铜绿假单胞菌的检验流程
胃镜中铜绿假单胞菌的微生物学鉴定
果 为 革 兰 氏 阴性 杆菌 。对 培养 液 真接 进 行 镜检 ， 发现 有 鱼梭 样运 动的杆菌 。
４ １ 氧化 酶试验 ．
取 －４ 块 洁净 的 白色 滤纸 片 放 在 灭菌 平 皿 内 ， 无 菌玻 棒挑 ， 用 取可 疑 菌 落 涂在 滤 纸 片上 ， 然后 在 其上 滴 加 一 滴新 配 制 的 ｌ 二 ％ 甲基 对 苯二 胺试 液 ， ０ ３ ｓ内出现 紫 红色 ， 阳性 。 为
药 物 研 究
４４ 绿 脓 菌素试 验 ． 在 普通 琼 脂斜 面培 养基 内 ， 入 三氯 甲烷 ５ 加Ｎ Ｏ ＧＭ Ｊ Ｃ
６ ３２ 戊 二醛消 毒剂危 险因素 的防 护 戊 二醛消毒 剂危险 因素 ．． 主要包 括 ： ）２ （ ２作场所通风 不 良； ） １１ （ Ｎ毒过 程不密 闭； ） ２ （ 未及时处理 配 ３ 制 与丢 弃溢 出的 戊二 醛 ； ） 人防 护不 到位 等 。 （个 ４ 戊 二 醛 消 毒 室应 有足 够 空 间保证 戊 二醛 蒸 气 充 分稀 释 ， 气 空 交换 次 数 至少 １ ／ ０次 ｈ。局 部 排风 罩 应安 装 在 戊二 醛蒸 气 排 出点 的水 平位 置 ， 度 ８ ～１０ 尺 ／ ｎ 管道 排 气罩应 与室 外大 气 面速 ０ ０英 ｍｉ ； 非循 环 排 气 系统相 连 ， 离人 与空 气 吸入 管 ； 管道 排气 系统 的 蒸 远 非 气应 释 放至 戊 二醛 过 滤 系统 ， 滤 后清 洁 空 气 回至房 内 ， 过 并定 期监 测其 过 滤效 率 ， 定期 更 换 。工 作人 员应 能察 觉 到任 何来 源 的气 流 ，
能利 用 枸 檬 酸盐 。见 表 ｌ 。 ４ ３ ４ ℃生 长试 验 ． ２
铜绿假单胞菌的菌种鉴定
铜绿假单胞菌的菌种鉴定全文共四篇示例，供读者参考第一篇示例：铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）是一种常见的革兰氏阴性细菌，属于假单胞菌属（Pseudomonas），广泛存在于自然界中，是一种耐受力很强的细菌。
铜绿假单胞菌在人类和动植物体内都有可能成为病原菌，引起多种感染疾病，如呼吸道感染、尿路感染、皮肤感染等。
对铜绿假单胞菌的菌种鉴定十分重要。
铜绿假单胞菌的菌种鉴定主要包括形态学观察、生理生化特性检测、分子生物学方法等。
形态学观察是最为简单直观的方法，通过观察细菌在琼脂培养基上的形态特征来初步鉴定。
铜绿假单胞菌在琼脂培养基上形成典型的青绿色凝块状菌落，通常呈金黄色至淡黄色，具有辛辣气味。
除了形态学观察外，生理生化特性检测也是菌种鉴定的重要方法之一。
铜绿假单胞菌具有一系列特殊的生理生化特性，如利用氧化物作为唯一氧化剂和膜脂组成特殊等。
铜绿假单胞菌产生溶血素、胞外聚合物酶、脂肪酶等多种外源酶，可以降解寡糖、脂质等物质。
分子生物学方法也成为现代菌种鉴定的重要手段。
通过PCR扩增和测序技术，可以对靶基因进行测序分析，比如16S rRNA基因序列分析。
铜绿假单胞菌16S rRNA序列具有较高的保守性，同时又有足够的变异性，能够帮助界定种和属的分类关系。
在进行铜绿假单胞菌菌种鉴定的过程中，需特别注意以下几点：1. 选择合适的菌落：铜绿假单胞菌菌落为青绿色，有金黄色至淡黄色的边缘。
需避免选择其他青绿假单胞菌属菌种带来的干扰。
2. 确认生理生化特性：对于一些特殊的生理生化特性，如氧化物利用情况、酶产生等，可以通过专门的生化试验进行验证。
3. 结合分子生物学方法：如果需要进一步确定菌种的归属，可结合分子生物学方法进行16S rRNA序列分析，加深对菌种的认识。
铜绿假单胞菌的菌种鉴定是一项重要且复杂的工作，需要结合形态学观察、生理生化特性检测和分子生物学方法等多种手段进行综合分析。
只有准确鉴定出铜绿假单胞菌的菌种，才能更好地开展相关的医学、环境等研究工作，为防治相关感染病害提供科学依据。
铜绿假单胞菌检验方法标准
铜绿假单胞菌检验方法标准【最新版3篇】目录（篇1）I.铜绿假单胞菌的介绍II.检验方法标准的概述III.标准的内容和要求IV.检验方法标准的意义和影响正文（篇1）一、铜绿假单胞菌的介绍铜绿假单胞菌是一种常见的细菌，广泛存在于自然界和人类生活中，如水、土壤、空气等。
铜绿假单胞菌是一种致病菌，能够引起多种感染性疾病，如肺炎、伤口感染等。
因此，对于铜绿假单胞菌的检验和控制至关重要。
二、检验方法标准的概述检验方法标准是指针对某一特定对象，制定的一系列检验方法和标准，以确保检验结果的准确性和可靠性。
检验方法标准是医学检验的重要组成部分，对于疾病的诊断和治疗具有重要意义。
三、标准的内容和要求1.检验对象：标准规定了检验对象的范围和种类，包括细菌、病毒、真菌等。
2.检验方法：标准规定了检验方法的选择和操作步骤，以确保检验结果的准确性和可靠性。
3.质量控制：标准规定了质量控制的要求和方法，以确保检验结果的准确性和可靠性。
4.结果报告：标准规定了结果报告的内容和格式，以确保结果的准确性和可靠性。
四、检验方法标准的意义和影响1.提高检验结果的准确性和可靠性：标准规定了检验方法和质量控制的要求，可以确保检验结果的准确性和可靠性。
2.促进医学检验的发展：标准是医学检验的重要组成部分，可以促进医学检验的发展和提高医疗水平。
目录（篇2）I.铜绿假单胞菌的介绍II.铜绿假单胞菌检验方法的标准III.检验方法标准的内容和意义IV.检验方法标准的实施和应用正文（篇2）一、铜绿假单胞菌的介绍铜绿假单胞菌是一种常见的细菌，它可以在潮湿的环境中生长，并且对许多消毒剂具有抵抗力。
这种细菌通常存在于水、土壤和植物中，并且有时也会在人体内繁殖。
铜绿假单胞菌可以引起许多不同类型的感染，包括伤口感染、肺炎和中耳炎等。
二、铜绿假单胞菌检验方法的标准近年来，随着医疗技术的发展，检验方法的标准也得到了不断的改进和完善。
铜绿假单胞菌检验方法的标准是基于实验室微生物学和消毒学原理制定的，其目的是为了确保检验结果的准确性和可靠性。
铜绿假单胞菌检验方法标准
铜绿假单胞菌检验方法标准【原创版2篇】篇1 目录1.铜绿假单胞菌的概述2.铜绿假单胞菌的检验方法3.铜绿假单胞菌在化妆品中的卫生标准4.铜绿假单胞菌的致病性和治疗药物5.铜绿假单胞菌的防控措施篇1正文一、铜绿假单胞菌的概述铜绿假单胞菌，又称绿脓杆菌，是一种广泛存在于土壤中的细菌。
其菌体细长且长短不一，有时呈球杆状或线状，成对或短链状排列。
铜绿假单胞菌编码三种 VI 型分泌系统，即 h1-t6ss、h2-t6ss 和 h3-t6ss。
其中 h1-t6ss 被认为是一种严格的细菌靶向途径，而 h2-t6ss 和h3-t6ss 通过作为靶向宿主细胞并促进铜绿假单胞菌感染的毒力。
二、铜绿假单胞菌的检验方法铜绿假单胞菌的检验方法主要包括以下几种：1.形态学观察：通过暗视野显微镜或相差显微镜观察菌体的形态和结构。
2.培养法：将采集的样本在特定的培养基上进行培养，观察菌落的形态和特征。
3.免疫学检测：通过抗原 - 抗体反应检测样本中铜绿假单胞菌的抗原或抗体。
4.分子生物学检测：如 PCR、DNA 测序等方法，通过对特定基因进行扩增和测序，判断样本中是否存在铜绿假单胞菌。
三、铜绿假单胞菌在化妆品中的卫生标准在化妆品中，铜绿假单胞菌的检测是非常重要的，因为铜绿假单胞菌对人有致病力，常引起人皮肤化脓感染，特别是烧伤、烫伤、眼部疾病患者被感染后，常使病情恶化，并可引起败血症。
因此，在化妆品卫生标准中规定不得检出铜绿假单胞菌。
四、铜绿假单胞菌的致病性和治疗药物铜绿假单胞菌具有较强的致病性，可引起各种感染，如皮肤感染、败血症等。
针对铜绿假单胞菌感染的治疗，可选用以下药物：1.半合成青霉素：如阿洛西林和哌拉西林，其中以哌拉西林为最常用。
2.第三代头孢菌素：如头孢他啶、头孢哌酮。
3.其他内酰胺类药物：如亚胺配能及氨曲南。
4.氨基糖苷类：如庆大霉素、妥布霉素、阿米卡星和异帕米星。
5.氟喹酮类：如氧氟沙星、环丙沙星及氟罗沙星等。
铜绿假单胞菌检测(滤膜法)
铜绿假单胞菌检测（滤膜法）
录入时间:2015-4-27 10:30:42 来源：青岛海博生物
一、原理
将250mL水样用孔径为0.45μm的滤膜过滤，并将滤膜移至CN琼脂培养基上，于36℃士1℃恒温箱中培养48h，能够在溴化十六烷基三甲铵选择性培养基上生长并产生绿脓菌素，或者能够在溴化十六烷基三甲铵选择性培养基上生长并且氧化酶呈阳性、紫外光（360±20nm）照射下能发荧光、能够利用乙酰胺产氨的革兰氏阴性无芽孢杆菌，经证实为铜绿假单胞菌，则其检测结果为阳性。
二、培养基和试剂
1.假单胞菌琼脂基础培养基/CN琼脂（配制好之后低温避光保存）
2.金氏B（King’s B）培养基（配制好之后低温避光保存）
3.乙酰胺肉汤（用蒸馏水配制，配置好之后低温避光保存）
4.营养琼脂
5.氧化酶试剂
6.钠氏试剂（配制好之后低温避光保存）
7.设备和仪器
8.玻璃器具：所有玻璃器皿使用前需121℃高压蒸汽灭菌15分钟
9.恒温培养箱：36℃±1℃
10.紫外灯：波长应为360±20nm
11.滤膜：直径47mm，微孔径为0.45μｍ（处理方法：如滤膜未经灭菌，则使用前需先将
滤膜放入烧杯中，加入蒸馏水，置于沸水浴中煮沸灭菌3次，每次15 min。
前两次煮沸后需更换水，用蒸馏水洗涤2次～3次，以除去残留溶剂。
建议使用一次性无菌滤膜。
）12.显微镜：10×～100×
13.冰箱：0℃～8℃
三、操作流程图。
简述桶装水中铜绿假单胞菌的几种检测方法
简述桶装水中铜绿假单胞菌的几种检测方法作者：马慧娟徐慧高宏来源：《食品安全导刊·中旬刊》2019年第03期引言铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa），也称为绿脓杆菌，属于假单胞菌属。
广泛分布于自然界（土壤、空气、水源等）及正常人皮肤、肠道和呼吸道，大小为（1.5～3.0）μm×（0.5～0.8）μm，属于非发酵革兰氏阴性杆菌。
该菌在普通培养基上生长良好，专性需氧，菌落形态不一，多数直径在 2～3 mm，边缘不整齐，扁平湿润。
在血琼脂平板上形成透明溶血环。
铜绿假单胞菌是一种重要的水源性致病菌，广泛存在于各类型水中，对消毒剂、干燥、紫外线等理化因素具有很强的抵抗力，可引起急性肠道炎、脑膜炎、败血症和皮肤炎症等疾病。
目前检测铜绿假单胞菌的标准中采用的主要是传统生化方法，包括分离培养、生化鉴定等，不能实现大批量水样的快速检测。
近几年，随着科技的发展，检测铜绿假单胞菌的方法多种多样，本文对近年铜绿假单胞菌检测技术进行综述，为铜绿假单胞菌的快速、准确检测研究技术提供参考。
铜绿假单胞菌检测技术国标滤膜法检测桶装水中铜绿假单胞菌的方法是GB 8538-2016《食品安全国家标准饮用天然矿泉水检验方法》。
铜绿假单胞菌产色素分为三种：产绿脓菌素，产青脓素，产红脓素;铜绿假单胞菌在4℃不生长而在42℃可以生长;具有氧化酶，可以使细胞色素C氧化，再由氧化型细胞色素C使对苯二胺氧化，生成有色的醌类化合物：可以产生一种脱酰胺酶，可使乙酰胺经脱酰胺作用释放氨，滴加纳氏试剂（碘化汞钾），氨在碱性条件下与碘化汞钾作用，生成红色络合物;根据这些生化特性，通过滤膜过滤将铜绿假单胞菌富集到CN琼脂上，再用生化试剂管进行生化鉴定。
也可以用VITEK 2 Compact 全自动细菌鉴定系统用于微生物鉴定，准确率高，可用于微生物实验室的日常检测工作。
实时荧光定量PCR检测外毒素 A 基因在铜绿假单胞菌中高度保守，根据 GenBank 中铜绿假单胞菌外毒素A基因片段序列，设计特异性引物及TaqMan探针，并利用实时荧光 PCR技术，对目标靶序列进行特异性扩增，建立了一套检测食品中铜绿假单胞菌的方法，特异性试验和灵敏性试验良好，该检测方法具有特异、快速的特点，能够满足检测要求，为食品中铜绿假单胞菌的快速检测奠定了基础。
铜绿假单胞菌操作规程
5.3具抑菌活性的供试品
5.3.3.1取滤膜孔径不大于0.45µm，直径不小于50mm可拆卸的滤器。根据供试品及其溶剂的特性选择滤膜材质。滤器及滤膜使用前应采用适宜的方法进行灭菌。使用时，必须保证滤膜在过滤前后的完整性。
5.3.3.2水溶性供试液过滤前先将少量的冲洗液过滤以润湿滤膜。油类供试品，其滤膜和过滤器在使用前应充分干燥。为发挥滤膜的最大过滤效率，应注意保持供试品溶液及冲洗液覆盖整个滤膜表面。供试液经薄膜过滤后，若需要用冲洗液冲洗滤膜，每张滤膜每次冲洗量为100ml，冲洗次数为3次。每片滤膜的总过滤量不宜过大，以避免滤膜上的微生物受损伤。
5.3.3.3每张滤膜取相当于1g或1ml供试品的供试液直接过滤，或加至适量稀释剂中，混匀，过滤。若供试品1g或1ml含菌较多，可选适宜稀释级的供试液1ml，过滤。用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或其它适宜的冲洗液冲洗滤膜，每张滤膜每次冲洗量为100ml，冲洗次数为3次。冲洗后取出滤膜，菌面朝上贴于营养琼胆培养基或玫瑰红钠琼脂培养基或酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基平板上培养。每种培养基至少制备一张滤膜。滤膜贴于平板上时不得有空隙.10.1%苯扎溴铵溶液（供洗手、擦拭操作台面用）。
2.1.25%石碳酸溶液（配好后装入玻璃消毒缸内，供消毒带菌吸管用）亦可选用其他适宜消毒液。
2.1.375%乙醇溶液。
2.2稀释剂和试剂
2.2.1PH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液
铜绿假单胞菌的鉴定方法与技术进展
铜绿假单胞菌的鉴定方法与技术进展铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）是一种广泛存在于自然环境中的革兰氏阴性杆菌。
它是一种多重耐药的病原菌，对众多常用抗菌药物表现出不同程度的耐受性。
鉴定铜绿假单胞菌的方法及技术的进展对于临床医学、环境卫生以及食品安全等领域具有重要意义。
一、传统鉴定方法1. 形态学特征：铜绿假单胞菌在常规琼脂平板上生长呈青绿色，细菌呈短杆状或不规则杆状，革兰染色呈阴性，不产生孢子。
2. 生理和生化特性：铜绿假单胞菌可利用较多种类的碳源生长，产生草酸酶、葡萄糖氧化酶等酶类。
此外，它还可产生金黄色脆忻素、绿色芽孢杆菌素等色素。
3. 血清学鉴定：通过血清学反应检测铜绿假单胞菌所产生的O抗原和Vi抗原，结合凝集试验、血凝试验等方法进行鉴定。
二、分子生物学鉴定方法随着分子生物学技术的发展，越来越多的分子生物学方法被用于铜绿假单胞菌的鉴定和检测。
1. 16S rRNA基因测序：16S rRNA基因是细菌共有的基因，在物种鉴定上具有较高的特异性和可溯源性，通过对铜绿假单胞菌菌株进行16S rRNA基因测序，可以快速准确地鉴定其物种。
2. 基因片段PCR：利用铜绿假单胞菌特异基因片段进行PCR扩增，如oprL基因、oprD基因等，通过特异性条带出现可以判断是否为铜绿假单胞菌。
3. 多重PCR技术：多重PCR技术可以通过扩增多个特异基因片段，提高检测的特异性和灵敏度，如gyrB、rpoB、27-kDa等基因片段。
三、质谱法质谱法是近年来快速进行菌种鉴定的一种方法，其应用已得到广泛推广。
主要有飞行时间质谱法、荧光定量PCR结合质谱法、表面增强激光解析电离质谱法等。
这些质谱方法可以通过菌株代谢产物的分子质量进行鉴定。
四、胶体金技术胶体金技术通过标记特异性抗体或引物，利用胶体金颗粒作为信号素，通过胶体溶液在酶或免疫检测中的特异性反应，可以高度敏感地鉴定铜绿假单胞菌。
五、纳米生物传感器纳米生物传感器是一种新兴的鉴定技术，通过利用纳米材料的特殊性质以及生物传感机制来实现铜绿假单胞菌的高灵敏度检测。
食品中铜绿假单胞菌检测
一、概 述
• 铜绿假单胞菌（P. aeruginosa）俗称绿脓杆菌， 因为在代谢过程中产生水溶性的绿色色素，使伤 口与创面呈绿色，故名绿脓杆菌。 • 铜绿假单胞菌能在许多污染物质中存活并繁殖， 生长营养需求不高，善于利用各种碳源和氨化合 物作为氮源，在水、土壤、食品以及医院等环境 广泛存在，甚至在蒸馏水、消毒液也不例外，如 季铵类消毒液，特别是含有一些有机物的液体。
3、生化特性 • 氧化酶和过氧化氢酶阳性。O/F试验为氧化型， 还原硝酸盐为亚硝酸盐，分解乙酰胺产生氨。 98 ％菌株产生水溶性荧光色素。铜绿假单胞菌能 液化明胶，酪蛋白水解，但淀粉不水解。90 ％以 上的菌株产生蓝绿色色素。 • 分解蛋白质能力强，发酵糖类能力较低，氧化分 解葡萄糖，产酸不产气，不分解甘露醇、乳糖及 蔗糖，能液化明胶，分解尿素，不形吲哚，氧化 酶试验阳性，还原硝酸盐产气，靛基质阴性，不 产硫化氢。
三、致病性
• 主要致病物质是内毒素，此外尚有菌毛、荚膜、胞外 酶和外毒素等多种致病因子。可引起局部化脓性炎症 ，也可引起中耳炎、角膜炎、尿道炎、胃肠炎、心内 膜炎 、脓胸，还可引起菌血症、败血症及引起婴儿严 重的流行性腹泻。 • WHO的HACCP评估明确指出铜绿假单胞菌是婴儿瓶装 饮用水的危害指示菌，可造成婴儿腹泻。尤其是抵抗 力较差的老弱病幼孕人群，饮用含铜绿假单胞菌的瓶 装水很可能导致疾病的发生，患者食入103~104个菌体细 胞即可被侵害。铜绿假单胞菌的生长还将增加亚硝酸 盐的含量-参考文献。
产荧光素实验（金氏B培养基）
• 原理：蛋白胨提供氮源，磷酸盐促进荧光素 的产生并抑制绿脓色素的产生，硫酸镁为 荧光素的产生提供必须的阳离子，琼脂是 培养基的凝固。 • 操作：将上述呈红褐色的且氧化酶反应呈阳 性的培养物接种于金氏B培养基上，于 36℃±1℃恒温箱培养24h～5d。 每天需取 出在紫外灯下检查其是否产生荧光性，将 5d内产生荧光的菌落记录为阳性。
铜绿假单胞菌的菌种鉴定
铜绿假单胞菌的菌种鉴定全文共四篇示例，供读者参考第一篇示例：铜绿假单胞菌是一种广泛存在于自然环境中的革兰氏阴性杆菌，也是一种条件致病菌，常见于水和土壤中。
它可以引起多种感染疾病，如呼吸道感染、尿路感染和伤口感染等。
准确鉴定铜绿假单胞菌对于预防和治疗相关感染至关重要。
铜绿假单胞菌的鉴定主要通过形态学、生理学和生化学特征以及分子生物学方法进行。
下面将详细介绍铜绿假单胞菌的菌种鉴定方法。
1. 形态学特征鉴定我们可以通过铜绿假单胞菌在琼脂培养基上的形态学特征来初步鉴定。
铜绿假单胞菌在琼脂培养基上呈不规则的、细长的、呈青绿色的菌落，有时呈褐色或黄色。
在显微镜下观察，可见到细长的革兰氏阴性杆菌。
但仅凭形态学特征鉴定并不够准确，因为有些细菌形态相似，需要进一步进行生理学和生化学检测。
铜绿假单胞菌是一种革兰氏阴性杆菌，不发酵葡萄糖，产生氧化酶和嫌氧酶。
在进行生理学鉴定时，可以利用生理生化分析系统（API 系统）或者其他相关系统进行检测。
通过检测铜绿假单胞菌的碳水化合物利用情况、氧化还原反应及其他生理生化特征，可以更准确地鉴定。
铜绿假单胞菌具有一些特殊的生化学特征，如产生金属蛋白酶、松香酸酶和氢氰酸等。
这些特征可以通过生化学测试来确定。
铜绿假单胞菌还对氧化还原反应有特殊的反应，可以利用氧化还原试剂来进行鉴定。
4. 分子生物学方法鉴定随着分子生物学技术的发展，PCR扩增和16S rRNA测序已成为鉴定铜绿假单胞菌的重要手段。
通过PCR扩增细菌DNA中的特定基因片段，再通过测序比对16S rRNA序列，可以准确识别铜绿假单胞菌。
铜绿假单胞菌的菌种鉴定是一个综合性的过程，需要结合形态学、生理学、生化学和分子生物学等多个方面来确定。
只有准确鉴定了菌种，才能采取针对性的预防和治疗措施。
希望通过本文的介绍，读者对铜绿假单胞菌的菌种鉴定有了更加清晰的认识。
第二篇示例：铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）是一种常见的革兰氏阴性杆菌，广泛存在于自然界中的土壤、水体、植物等环境中。
保健用品微生物检验方法-—铜绿假单胞菌测定
保健用品微生物检验方法 第3部分：铜绿假单胞菌测定警示——使用本标准的人员应有正规实验室工作的实践经验。
本标准并未指出所有可能的安全问题。
使用者有责任采取适当的安全和健康措施，并保证符合国家有关法规规定的条件。
1 范围本标准规定了保健用品中微生物中铜绿假单胞菌的测定方法。
本标准适用于生产和经营的保健用品中的铜绿假单胞菌测定。
2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。
凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。
凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法GB 19489 实验室生物安全通用要求3 术语和定义下列术语和定义适用于本文件。
3.1铜绿假单胞菌 Pseudomonas aeruginosa属于假单胞菌属，为革兰氏阴性杆菌，氧化酶阳性，能产生绿脓菌素。
此外还能液化明胶，还原硝酸盐为亚硝酸盐，在42 ℃±1 ℃条件下能生长。
4 试剂和材料除另有规定外，所有试剂均为分析纯 。
实验用水符合GB/T 6682中二级水的要求。
4.1 灭菌生理盐水:详见附录A.1。
4.2 灭菌液体石蜡:详见附录A.2。
4.3 灭菌吐温-80:详见附录A.3。
4.4 SCDLP:详见附录A.4。
4.5 十六烷基三甲基溴化铵:详见附录A.5。
4.6 乙酰胺:详见附录A.6。
4.7 革兰氏染液:详见附录A.7。
4.8 绿脓菌素测定培养基:详见附录A.8。
4.9 硝酸盐蛋白胨水:详见附录A.9。
4.10 明胶液化培养基:详见附录A.10。
5 仪器和设备5.1 天平：感量0.1 g。
5.2 灭菌刻度吸管:10 mL、5 mL、1 mL。
5.3 高压灭菌器。
5.4 量筒：100 mL、200 mL、2000 mL。
5.5 恒温水浴箱或隔水式恒温箱:44.5 ℃±0.5 ℃。
5.6 无菌锥形瓶：100 mL、200 mL、250 mL、2000 mL。
铜绿假单胞菌方法学验证报告
GB 8538—2016铜绿假单胞菌方法学验证报告一、验证目的验证《食品安全国家标准饮用天然矿泉水检验法GB 8538-2016》-铜绿假单胞菌检验在本实验室的适用性。
二、验证方法样品采样方案依据GB4789.1-2016 《食品微生物学检验总则》的要求进行，本实验样品取三个不同品牌的饮用天然矿泉水的典型样品进行实验，严格按照GB8538-2016进行。
除上述实验程序外，为保证本次验证的科学性和准确性，本次实验添加阳性对照组，对照组由标准菌株铜绿假单胞菌（CMCC(B)10104）接种培养而成，与样品实验程序同时进行。
三、验证设备和试剂1.冰箱：SC-322 青岛海尔电器2.生化培养箱：SPX-150B-Z 上海博迅实业3.电位pH计：PHS-3C+（精确度0.01）成都世纪方舟科技有限公司4.恒温振荡器：SHA-A 江苏金坛环宇科学仪器厂5.菌落计数仪：Scan-500 北京五洲东方科技发展有限公司6.天平：JE-502 上海浦春计量仪器有限公司7.六联不锈钢过滤器北京中兴伟业仪器有限公司8.三用紫外分析仪：ZF-2 上海安亭电子仪器厂培养基和试剂：1.假单胞菌琼脂基础培养基北京陆桥技术股份有限公司2.绿脓菌素测定用培养基北京陆桥技术股份有限公司3.金氏B培养基北京陆桥技术股份有限公司4.营养琼脂北京陆桥技术股份有限公司5.氧化酶试剂北京陆桥技术股份有限公司6.乙酰胺肉汤北京陆桥技术股份有限公司7.三氯甲烷国药集团有限公司8.纳氏试剂北京陆桥技术股份有限公司四、验证环境1.依据《消毒与灭菌效果的评价方法与标准GB15981-1995》定期对高压蒸汽灭菌锅的灭菌效果进行检测评价并记录；2.依据《无菌室消毒灭菌操作规程》定期对对无菌室、生物安全柜进行清洁消毒灭菌并记录；3.依据《实验室质量控制规范食品微生物检测GB/T27405-2008》定期对对无菌室及生物安全柜进行沉降菌检测并记录；4.无菌室检验：详见《XXXX》；五、验证步骤1.操作步骤1. 1水样过滤在100级的洁净工作台进行过滤操作。
铜绿假单胞菌检验方法标准
铜绿假单胞菌检验方法标准铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）是一种广泛存在于环境中的革兰氏阴性细菌。
铜绿假单胞菌可以导致多种感染，特别是对于免疫系统功能较弱的患者，如免疫抑制剂使用者或者长期使用呼吸机的患者。
因此，及时、准确地检验并识别铜绿假单胞菌对于预防和控制感染至关重要。
本文将介绍铜绿假单胞菌的检验方法，并提供一个标准的检验方案，以确保测试的准确性和可靠性。
一、铜绿假单胞菌检验前的准备工作1.1 样本采集从患者身上采集适当的样品，如各种体液（如血液、尿液、脑脊液等）或病灶分泌物。
确保样本获取的无菌操作，以避免外界细菌的污染。
1.2 检验材料准备准备必要的检验材料，包括培养基（如MacConkey琼脂培养基、肉汤培养基等）、培养皿、菌液吸管、无菌显微镜玻片、无菌移液器等。
一、铜绿假单胞菌检验方法2.1 培养方法将适量的样品分别接种于不同种类的培养基上。
通常情况下，MacConkey琼脂培养基和肉汤培养基可以用于初步选择铜绿假单胞菌的生长。
将培养皿置于适当的温度下（通常在35-37摄氏度），保持培养皿适当湿润。
在培养过程中要注意杂菌的干扰，定期观察培养皿上的菌落的形态、颜色等特征。
2.2 生理生化试验经过初步培养，我们可以利用各种生理生化试验来确认菌种的鉴定。
例如，碳水化合物利用试验、氧化酶试验、羟基苯丙酮酸酶试验等。
这些试验可以帮助我们确定菌株是否为铜绿假单胞菌。
2.3 PCR检测使用聚合酶链反应（PCR）技术是一种快速而准确的方法来检测铜绿假单胞菌。
通过选择合适的引物和扩增条件，可以从样品中扩增出铜绿假单胞菌特异性的基因片段。
通过检测PCR反应产物，可以确认铜绿假单胞菌的存在。
2.4 抗生素敏感性试验由于铜绿假单胞菌普遍存在多重耐药性的问题，进行抗生素敏感性试验十分必要。
通过将不同的抗生素添加到含有菌落的培养皿中，观察菌落的生长情况及抗生素对菌落的抑制作用，可以确定铜绿假单胞菌的抗生素敏感性谱。
铜绿假单胞菌检验
1.1 生物学特性
革兰氏阴性细长杆菌，大小为1.5～3.0×0.5μm， 菌体长短不一，呈球杆状或长丝状，成对或成短链 排列。菌体一端有一根鞭毛，运动活跃，无芽孢， 无荚膜。 专性需氧菌。最适温度为35℃，42℃生长，4℃不生 长。（所以一般情况下不能冷藏保存，需在室温下 于阴凉处保存） 可产生多种，主要为绿脓素，是一种水溶性色素， 但是也产生能溶于氯仿、蓝绿色、无荧光的吩嗪类 色素。
平铺时应避免在滤膜和培养基之间夹留着气泡。
2.2.3 检验程序
结果观察：
所有显蓝色或绿色（绿脓色素）的菌落，初步判定 为铜绿假单胞菌。 所有发荧光不产绿脓色素疑似铜绿假单胞菌菌落， 进行乙酰胺肉汤确证性试验。
将其它所有红褐色不发荧光的菌落进行氧化酶测试、 乙酰胺肉汤、金氏B培养基确证性试验。
2. 检验方法
2.1
铜绿假单胞菌检验方法（GB/T 8538）
2.1.1 Water quality -- Detection and enumeration of Pseudomonas aeruginosa -Method by membrane filtration （ ISO 16266:2006 ） 2.1.2 《饮用天然矿泉水检验方法》（GB/T8538－ 2008/ 4.54）铜绿假单胞菌检验
2.2.3 检验程序
确证性试验
（4）乙酰胺肉汤 将新鲜纯培养物接种到装有乙酰胺肉汤的 试管中，36℃±1℃，20h～24h。 向每支试管培养物加入1～2滴钠氏试剂，检 查各试管的产氨情况，如表现出从深黄色到砖红 色的颜色变化，则为阳性结果，否则为阴性。
3. 结果表示
菌落计数公式：N＝P＋F(CF/nF)＋R(CR/nR)
实验五分枝杆菌铜绿假单胞菌
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实验五分枝杆菌铜绿 假单胞菌
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目 录
• 实验目的 • 分枝杆菌铜绿假单胞菌简介 • 实验材料和试剂 • 实验步骤和方法 • 实验结果分析和讨论 • 结论和总结
等原因。
讨论
根据实验结果和解释，我们可以进一步讨论分枝杆菌铜绿假单胞菌的生态习性和致病性。 分枝杆菌铜绿假单胞菌在自然界中广泛分布，能够在多种环境中生存和繁殖。此外，该 菌还具有致病性，可引起人类和动物感染。因此，我们需要进一步研究分枝杆菌铜绿假
单胞菌的生态习性和致病性，以便更好地预防和控制其传播和感染。
分类
分枝杆菌铜绿假单胞菌属于假单 胞菌属，是一种革兰氏阴性杆菌 。
特点
具有多重耐药性，对多种抗生素 不敏感，容易产生抗药性变异。
分枝杆菌铜绿假单胞菌的生物学特性
01
02
03
生长条件
适宜在潮湿环境中生长， 对干燥、阳光和常用消毒 剂抵抗力较弱。
繁殖方式
通过二分裂法进行繁殖， 繁殖速度较慢。
抗原结构
具有O抗原和K抗原，其中 K抗原是主要的毒力因子。
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实验结果与预期结果的比较和分析
铜绿假单胞菌
铜绿假单胞菌(Pseuduinonas aeniginasa)为革兰阴性杆菌，属假单胞菌 属。它在自然界分布甚广，空气、水、土壤中 均有存在，在潮湿处可长期生存，对外环境的 抵抗力比其他菌强，抗干燥的能力也强。含水 分较多的原料、化妆品易受铜绿假单胞菌的污 染。铜绿假单胞菌对人类有致病力，常引起人 体的眼、皮肤等处感染，特别是烧伤、烫伤及 外伤患者感染L铜绿假单胞菌常使病情恶化， 严重时可引起败血病，眼睛受伤感染后可使角 膜溃疡并穿孔，严重可致失明。目前，该菌已 是防止医院感染和药品、化妆品及水等必须严 加控制的重要病原菌之一，我国化妆品卫生标 准规定在化妆品中不得检出铜绿假单胞菌。
可疑菌落（性状、色素） 涂片镜检 氧化酶 菌落特征 绿脓素 气味
初步鉴定
最后鉴定
色素鉴定 生化反应 42℃生长 分型
(二)检测步骤 (1)增菌培养将试样液稀释，无菌操作加人SCULP 液体培养基中，置3790培养24h,进行增菌培养。 如有铜绿假单胞菌生长，培养基表面有一层薄菌膜， 培养液常呈黄绿色或蓝绿色荧光。 (2)分离培养从以上增菌培养液上的薄菌膜挑取培养 物，划线接种于选择培养基—十六烷基三甲基澳化胺 琼脂培养基(或乙酞胺琼脂培养基)平皿上，在37℃ 进行24h分离培养。该类培养基选择性强，大肠杆菌 不能生长，革兰阳性菌生长完全受到抑制。观察培养 基上所形成的菌落，典型铜绿假单胞菌菌落特征是菌 落扁平无定型，向周边扩散或略有蔓延，表而湿润， 菌落呈灰白色，菌落周围培养基常扩张有水溶性色素。 (3)验证试验对所检出的细菌需进一步验证其是否是 铜绿假单胞菌，验证方法有以下六种:
铜绿的菌落分型 典型型 大肠菌样型 粘液型 侏儒型 粗糙型
铜绿假单胞菌检测方法
铜绿假单胞菌检测方法
口 邢文静 河北省保定市食 品检验所
啶 酮酸 也是 实验 室 常 用的抗 生素。 在 林 巴 斯 显 微 镜 Ｃ Ｘ ４ １）：滤 膜 ：直 径 水样作为试验样品 最 新版 的 《 食 品 安全 国家标 准包 装饮 ４ ７ ｍ ｍ， 微孔径为 ０ ． ４ ５ ｍ；紫外灯 ： 样本 Ｃ １按 １ ． ５（ １）方 法 添 加 萘 用水 》 （ Ｇ Ｂ １ ９ ２ ９ ８ — ２ ０ １ ４）中 ，规 定 为 波长应为 ３ ６ ０ ±２ ０ ｎ ｍ ： 冰箱： ０～８。 ｃ 。 啶 酮酸培 养 ，Ｃ ２按 １ ． ５（ ３） 方法 添加 铜 绿 假 单 胞 菌 不 得 检 出 。 随 着 近 期 国 １ ． ４ 操作流程 萘啶酮酸培养 ，结 果见 图 ３ 。从 图 ３检 内 有 关 铜 绿 假 单 胞 菌 污 染 成 品 水 的 报 本次实验 的具体操作流程 ，如 图 １ 测结 果看 到 ，按 １ ． ５（ ３） 方 法添 加萘 道逐 渐增 多 ，已引起 了检 测机 构和 消 所示 。 啶酮酸的效果其检 出率 明显高于按 １ ． ５ 费者的重点关注 ” Ｊ 。 １ ． ５ 比较萘 啶酮酸 的使 用方法 （ １）方 法 添 加 萘 啶 酮 酸 的效 果 。说 明 目前 ，饮 用 水 铜 绿 假 单 胞 菌 检 测 （ １） 萘 啶酮酸按假 单胞菌琼脂 基 水样经不添 加萘啶酮酸 的培养 基培养 ， 技术 方 面，除 微生 物培 养 ，还 有 聚合 培 养 基无 抑茵成 分 ，不能真 正代 表原 Ｃ Ｎ 琼脂 （ Ｃ Ｍ Ｉ Ｏ Ｉ ８ Ａ）说 明书 酶链式反 应 （ Ｐ Ｃ Ｒ） 和 环 介 导 等 温 扩 增 础 培养 基 ／ 使 用， 即培养基先灭菌再添加萘啶酮酸。 样 品的被污 染情 况 ，检验结 果 出现假 技术 （ Ｌ Ａ Ｍ Ｐ）等分 子 方 法。 其 中 ，微 阳性 的概 率显著增 加 】 。 （ ２） 萘 啶酮酸 同假单胞 菌琼脂 基 生物 培养 中需 添加 萘 啶酮酸 作为 补充
桶装水铜绿假单胞菌污染及检测方式
现阶段，人们对于桶装饮用水的需求量不断增加，饮用水安全问题受到了人们的高度关注。
国家标准对桶装水中铜绿假单胞菌作出了不得检出的要求，但是在近几年间有多个地区出现了桶装水中铜绿假单胞菌严重超标的问题。
铜绿假单胞菌属于水源性致病菌,属于条件致病菌的一种，在水、人体皮肤、空气、呼吸道或者肠道等空间内均可存活，免疫力低的人群误饮受其污染的水以后，有较大的可能感染相关疾病。
1 桶装水铜绿假单胞菌出现的主要原因1.1 水源水污染因素因为水源水污染是导致桶装水污染的主要诱因之一，桶装水的主要原料为自来水、河流水、湖泊水或者泉水。
近几年，我国经济市场快速发展，未经处理达标的现代工业废水或者生活污水的排放会对水源水造成污染，如果水源水在受到污染并且没有通过后续清除流程，则很可能会造成连续污染现象。
例如：部分桶装矿泉水在其生产期间为了保证水体中的矿物质含量，不会使用精滤装置进行处理，就给了铜绿假单胞菌的污染机会[1]。
1.2 卫生意识不强，生产设备消毒不彻底部分企业设备陈旧、生产工艺简陋，对于铜绿假单胞菌的控制力度不足，水源水存在污染的可能性很高。
因为用于生产的主要仪器设备有很多接口，在正式生产期间容易出现交叉污染的情况，此时病菌会进入到最终产品中。
因为铜绿假单胞菌能够黏附于管道、贮水池或者增压泵中，并在其中繁殖，通过简单的冲洗不能彻底清除。
与此同时，如果正在使用的生产设备存在未经定期消毒、消毒不彻底的情况，也有可能造成铜绿假单胞菌污染，其中，消毒剂不合格造成污染的可能性也很高。
在上述内容之外，采用传统消毒方式，利用臭氧浓度低或者短时间冲洗并不能达到完全杀灭的效果，如此周而复始，水源水污染程度会不断加剧[2]。
1.3 包装材料的消毒清洗不到位对桶装清洁以及消毒处理不到位被视为成品水受到污染的最主要原因。
时下多数桶装水产品的制造商存在回收水桶的情况，而水桶自身的特殊结构非常不利于消毒工作的展开，同时消毒效果也会因此受到影响。
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铜绿假单胞菌的检验流程
铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）的检验流程可以包括以下步骤：
1. 样品采集：从疑似感染源（如伤口、尿液、呼吸道分泌物等）采集样品。
确保采集过程无菌，并采用适当的采样器具和技术。
2. 培养基选择：选择适合于铜绿假单胞菌生长的培养基，如血琼脂、MacConkey琼脂等。
根据需要，还可以选择特殊的培养基，如铜绿假单胞菌选择性培养基。
3. 培养：将采集的样品在选择的培养基上进行斑点接种、刷涂或点菌法接种。
根据不同的培养基和环境条件，培养时间一般为24-48小时。
4. 形态观察：观察培养基上的菌落形态特征。
铜绿假单胞菌的菌落通常呈绿色或蓝绿色，具有金属光泽。
5. 鉴定测试：进行铜绿假单胞菌的鉴定测试，以确认菌株的身份。
常见的鉴定测试包括：
•革兰氏染色：观察菌株的革兰氏染色特征。
•氧化/还原测试：进行氧化/还原测试，如氧化酮酸试验等。
•水解反应：检测菌株的葡萄糖、麦芽糖等的水解反应。
•生化试验：进行生化试验，如氧化酶试验、产芽孢试验等。
6. 进一步确认：根据鉴定测试的结果，可以进行进一步的确认。
例如，可以使用API系统或分子生物学方法（如PCR）进行确认。
请注意，以上是一般的检验流程，具体的步骤和方法可能会因实验室的设备、方法选择和要求而有所不同。
在进行任何检验之前，建议遵循实验室的操作规范和相应的检验标准。
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