中草药联合低强度氦氖激光对兔反流性食管炎模型LES组织及血浆中NO、VIP、SP、CGRP和NPY的影响_裘生梁

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华中医药学刊
中草药联合低强度氦-氖激光对兔反流性食管炎模型LES 组织及血浆中NO 、VIP 、SP 、CGRP 和NPY 的影响
裘生梁1,亓慧博2,王佳薇
3
(1.浙江中医药大学附属第一医院,浙江杭州310006;2.莱芜市中医院,山东莱芜271100;3.浙江中医药大学,浙江杭州310053)
摘要:目的:探讨中草药联合低强度helium -neon 激光对兔反流性食管炎模型食管下括约肌组织及血浆中
NO 、VIP 、SP 、CGRP 与NPY 含量的影响。

方法:20只家兔随机分成中草药联合激光组和空白对照组,采用酸灌注法建立兔反流性食管炎模型,
检测血浆及食管组织中NO 、VIP 、SP 、CGRP 与NPY 含量。

结果:中草药联合激光组家兔食管组织NO 含量显著低于空白对照组(P <0.05),血浆及食管组织中VIP 、CGRP 含量显著低于空白对照组,而SP 、
NPY 含量显著高于空白对照组。

结论:中草药联合低强度氦-氖激光可能通过降低组织中NO 含量,降低组织及血浆中VIP 、CGRP 的含量,提高组织及血浆中SP 、NPY 的含量,来治疗反流性食管炎。

关键词:反流性食管炎;中草药;低强度氦-氖激光;胃肠激素类
中图分类号:R285.5文献标志码:A 文章编号:1673-7717(2013)03-0571-03
Effect on the Contents of NO VIP SP CGRP and NPY in the Plasma and
Esophageal Tissue of the Rabbit Model of Reflux Esophagitis by the Treatment of Chinese Herbal Medicine Combined with Low Intensity Helium -neon Laser
QIU Shengliang 1,QI Huibo 2,WANG Jiawei 3
(1.First Affiliated Hospital of Zhejiang Chinese Medical University ,Hangzhou 310006,Zhejiang ,China ;
2.Laiwu Hospital of Traditional Chinese Medicine ,Laiwu 271100,Shandong ,China ;
3.Zhejiang Chinese Medical University ,Hangzhou 310053,Zhejiang ,China )
Abstract :Objective :To ingestivate the effect on the contents of NO ,VIP ,SP ,CGRP and NPY in the plasma and e-sophageal tissue on the rabbit model of reflux esophagitis by the treatment with Jiangni decoction combined with low inten-sity helium -neon laser.Methods :Twenty rabbits were randomly divided into the blank control group and Chinese herbal medicine combined with laser group.Then a rabbit model of reflux esophagitis was made with infusing acid.Finally ,the contents of NO ,VIP ,SP ,CGRP and NPY in the plasma and esophageal tissue of rabbits were detected.Result :The con-tent of NO in rabbit esophageal tissues in the treatment group was significantly lower than that in the blank control group (P <0.05).The contents of VIP and CGRP in rabbit esophageal tissues and plasma in the treatment group were signifi-cantly lower than that in the blank control group ,while the contents of SP and NPY were significantly higher than that in the blank control group.Conclusion :The mechanism of Chinese herbal medicine combined with low -intensity helium -neon laser treating reflux esophagitis may be related to reducing the content of NO in tissues and contents of VIP and CGRP in tissues and plasma ,
and increasing the contents of SP and NPY in tissues and plasma.Key words :reflux esophagitis ;Chinese herbal medicine ;low -intensity helium -neon laser ;gastrointestinal hor-mones
收稿日期:2012-10-24
基金项目:浙江省研究生创新科研项目(YK2010075);浙江省中医
药科学研究基金计划项目(2011ZB048)
作者简介:裘生梁(1978-),男,浙江杭州人,讲师,硕士,研究方
向:中西医临床医学内科。

反流性食管炎是指由于胃和(或)十二指肠内容物反
流入食管,引起食管黏膜损伤,造成食管黏膜的炎症、糜烂、
甚至溃疡的一种疾病,其确切的发病机制目前尚不明确,一
过性下食管括约肌松弛(transit lower esophageal sphincter relaxation ,tLESR )是目前公认的胃食管反流的最主要机制,下食管括约肌压力低下对其发病也有重要作用。

近年研究表明胃肠激素对食管运动有调节作用,在反流性食管炎的
发生、
发展中起着重要作用。

胃肠激素血管活性肠肽(VIP )、胆囊收缩素、胃泌素(GAS )、P 物质(SP )、蛙皮素、生长抑素、阿片肤、降钙素基因相关肽(CGRP )、胃动素
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中华中医药
学刊
(MLT)、一氧化氮(NO)、一氧化碳(CO)与反流性食管炎发
病密切相关[1]。

本实验通过观察中草药联合低强度helium-neon激光
对兔反流性食管炎模型食管下括约肌组织及血浆中NO、
VIP、SP、CGRP与NPY含量的影响,以探讨其治疗反流性
食管炎的可能机制。

1材料与方法
1.1实验材料
1.1.1实验动物清洁级健康普通家兔20只,10周龄左
右,体重(2.0ʃ0.5)kg,雌雄各半。

由浙江中医药大学动
物实验中心提供。

委托浙江中医药大学实验动物中心饲
养,Ⅱ级动物室饲养,饲养期间给予啮齿类动物标准颗粒饲
料及自由饮水。

将其随机分为中草药联合激光治疗组和空
白对照组,每组10只。

1.1.2主要实验试剂与仪器一氧化氮代谢产物亚硝酸
盐试剂盒(南京建成生物工程研究所);血管活性肠肽、P物
质、降钙基因相关肽、神经肽Y放免试剂盒(北京华英生物
技术研究所);r-911全自动放免计数仪(中国科技大学实
业总公司生产);LJL40-HA氦氖激光多功能治疗仪(上海
激光技术研究)。

1.1.3中草药水煎剂组成:以旋覆代赭汤为基础加减而
成,由姜半夏9g、炒黄芩9g,枳实9g,炒陈皮9g,旋覆花9
g,代赭石15g,海螵蛸15g组成,其方以化痰降逆、益气和
胃为主,随证加减,疗效确切,为浙江中医药大学附属第一
医院消化科治疗反流性食管炎的有效验方(称之为“降逆
汤”)。

此方旋复花、代赭石、姜半夏为旋覆代赭汤之药,取
其燥湿化痰,降逆止呕;半夏、黄芩,辛开苦降,脾胃升降得
宜,故痞消呕止痰散矣;再加之枳实破气消热郁,陈皮化痰
降气,海螵蛸收湿制酸,共同取得良好疗效。

其中旋覆花包
煎,代赭石先煎15 30min。

煎煮前先将中药冷水中浸泡
0.5h,将各药加水煎煮2次,第1次水开后煎煮0.5h,第
二次水开后煎煮10min,两次混合浓缩,煎成含生药为1g/
mL的水煎剂装瓶,置4ħ冰箱备用。

1.2实验方法
1.2.1动物造模造模参照韩勇[2]的造模方法:动物于造
模前禁食12h,用戊巴比妥耳缘静脉注射麻醉。

插入胃管
至贲门LES上约3 5cm处,用0.1mol/L的HCl以1mL/
min的速度滴注30min,以此方法连续灌注4d。

1.2.2干预措施中草药联合激光组:采用前期实验所筛
选的最佳低强度helium-neon激光照射时间,采用连续波,
输出波长630nm,1次/d,照射时间30min/次,同时予中草
药水煎剂灌胃给药,2次/d,10mL/次(用药量根据体表面
积等效剂量换算比率计算);空白对照组:给予等量生理盐
水及光纤假照射处理,共干预治疗5d。

于治疗结束后1d
处死全部动物,做相关检查。

1.2.3指标检测组织中NO的含量测定采用比色法,按
试剂盒说明操作。

组织及血浆中VIP、SP、CGRP、NPY含量
的测定采用放免法,按试剂盒说明操作。

1.2.4统计分析各组数据以均数ʃ标准差(珋xʃs)表示,
采用独立样本t检验,并用SPSS18.0统计软件进行数据统
计,显著性水准以P<0.05为有统计学意义。

2结果
2.1动物死亡情况
实验结束时,共死亡4只家兔,其中中草药联合激光组
死亡2只,空白对照组死亡2只。

其中2只因麻醉抑制呼
吸死亡,1只因误插入气管致肺水肿死亡,1只因插光纤时
穿透食管导致肺出血死亡。

2.2病理学观察
动物模型制备以后,取家兔食管黏膜组织做病理分析
及空白对照组均可见食管黏膜鳞状上皮细胞水肿,基底层
细胞增生,黏膜固有层乳头向表面延伸,成纤维细胞增多,
上皮层可见大量炎性细胞浸润,部分可见黏膜糜烂。

治疗
组与空白组比较,黏膜完整,未见糜烂,上皮层炎性细胞浸
润较空白组减少,鳞状上皮未见明显细胞病变。

空白对照组家兔电子显微镜观察可见,下食管括约肌
组织肌丝紊乱,部分溶解,线粒体明显肿胀,嵴紊乱,断裂溶
解,而降逆汤联合激光治疗组可见肌丝紊乱,未见明显溶
解,线粒体数量明显增多,肿胀不明显,嵴紊乱而未见溶解。

见图1 2。

图1空白组电镜图(12K倍

图2治疗组电镜图(12K倍)
2.3组织中NO的水平
结果见表1。

2.4组织及血浆中VIP、SP的水平
结果见表2。

2.5组织及血浆中CGRP、NPY的水平
结果见表3。

275

华中医药学刊
表1
各组家兔食管组织匀浆NO 含量(珋x
ʃs )组别
样本量NO (μmol /L )治疗组816.876ʃ2.197*对照组
8
21.670ʃ5.279
注:与对照组比较,
*P <0.05。

表2
各组家兔VIP 、
SP 含量(珋x ʃs )组别n VIP 含量(pg/mL )血浆
组织
SP 含量(pg/mL )血浆
组织
治疗组820.679ʃ7.328*13.777ʃ0.951*95.122ʃ4.616△37.919ʃ3.054*对照组
8
28.213ʃ2.659
14.752ʃ0.662
86.130ʃ6.84934.946ʃ2.026
注:与对照组比较,*P <0.05,△P <0.01。

表3
各组家兔CGRP 、
NPY 含量(珋x ʃs )组别n CGRP 含量(ng/mL )
血浆组织
NPY 含量(pg/mL )血浆
组织
治疗组845.974ʃ10.414△34.214ʃ5.685△152.136ʃ11.303*68.295ʃ7.058*对照组
8
80.647ʃ14.177
47.270ʃ9.365
137.500ʃ13.954
59.162ʃ8.545
注:与对照组比较,*P <0.05,△P <0.01。

3讨论
食管下段的环形平滑肌受非肾上腺能非胆碱能(non -
adrenergic non -cholinergic ,NANC )神经支配,而在LES 的
神经支配中,抑制性运动神经元起主要作用[3]。

NO 与VIP 为NANC 神经的主要抑制性肽能神经递质。

NO 主要以神经分泌方式在局部起作用[4]

NANC 神经受到刺激,NO 神经元直接产生NO 并迅速弥散至LES 及食管远端平滑肌,
使LES 基础压降低及LES 松弛,同时可使食管平滑肌蠕动
障碍[5]。

研究表明,NO 能启动VIP 的释放,并增强其对LES 的舒张作用。

VIP 与其特异性受体结合使肌细胞Ca 2+内流,使NOS 中的Ca
2+
依赖性的钙调蛋白活化,从而使NO 合成增加,从
而迅速弥散至LES 及食管远端平滑肌,
使LES 基础压降低及LES 松弛;而NO 的产生可被VIP 拮抗剂抑制,
VIP 又能被NOS 抑制剂L -NNA 强烈抑制,
说明VIP 的释放部分依赖于NO 的产量,提示NO 与VIP 释放之间相互影响和相互
作用[6]。

降钙素基因相关肽(calcitonin gene -related peptide ,CGRP )广泛分布于中枢及外周神经系统,在肠道主要分布于肠道神经系统,CGRP 免疫反应性在食管黏膜下神经丛、肌间神经丛、平滑肌、横纹肌广泛存在,其直接作用于LES ,使其松弛,它对LES 的抑制作用比降钙素强300倍,比VIP 强400倍。

从本实验结果可以看出,降逆汤联合低强度氦氖激光可以显著降低家兔食管组织中NO 含量及血浆和组织中VIP 、CGRP 含量,这可能是其治疗反流性食管炎的机制。

P 物质(Substance P ,SP )亦属肽能神经元,是调节运动功能的兴奋性递质。

其胞体在于食管神经丛内,发出纤维到达食管壁各层,其兴奋时可引起LES 收缩。

SP 神经元减少或功能降低,导致LES 运动功能障碍。

RE 患者LES 局部组织
[7]
中和血浆
[8]
中的VIP 含量显著高于轻度RE 患者
及正常人,
而SP 明显低于后者,并且VIP 的含量越高,SP 的含量越低,LESP 就越低,造成的胃食管反流和食管黏膜损害就越严重。

神经肽Y (neusopeptide Y ,
NPY )是内源性缩血管活性肽之一,也是体内刺激食欲、增强营养物质吸收的重要物
质。

研究发现[9]

食管平滑肌部分有多神经纤维束为NPY 和VIP 双反应性,即二者共存于神经纤维中。

而动物肠黏
膜实验发现NPY 可能是通过减少腺苷-3’
,5’-环化一磷酸(cAMP )的积聚抑制VIP 的分泌[10]。

从本实验结果可以看出,中草药联合低强度氦氖激光
可以显著提高家兔食管组织及血浆SP 、NPY 的含量,这可能对反流性食管炎的治疗也起到了一定作用。

线粒体的主要功能是进行氧化磷酸化,合成ATP ,为细胞生命活动提供能量。

我们知道在心肌、平滑肌及
骨骼肌因功能增强而细胞肥大时,
可见细胞内线粒体数目增加,体积增大。

本实验发现,经中草药联合低强度
氦氖激光治疗后,线粒体数量增加,病变明显减轻,提示其可能通过减轻线粒体病变,增强线粒体供能来改善食管运动功能。

综上所述,由于NO 、
VIP 、SP 、CGRP 、NPY 之间相互联系,
相互影响,故中草药联合低强度氦-氖激光治疗反流性食管炎的机制可能为:协调NO 、VIP 、SP 、CGRP 、NPY 的分泌,通过提高食管LES 组织中NO 的含量及血浆和组织中VIP 、CGRP 的含量,降低组织与血浆中SP 、NPY 的含量,共同起到提高LES 基础压力,减少tLESR ,以改善食管的运动功能,提高食管的抗反流机制。

参考文献
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