实验四血凝和血凝抑制试验
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2. 鸡红细胞：采集健康鸡血液,以阿氏液抗凝,以生 理盐水洗涤3~5次,将血浆、白细胞等充分洗去,用 生理盐水配置成1%红细胞悬液使用.
3. 0.85%生理盐水. 4. 被检血清,采自被检鸡的血清.
四、操作步骤 〔一血凝试验〔HA
1. 在血凝板第一排的1~12孔加入50μl生理盐水. 2. 在第1孔中加入50μl病毒抗原,反复吸取混匀后
〔Hemagglutination and Hemagglutination
Inhibition, HA and HI
动物病原学实验之六
一、实验目的
掌握血凝和血凝抑制试验的原理,以及使 用该试验测定血清抗体水平的操作步骤和结 果判定方法.
二、实验原理
〔一血凝试验〔HA
➢ 有些病毒能够促使某些动物〔如鸡、鹅、豚鼠、 绵羊和人的红细胞发生凝集,这就是红细胞凝集 现象,称做血凝试验.
以50%的红细胞发生凝集的病毒悬液的最高稀释度 作为血凝价的终点,即一个血凝单位.
〔二血凝抑制试验〔HI
1. 在血凝板的1~12孔加入50μl生理盐水,最后一孔加 100μl.
2. 第1孔加入待检血清50μl,混匀后吸50μl至第2孔,倍比 稀释直至第10孔,混匀后弃50μl.
3. 从1~11孔,每孔加稀释好的50μl 4个血凝单位的病毒悬 液.
放映结束 感谢各位的批评指导！
谢 谢！
让我们共同进步
➢ 象各种脑炎病毒、口蹄疫病毒等,凝集红 细胞的条件很严格,对红细胞的种类有很 严格的选择,同时还要掌握反应的pH和温 度等.
〔二血凝抑制试验〔HI
➢ 当病毒悬液中加入特异性抗体时,这种红 细胞凝集的现象就被抑制,称做红细胞凝 集抑制试验,也叫血凝抑制试验.
HI试验的原理图
三、试验材料
1. 鸡新城疫病毒：鸡新城疫弱毒株〔Lasota接种鸡 胚、收获尿囊液制备.
吸50μl到第2孔,如此倍比稀释直到第10孔,混 匀后弃50μl；最后两孔〔11、12为细胞对照.
Байду номын сангаас
3. 将1%的红细胞轻轻摇动混匀,在1~12孔中每 孔加入50μl.
4. 手工震荡,37℃静置30min后观察结果. 5. 结果观察〔血凝价是1：？.
孔号
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11（C） 12（C）
➢ 病毒凝集红细胞是一种较为普遍的现象,可以作 为病毒鉴定的一个指标.
HA试验的原理图
病毒凝集红细胞可以分为3种类型
➢ 病毒血凝素与完整成熟的病毒颗粒结合较 密切,不经特殊化学方法处理不能分开.例 如流感、腮腺炎、新城疫等病毒,病毒游离 下来后,红细胞不能再次被凝集.
➢ 病毒血凝素与完整成熟的病毒颗粒易于分 开,血凝素呈游离状态,例如天花、牛痘、 鼠痘等病毒,它们的凝集现象是可逆的.
生理盐水（μl） 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50
50
病毒悬液（μl） 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 弃/ 50μl
/
1%红细胞（μl） 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50
50
1:21 1:22 1:23 1:24 1:25 1:26 1: 27 1: 28 1: 29 1: 210 C C
如果血凝价为1:28,那么4个血凝单位就是1:26
4. 将1%的红细胞轻轻摇动混匀,在1~12孔中每 孔加入50μl.
5. 手工震荡,在37℃静置30min后观察结果. 6. 结果判定〔血凝抑制价是1：？,被检血清为
阴/阳性.
HA试验 HI试验
细胞对照
HA HI
五、结果判定
血凝价是1：？； 血凝抑制价是1：？； 被检血清为阴/阳性.
3. 0.85%生理盐水. 4. 被检血清,采自被检鸡的血清.
四、操作步骤 〔一血凝试验〔HA
1. 在血凝板第一排的1~12孔加入50μl生理盐水. 2. 在第1孔中加入50μl病毒抗原,反复吸取混匀后
〔Hemagglutination and Hemagglutination
Inhibition, HA and HI
动物病原学实验之六
一、实验目的
掌握血凝和血凝抑制试验的原理,以及使 用该试验测定血清抗体水平的操作步骤和结 果判定方法.
二、实验原理
〔一血凝试验〔HA
➢ 有些病毒能够促使某些动物〔如鸡、鹅、豚鼠、 绵羊和人的红细胞发生凝集,这就是红细胞凝集 现象,称做血凝试验.
以50%的红细胞发生凝集的病毒悬液的最高稀释度 作为血凝价的终点,即一个血凝单位.
〔二血凝抑制试验〔HI
1. 在血凝板的1~12孔加入50μl生理盐水,最后一孔加 100μl.
2. 第1孔加入待检血清50μl,混匀后吸50μl至第2孔,倍比 稀释直至第10孔,混匀后弃50μl.
3. 从1~11孔,每孔加稀释好的50μl 4个血凝单位的病毒悬 液.
放映结束 感谢各位的批评指导！
谢 谢！
让我们共同进步
➢ 象各种脑炎病毒、口蹄疫病毒等,凝集红 细胞的条件很严格,对红细胞的种类有很 严格的选择,同时还要掌握反应的pH和温 度等.
〔二血凝抑制试验〔HI
➢ 当病毒悬液中加入特异性抗体时,这种红 细胞凝集的现象就被抑制,称做红细胞凝 集抑制试验,也叫血凝抑制试验.
HI试验的原理图
三、试验材料
1. 鸡新城疫病毒：鸡新城疫弱毒株〔Lasota接种鸡 胚、收获尿囊液制备.
吸50μl到第2孔,如此倍比稀释直到第10孔,混 匀后弃50μl；最后两孔〔11、12为细胞对照.
Байду номын сангаас
3. 将1%的红细胞轻轻摇动混匀,在1~12孔中每 孔加入50μl.
4. 手工震荡,37℃静置30min后观察结果. 5. 结果观察〔血凝价是1：？.
孔号
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11（C） 12（C）
➢ 病毒凝集红细胞是一种较为普遍的现象,可以作 为病毒鉴定的一个指标.
HA试验的原理图
病毒凝集红细胞可以分为3种类型
➢ 病毒血凝素与完整成熟的病毒颗粒结合较 密切,不经特殊化学方法处理不能分开.例 如流感、腮腺炎、新城疫等病毒,病毒游离 下来后,红细胞不能再次被凝集.
➢ 病毒血凝素与完整成熟的病毒颗粒易于分 开,血凝素呈游离状态,例如天花、牛痘、 鼠痘等病毒,它们的凝集现象是可逆的.
生理盐水（μl） 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50
50
病毒悬液（μl） 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 弃/ 50μl
/
1%红细胞（μl） 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50
50
1:21 1:22 1:23 1:24 1:25 1:26 1: 27 1: 28 1: 29 1: 210 C C
如果血凝价为1:28,那么4个血凝单位就是1:26
4. 将1%的红细胞轻轻摇动混匀,在1~12孔中每 孔加入50μl.
5. 手工震荡,在37℃静置30min后观察结果. 6. 结果判定〔血凝抑制价是1：？,被检血清为
阴/阳性.
HA试验 HI试验
细胞对照
HA HI
五、结果判定
血凝价是1：？； 血凝抑制价是1：？； 被检血清为阴/阳性.