罗格列酮对脓毒症大鼠急性肾损伤的保护作用要点

ｈ［（４．０７±０．１６）
ｖｓ（４．６２±０．０８）；Ｊｐｌ２＝０．０１，Ｐ２４＝０．００６］．Ｔｈｅ ｔｈａｔ ｏｆ ｇｒｏｕｐ Ｓｈａｍ ａｔ ６，１２ ａｎｄ ２４ ｈ［（４．６２±０．０８）ｖｓ（１．３０±０．０６）；Ｐ６＝０．００，尸１２＝０．００，Ｐ２４＝ ０．００］．Ｔｈｅ ＭＰＯ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｇｒｏｕｐ ＣＬＰ＋ＲＯＳｌ ｗａｓ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｈｉｇｈｅｒ ｔｈａｎ ｔｈａｔ ｏｆ ｇｒｏｕｐ Ｓｈａｍ＋ＲＯＳＩ ａｔ ６，１２ ａｎｄ ２４ ｈ［（４．０７±０．１６）ｖｓ（１．２７±０．０６）；Ｐ６＝０．００，Ｐｌ ２＝０．００，Ｐ２４＝０．００］．Ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ
ＣＬＰ＋ＲＯＳＩ组与
Ｓｈａｍ＋ＲＯＳＩ组之间肾脏组织ＭＰＯ浓度比较有升高［（４．０７±０．１６）比（１．２７土０．０６）；Ｐ６＝０．００，Ｐ。２＝ ０．００，Ｐ，。＝０．００］。与Ｓｈａｍ组和Ｓｈａｍ＋ＲＯＳＩ组相比，ＣＬＰ＋ＲＯＳＩ组、ＣＬＰ组均出现大鼠脓毒症症状，
以及器官功能障碍，而ＣＬＰ＋ＲＯＳＩ组的大鼠症状及器官功能障碍程度较ＣＬＰ组减轻。ＣＬＰ组ＰＰＡ脚
ｇ以补充手术中的体液丢失。术后置笼
内活动，不禁饮食。 ３．标本采集：各组分别在术后０、６、１２、２４ ｈ各
术有限公司）；３％戊巴比妥钠；爱惜康（黑色）编织 非吸收性缝线；髓过氧化物酶（ＭＰＯ）测试盒（货号： Ａ０４４，由南京建成生物工程研究所提供）；凯基全蛋
白提取、蛋白定量试剂盒（由南京凯基生物科技发
Ｃａｒｅ Ｕｎｉｔ，ｆ＾ｅ
Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ
ａｕｔｈｏｒ：沌Ｊｉａｎ，ＥｍａｉＺ：ｙｕｊｉａｎ＠ｍｅｄｍａｉｔ
Ｔｏ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ
ｃｏｍ．ｃｎ
ｏｎ
【Ａｂｓｔｒａｃｔ】０ｂｊｅｃｔｉｖｅ
ｒａｔｓ ｉｎ
ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｒｏｓｉｇｌｉｔａｚｏｎｅ
ｔｈｅ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｏｆ ｔｈｅ ｋｉｄｎｅｙ ｏｆ
０，６．１ ２．２４ ｈ ｓｔａｉｎｉｎｇ
ｗａｓ
ａｆｔｅｒ ＣＬＰ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ
ｔｏ
ｉｎ
ａｐｐｌｉｅｄ ｋｉｄｎｅｙ ｔｉｓｓｕｅｓ．Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｌｉｇａｎｄ ｏｆ ｐｅｒｏｘｉｓｏｍｅ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｏｒｓ－ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｒｅｃｅｐｔｏｒ＾ｙ（ＰＰＡＲ７），ａｎｄ Ｂ— ｃｅｌｌ ｌｙｍｐｈｏｍａ一２（Ｂｃｌ－２）ｗｅｒｅ ａｌｓｏ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ ｂｙ Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ ａｎａｌｙｓｉｓ．Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｔｈｅ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ＭＰＯ
ａｃｔｉｖｉｔｙ
ｄｅｔｅｃｔ ｒｅｎａｌ ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ ｈｉｓｔｏｌｏｇｙ
ｅａｃｈ ｇｒｏｕｐ．Ｔｈｅ ｇｅｎｅｒａｌ ｓｔａｔｕｓ ｏｆ ｒａｔｓ ｗａｓ ｏｂｓｅｒｖｅｄ ａｎｄ Ｈ＆Ｅ ｃｈａｎｇｅｓ．Ｍｙｅｌｏｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ（ＭＰＯ）ｗａｓ ｍｅａｓｕｒｅｄ ｉｎ
ｏｆ ｇｒｏｕｐ ＣＬＰ＋ＲＯＳｌ ｗａｓ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｌｏｗｅｒ ｔｈａｎ ｔｈａｔ ｏｆ ｇｒｏｕｐ ＣＬＰ ａｔ １２ ｈ ａｎｄ ２４
・２３１１
．重症医学．
罗格列酮对脓毒症大鼠急性 肾损伤的保护作用
邓佳 于健
【摘要】
目的探讨罗格列酮（ＲＯＳＩ）在脓毒症急性肾损伤中的作用。方法选择９６只清洁
级ｓＤ雄性大鼠，采用盲肠结扎穿刺术（ＣＬＰ）制作脓毒症大鼠急性肾损伤模型，随机分为盲肠结扎穿 刺加ＲＯＳＩ给药组（ＣＬＰ＋ＲＯＳＩ组）、盲肠结扎穿刺组（ＣＬＰ组）、假手术加ＲＯＳＩ给药组（Ｓｈａｍ＋ＲＯＳＩ 组）、假手术组（Ｓｈａｍ组），各组分别在术后０、６、１２、２４ ｈ各取６只大鼠观察各组大鼠一般状态并应用 Ｈ＆Ｅ染色检测肾脏组织病理改变，检测肾脏组织的髓过氧化物酶活性（ＭＰＯ），免疫印迹测定过氧化 物酶增殖激活受体（ＰＰＡＲｓ）及Ｂ淋巴细胞瘤．２基因（Ｂｃｌ一２）凋亡相关蛋白在肾脏组织中的表达。 结果１２、２４
ｇｒｏｕｐ ｏｒｇａｎ
ＭＰＯ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｇｒｏｕｐ ＣＬＰ ｗａｓ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｈｉｇｈｅｒ ｔｈａｎ
Ｓｈａｍ ａｎｄ ｇｒｏｕｐ Ｓｈａｍ＋ＲＯＳＩ．ｉｎ ｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎ
ｗｅｒｅ
ｒａｔｓ
ｏｆ ｇｒｏｕｐ ＣＬＰ ａｎｄ ｇｒｏｕｐ ＣＬＰ＋ＲＯＳＩ ｔｈｅ ｓｙｍｐｔｏｍｓ ｏｆ ｓｅｐｓｉｓ ａｎｄ
ｏｂｓｅｒｖｅｄ．Ｔｈｅ ｓｙｍｐｔｏｍｓ ｏｆ ｓｅｐｓｉｓ ａｎｄ ｏｒｇａｎ ｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎ ｏｆ ｇｒｏｕｐ ＣＬＰ＋ＲＯＳｌ ｗｅｒｅ
ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｒｅｄｕｃｅｄ ｔｈａｎ ｔｈａｔ ｏｆ ｇｒｏｕｐ ＣＬＰ．Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＰＰＡＲ７ ａｎｄ Ｂｃｌ一２ ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ ｂｙ Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ ａｎａｌｙｓｉｓ，ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＰＰＡＲ７ ａｎｄ Ｂｃｌ一２ ｏｆ ｇｒｏｕｐ ＣＬＰ＋ＲＯＳｌ ｗａｓ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｌｏｗｅｒ ｔｈａｎ ｔｈａｔ ｏｆ ＣＬＰ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ Ｒｏｓｉｇｌｉｔａｚｏｎｅ，ａｓ ｔｈｅ ｌｉｇａｎｄ ｏｆ ＰＰＡＲ３，，ｒｅｄｕｃｅｄ ｔｈｅ ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｉｎ ｓｅｐｓｉｓ，ｄｅｃｒｅａｓｅｄ ｔｈｅ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｏｆ ｋｉｄｎｅｙ ｃｅｌｌ，ｒｅｄｕｃｅｄ ｋｉｄｎｅｙ ｉｎｊｕｒｙ，ａｎｄ ｐｒｏｔｅｃｔｅｄ ａｃｕｔｅ ｋｉｄｎｅｙ ｉｎｊｕｒｙ ｉｎ
ｉｎｊｕｒｙ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ｐｕｎｃｔｕｒｅ（ＣＬＰ）．９６ ｌｉｇａｔｉｏｎ ｐｕｎｃｔｕｒｅ ａｎｄ ｒｏｓｉｇｌｉｔａｚｏｎｅ ｇｒｏｕｐ（ｇｒｏｕｐ ＣＬＰ＋ＲＯＳＩ），ｃｅｃａｌ ｌｉｇａｔｉｏｎ ｐｕｎｃｔｕｒｅ ｇｒｏｕｐ（ｇｒｏｕｐ ＣＬＰ）， Ｓｈａｍ ａｎｄ ｒｏｓｉｇｌｉｔａｚｏｎｅ ｇｒｏｕｐ（ｇｒｏｕｐ Ｓｈａｍ＋ＲＯＳＩ），ｓｈａｍ ｇｒｏｕｐ（ｇｒｏｕｐ Ｓｈａｍ）．Ｓｉｘ ｒａｔｓ ｗｅｒｅ ｓａｃｒｉｆｉｃｅｄ ａｔ
公司）；５８１０台式高速大容量离心机（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ艾 本德）；Ｂｕｌｌｅｔ Ｂｌｅｎｄｅｒ组织细胞破碎仪（美国Ｎｅｘｔ
脏，冰生理盐水中清洗，右侧肾上极置于１０％中性 甲醛溶液中固定以备病理检测，余。肾脏按扇形切开 分装置于液氮中速冻后保存于一８０ ｃＣ冰箱中。 ４．标本检测：肾脏髓ＭＰＯ活性用ＭＰＯ测试盒
１．动物：９６只清洁级ＳＤ（Ｓｐｒａｇｕｅ—Ｄａｗｌｅｙ）雄性 大鼠（由大连医科大学实验动物中心提供），每只体
重１８０—２２０ ｇ。实验室内饲养，室温２０—２２℃，空 气湿度５０％～７０％。每６只大鼠置于１个鼠笼 （４７５
ｍｍ×３００ ｍＥ×２００
ｍｍ），摄取饲料由大连医
科大学实验动物中心提供，自由饮水，按照自然时间 作息。 ２．试剂：罗格列酮碱（ＲＯＳＩ）（大连美仑生物技
法制备脓毒症模型；Ｓｈａｍ＋ＲＯＳＩ组术前３０ ｍｉｎ腹
腔注射ＲＯＳＩ
１０
特异激活剂。本实验采用盲肠结扎穿刺法（ＣＬＰ）制 备大鼠脓毒症急性肾损伤模型，通过观察过氧化物
酶增殖激活受体的配体一ＲＯＳＩ对脓毒症急性。肾损伤
ｍｇ／ｋｇ，Ｓｈａｍ组术前３０ ｍｉｎ腹腔注
射与Ｓｈａｍ＋ＲＯＳＩ组ＲＯＳＩ等体积的药物溶剂１０％
及Ｂｃｌ．２的表达较ＣＬＰ＋ＲＯＳＩ组明显降低。结论ＲＯＳＩ作为配体激活ＰＰＡＲ、／，减轻了脓毒症时的炎 症反应，减少肾脏细胞凋亡，改善了肾脏功能，减轻肾脏损伤，对大鼠脓毒症急性肾损伤有保护作用。
【关键词】
脓毒症；
肾功能衰竭，急性；过氧化物酶；罗格列酮
Ｄｅｎｇ Ｊｉａ，Ｙｕ ＪｉａｒＬ Ｉｎｔｅｎｓｉｖｅ Ｒｏｓｉｇｌｉｔａｚｏｎｅ ｐｒｏｔｅｃｔｓ ａｃｕｔｅ ｋｉｄｎｅｙ ｉｎｊｕｒｙ ｉｎ ｓｅｐｔｉｃ ｒａｔｓ Ｓｅｃｏｎｄ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｏｆＤａｌｉａｎ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｄａｌｉａｎ １１６０２７，Ｃｈｉｎａ
ｒａｔｓ
ｏｆ ｓｅｐｓｉｓ．
【Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ】Ｓｅｐｓｉｓ；Ｋｉｄｎｅｙ
ｆａｉｌｕｒｅ，ａｃｕｔｅ；Ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ；Ｒｏｓｉｇｌｉｔａｚｏｎｅ
脓毒症是以全身炎症反应（ＳＩＲＳ）为特征的临 床综合征，对多个器官如肺、肝、肾等均会有一定的
损伤¨。２ ｏ。急性肾损伤（ＡＫＩ）是重症监护病房 （ＩＣＵ）中脓毒症患者尤其是老年人常见的严重并发
取６只大鼠麻醉后，原切口开腹，腹主动脉放血处
死。手术切口向上、下延长切口，上至剑突下，下至
耻骨联合，暴露两侧肾脏，分离。肾脏被膜及脂肪组
织，离断肾脏动静脉血管及输尿管。取大鼠双侧肾
展有限公司提供）；ＰＰＡＲ、／、Ｂ淋巴细胞瘤一２基因 （Ｂｃｌ一２）（Ｂｉｏｗｏｒｌｄ巴傲得生物技术有限公司）。 ３．仪器：ＢＳＡｌ２４Ｓ分析天平（德国赛多利斯）； ＨＷＳ２４型电热恒温水浴锅（上海一恒科学仪器有限
ａｃｕｔｅ
ｓｅｐｓｉｓ ｗｉｔｈ
ｋｉｄｎｅｙ
Ｄａｗｌｅｙ ｒａｔｓ ｂｙ ｃｅｃａｌ ｌｉｇａｔｉｏｎ
Ｓｅｐｓｉｓ ｍｏｄｅｌｓ ｗｅｒｅ ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ ｕｓｉｎｇ ｍａｌｅ Ｓｐｒａｇｕｅ— ｈｅａｌｔｈｙ ｒａｔｓ ｗｅｒｅ ｒａｎｄｏｍｌｙ ｄｉｖｉｄｅｄ ｉｎｔｏ ４ ｇｒｏｕｐｓ：ｃｅｃａｌ
ＤＭＳＯ，两组均腹腔注射３％戊巴比妥钠４５
ｍｇ／ｋｇ
时大鼠肾脏结构和功能以及细胞凋亡的影响，探讨 ＰＰＡＲ－／对脓毒症大鼠急性。肾损伤临床治疗的应用
价值。 材料与方法 一、材料
麻醉，开腹翻动盲肠后还纳，不做结扎穿刺。给药剂
量参照文献［８］。 ２．模型制备：盲肠结扎穿刺术（ＣＬＰ），术前大
鼠禁食１２ ｈ，腹腔注射３％戊巴比妥钠４５ ｍｇ／ｋｇ麻 醉，大鼠仰卧置于手术操作台上，固定四肢，腹部术
ｇｒｏｕｐ
ＤＯＩ：１０．３７６０／ｃｍａ．ｊ．ｉｓｓｎ．０３７６－２４９１．２０１６．２９．００６
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
作者单位：１１６０２７辽宁省，大连医科大学附属第二医院重症医学科 通信作者：于健，Ｅｍａｉｌ：ｙｕｊｉａｎ＠ｍｅｄｍａｉｌ
ｃｏｎ．ａｎ
万方数据
生堡医堂苤查！！！！生！旦！旦箜堑鲞笠！！塑盟堕！丛塑』堡！！些：垒！ｇ！坠！：！Ｑ！！：∑！！：！！：盟！：！！
Ａｄｖａｎｃｅ公司）；酶标仪（珀金埃尔默仪器有限公 司）；电泳系统、转印槽、分子成像分析系统（Ｂｉｏ
公司）。 二、方法 １．动物分组：雄性ＳＤ大鼠９６只随机分为４ 组，分别为盲肠结扎穿刺加ＲＯＳＩ给药组（ＣＬＰ＋ ＲＯＳＩ组）、盲肠结扎穿刺组（ＣＬＰ组）、假手术加 ＲＯＳＩ给药组（Ｓｈａｍ＋ＲＯＳＩ组）、假手术组（Ｓｈａｍ 组），每组２４只。各组术前均禁食１２
ｈ
ＣＬＰ＋ＲＯＳＩ组ＭＰＯ升高的水平较ＣＬＰ组有明显减少［（４．０７土０．１６）比（４．６２±
ｈ
０．０８）；Ｐ．，＝０．０１，Ｐ，。＝０．００６］，６、１２、２４
ＣＬＰ组与Ｓｈａｍ组之间肾脏组织ＭＰＯ浓度比较有明显升高
ｈ
［（４．６２±０．０８）比（１．３０±０．０６）；Ｐ６＝０．００，Ｐ１２＝０．００，Ｐ２４＝０．００］。６、１２、２４
ｈ，ＣＬＰ＋ＲＯＳＩ Ｒａｄ
症之一，死亡率高。３圳。脓毒症急性肾损伤的病理机
制复杂，有多种因素共同作用∞Ｊ。过氧化物酶增殖
激活受体（ＰＰＡＲｓ）是一类配体依赖型核转录因子， 参与调节脂肪代谢、糖稳态、炎症反应、细胞分化与 凋亡等生理反应。６ Ｊ。目前发现的ＰＰＡＲｓ亚型包括： ＰＰＡＲａ、ＰＰＡＲｌ３、ＰＰＡＲ－／，其中ＰＰＡＲｌ与配体作用激 活后，抑制炎症基因表达，负向调节促炎转录因子信 号通路，有调节炎症和免疫反应的作用，它在脓毒症
发病和治疗的作用是近年来研究的热点＂Ｊ。通常 ＰＰＡＲｌ／是失活状态，罗格列酮（ＲＯＳＩ）是ＰＰＡＲ－／的
组术前３０ ｍｉｎ腹腔注射ＲＯＳＩ
１０
ｍｇ／ｋｇ，ＣＬＰ组术
前３０ ｍｉｎ腹腔注射与ＣＬＰ＋ＲＯＳＩ组ＲＯＳＩ等体积
的药物溶剂１０％二甲基亚砜（ＤＭＳＯ），两组均腹腔
注射３％戊巴比妥钠４５ ｍｇ／ｋｇ麻醉，盲肠结扎穿刺
区备皮，常规碘伏棉球消毒，取下腹正中纵形１．５ ｃｍ切口，暴露盲肠，挤压盲肠上端，使其内容物充满 盲肠下端，增加盲肠内压力，用细丝线结扎盲肠总长 度的１／３，并结扎营养血管及部分肠系膜。９号注射 针头选取结扎盲肠中心部位对穿盲肠，然后将盲肠
还纳腹腔，逐层缝合切口，即刻腹部皮下注射生理盐 水３
ｍｌ／１００