) 。
供电电源的影响
泵不良 – 检修泵
HPLC流路基线噪音问题分析
基线有无规律的尖峰
气泡 - 溶剂脱气 电路接触不良 - 保证清洁, 接线牢固, 接点无氧化 光源灯不良- 检查处理 电噪声 - 去除噪声源
—检测器流动池漏
—色谱柱污染
HPLC流路基线噪音问题分析
基线漂移
色谱柱有其他组份被洗脱出 - 冲洗, 直至基线稳定
溶剂发生变化 (如溶入气体或溶剂挥发) - 氦气或脱气机脱气, 溶剂瓶避光,密封(但要注意防止溶剂瓶内产生负压)
系统有漏液之处 - 检漏并处理
环境温度影响 (尤其对示差,电导,电化学检测) - 室温,柱温,检 测池温度控制 环境湿度影响 对光检测器有较大影响
流动相更换
用水更换色谱系统中缓冲液，将吸滤头部分放入 烧杯中边振动边清洗，并用水进行灌注，将管路 中的旧流动相替换，然后插入新的流动相中。
用新流动相更换水或冲洗色谱柱溶剂
更换流动相时，要保证两种溶剂的互溶性,如不互 溶，要用一种中间溶剂过渡（正反相系统变换时 一般用异丙醇过渡）
Waters溶剂瓶注意事项
源开关至 ON 的位置，仪器开 始进行自检。
2. 仪器将进行大约5分钟的自检过
程，待仪器自我测试完毕后，
画面上方的状态显示区会出现
“Idle” 状态，表示开机测试正 常。
色谱柱对流动相的要求
除去微粒 使用0.45μm或更细的膜过滤 酸碱性较强的流动相应注意对滤膜的腐蚀作用
纯度的要求 超纯水，梯度实验时水中有机杂质含量要低 缓冲液的pH值，在填料的允许范围内（一般为pH2-8） 缓冲液（盐）的浓度(≤100mM) 有机溶剂：色谱纯，并与填料相匹配 溶剂中的杂质含量
在线状态时，流速不要超过5ml/min） 3. 重复上述的步骤直到对所有溶剂的Wet Prime执行完毕。
注意事项：若有缓冲盐流动相,灌注前用后均需用水过渡
冲洗进样器 Biblioteka Purge Injector)何时执行？
○ 改变溶剂时。
○ 发现注射器及其管路内有气泡时。
○ 每天开机和关机的时候。
1.按“Direct Function” 键，选择Purge Injector，按Enter。
加热
简单，如同抽真空一起使用，其效果很好。但容易造成流动相组 成的变化 同上，一般在溶剂抽滤的同时，也有脱气的效果 简单，但效果一般。超声时间不要太长(1分钟左右即可) 可保持连续脱气，多用于低压梯度 可保持连续脱气，多用于低压梯度
抽真空
超声波
通惰性气体（一般用氦气）
在线脱气机
仪器
*泵 *进样器 *检测器 *数据处理单元
HPLC系统压力问题分析
问题:系统压力高 可能的原因:
—温度太低 —流速太高 —流动相粘度大 —管路堵塞 —仪器或色谱柱堵塞 —压力传感器问题
HPLC系统压力问题分析
问题:压力低或没有压力 可能原因: —温度太高;流速太低 —泵关闭或保险丝断了 —泵未输送流动相 —系统内有渗漏处 —所用溶剂不正确 —自动进样器在Purge时卡住
吸滤头
在线过滤器
单向阀
HPLC系统压力问题分析
单向阀的清洗如果使用过缓冲盐溶液请使用40 ℃
~50℃的温水超声20min 如果使用过纯乙腈请使用异丙醇超声20min 如果使用过其他流动相或上述两种溶液超声后请使用
纯甲醇超声20min
HPLC流路基线噪音问题分析
基线不稳定(不重复)
—检测池中有大的气泡 —流路中有小气泡流过 —系统未稳定或未达到化学平衡 —流动相被污染
1星期
1天
新鲜配制
0
5
10 分
15
20
25
流动相的脱气目的
— 使色谱泵的输液准确
o 输液量均匀准确，并且脉动减小 o 保留时间及色谱峰面积的重现性提高
— 提高检测的性能
o 防止气泡引起的尖峰 o 基线稳定，信噪比增加 o 溶剂的紫外吸收本底降低
— 保护色谱柱
o 减少死体积 o 防止填料的氧化
流动相脱气的方法
液相色谱对流动相的要求
必须用色谱纯有机溶剂 — 室温下密封,避光保存 水或缓冲盐溶液要用超纯水(18.2MΩ) 缓冲盐流动相: — 当日现配现用 — 低温下密封保存,一般不超过3天 — 最好加5%有机溶剂混合保存
液相色谱对流动相的要求
有机溶剂与水（缓冲盐）混配的流动相: — 低温密封保存 — 防止有机相的挥发
检查6根管子是否在液面下，必须确保6根管子全部
插到溶剂瓶的底部 溶剂瓶液面必须高于溶剂混合阀的位置；而洗针液
的溶剂瓶应放于试验台面上，与2695仪器底部位
于同一水平面上
灌注柱塞密封清洗
1. 主界面中，选择Diag。 2. 按Prime Seal Wash ，再按Start 3. 直到清洗溶剂流出泵杆密封圈冲洗
干灌注 (Dry Prime)
1.将空的针筒插入抽液阀（排液阀）中，打开抽液阀(以逆时针的方向将 抽液阀旋2-3圈)。 2.按“Menu/Status” 键，进入Status (1)画面，按“Direct Function” 功能 键，选择Dry Prime，按Enter。 3.按下欲使用的溶剂开启阀门(例如:Open A)，然后将针筒向外拉，抽出 约5~10mL溶剂并完全抽出溶剂管子内的气泡，完成后关闭排液阀。排液 阀不要拧太紧，以不漏液为准。
使用HPLC级试剂,注意泵压力不要太高,要适当 调整压力,一般压力上限在3500-4000Psi 注意防止因泵堵塞造成压力过高损坏柱塞杆或烧 坏电机。
液相色谱系统的清洗与钝化
色谱泵吸滤头,进出口阀及管路(包括进样器和检测池)若被污染, 应作清洗和钝化处理 一般采用30％磷酸水溶液作为清洗剂，用6M硝酸作为钝化剂 先清洗再钝化 清洗的目的是去除不锈钢管路及系统内的污垢
反压变化 - 溶剂和样品过滤. 注意黏度过大的样品
HPLC流路基线噪音问题分析
基线周期性噪声
绝大多数情况下是来源于泵的问题 泵头内有气泡 - 流动相脱气 ,泵头排气 泵进出口阀有问题 - 更换单向阀组件 柱塞杆有问题 - 更换柱塞杆及其密封圈 溶剂混合不良 - 加装混合器 电噪声 - 去除噪声源
HPLC流路基线噪音问题分析
HPLC系统压力问题分析
问题:压力低或没有压力 可能原因:（续） —储液瓶中无溶剂 —低压限设置不当 —泵未正确排气 —溶剂入口过滤头堵 —入口管路中有空气 —泵失效
HPLC系统压力问题分析
问题:压力不稳 可能原因: —压力传感器问题 —泵排气不充分 —泵失效 —流动相未正确脱气 —所用溶剂不混溶或易挥发
2.输入Sample Loop 体积清洗的倍数(原定值为6 倍)，按Enter。
冲洗进样器
每次进样前仪器会洗针（Needles wash）进样之
后不洗针 进样针是流路的组成部分,运行中一直由流动相清洗 每次批量进完样后手动清洗
或最后进一针50μl流动相
如果流动相中有盐的话则用水替代缓冲盐那部分比例
色谱泵及系统的钝化
钝化液用6M硝酸水溶液
6M硝酸的配制:取浓硝酸40ml与60ml水混匀
钝化步骤如下:
— 在清洗步骤完成后进行钝化处理 — 确认清洗用的磷酸已基本洗净
— 用纯水灌注泵头(四元泵的A,B,C,D四路各为25%)
— 用6M硝酸水溶液钝化系统(1ml/min流速)45分钟 — 换成清水洗至出口水pH显中性
废液管，按Halt。
4. 按Close。
密封圈清洗的溶液，在反相液相色谱中 可使用90％水/10％甲醇 (体积比，根据 实际需要进行选择)。
灌注针头清洗
1. 主界面中，选择Diag。 2. 按Prime Ndl Wash，缺省设定值 为30 秒，若想要多清洗几次时，
请按Start Again。
洗针溶液，在反相液相色谱中可使 用50％水/50％甲醇 (体积比，根据实 际需要进行选择)。
钝化的目的是使不锈钢管路的内表面形成光滑均匀的氧化膜
色谱泵及系统的清洗
清洗液用30%磷酸水溶液
30%磷酸配制:取85%浓磷酸35ml与65ml水混匀