HBV 的变异及其耐药的诊治- 医元网-专注医患互动(国家公众健康馆主办)

Japan2
Peptide nucleic 18 acid (PNA) mediated polymerase chain reaction clamping
Germany Line- probe-
86
assay
22% (4/18)
• Of the patients who developed resistance, 32% had
病毒
病毒多聚酶 缺乏矫正功能
CCC DNA 半衰期长
肝细胞
受染细胞 半衰期长
宿 选择性压力 主 免疫应答
病毒感染的Baidu Nhomakorabea持久性
对耐药突变株的选择
1Zoulim F,Semin Liver dis,2002;22S1:23-32 2Zoulim F,Antivir Chem Chemother,2001,12:131-142
耐药分析
• 耐药基序
（Drug resistance motifs）
• HBV表型耐药 （Phenotypic resistance）
• 临床耐药
（Clinical resistance）
三者相关，但不完全等同
Lamivudine and wild-type HBV(一)
Y
Nucleotides
YMDD mutants pretreatment. • Of those who did not develop resistance, 59% had YMDD mutants pretreatment. •Therefore, YMDD pre-treated doesn’t predict treatment failure.
针对宿主
恢复特异性抗HBV CD4/CD8免疫应答
诱导持续病毒抑制 HBV DNA疫苗 细胞因子
1Gish RG, Antimicrob Agents Chemother, 2002;46:1734-1740 2Santantonio T, J Hepatol, 2002;36:799-804
Fold Increase in IC50 Lamivudine Adefovir
1
1
1.4
1.9
3.5
1.9
380
3.2
2080
2.5
1666
0.7
L528M & V521L: compensatory mutations enhancing replication fitness
Viral Load Suppression in Patients
Match
Temperature
low
medium
high
YMDD变异检测结果
YMDD基序变异发生后的临床影响
Incidence of YMDD variant HBV
Incidence of detectable serum YMDD variant HBV in HBeAg+ve patients after lamivudine therapy for: – 1 yr = 24% (Lai et al, 2001) – 2 yr = 38% (Liaw et al, 2000) – 3 yr = 49% (Leung et al, 1999) – 4 yr = 67% (Chang et al, 2000)
阿地福韦
无报道
恩替卡韦
无报道
Emtricitabine Clevudine LdT
不明 不明 不明
LdC LFd4C
不明 不明
对拉米夫定耐药株的活性
体外
体内
尚未研究
有
无
无
有
有
部分活性
有
无 无 不明 不明 部分活性
不明 不明 不明 不明 不明
1Nafa S, Hepatology,2000;32:1078-1088 2Delaney Wet, Antimicrob Agents Chemother,2001;45:1705-1713
China
Clone Analysis
Number of Patients
5
Percents of Detection of YMDD mutant in untreated patients
80% (4/5)
Japan1
PCR –ELISA & 18 mini-sequence method
28% (5/18)
Japan1: Satsuki Kobayashi, Tatsuya Ide, Michio Sata Japan2: Toshihiko Kirishima, Takeshi Okanoue, Yukiko Daimon, et al.
对拉米夫定耐药株的治疗
抗病毒药物
耐药性
干扰素 拉米夫定
有: 75%的患者 有: 25%/1y;50%/2y
HBV 的变异及其耐药的诊治
上海瑞金医院 陆志檬教授
变异是病毒重要生物学特征 之一
• 慢性HBV感染者体内每天可产生1011~13个病毒体 • 复制过程中DNA多聚酶可发生错误导致病毒DNA中
出现核苷错误配对 • HBV DNA每个复制循环中每10,000个碱基对可发生
1个核苷错误，因而形成HBV突变株：
患者用拉米夫定前后的病情
演变
日达仙 1.6mg TIW
ALT
拉米夫定 100mg
160
干扰素
140
120 100
HBeAg+ HBeAb-
HBeAg- HBeAb+
80
60
40
20
0
治疗前
1
5
9 15 21 29 32 35 38
ALT
男性，36岁
DNA
DNA
108 HBsAg- 107
106 105 104 103 102
41
展望
• 治疗拉米夫定耐药株的新药已在临床试验之中，其中 阿地福韦对拉米夫定耐药株具有较强的活性
• 发展新的方法确定病毒载量、检测耐药株、评估CCC DNA对监测治疗进而改变治疗终点非常重要
• 随着新药及新的治疗方案的出现，包括联合治疗，序 贯治疗及间歇治疗，我们相信不仅可以有效治疗而且 可以有效预防拉米夫定耐药株
–可能改变了宿主对病毒的免疫反应 –可能增强了病毒的复制能力
1Carman WF, London: Churchill Livingstone, 1998;141-172
变异株 ≠ 突变株 （variant）（mutant）
• HBV变异株 是指在自然环境中发生变化的 病毒株
– HBV基因型、HBsAg血清型和亚型
基因型耐药－病毒多聚酶基因 出现突变
1Nafa S, Hepatology,2000;32:1078-1088 2Stuyver L, J clin Microbiol,2000;38;702-707
耐药变异的检测方法
• Sequences analysis • Line probe assay • PCR-RFLP analysis
1Gish RG, Antimicrob Agents Chemother, 2002;46:1734-1740 2Michel ML, Vaccine, 2001;19:2395-2399
14
- 4.7
Genotyped patients with both baseline and post-treatment HBV DNA
data available
对拉米夫定耐药的预防
针对病毒
拉米夫定+泛昔洛韦 拉米夫定+阿地福韦
(或+恩替卡韦,LdT) 拉米夫定+干扰素
(或IFN续贯治疗)
• HBV突变株 是指在宿主体内自发产生或者 在治疗压力或其它压力下发生改变的病毒株
• HBV自发性前核心区/核心区和核心启动子 (BCP)突变与HBV基因型密切相关
1Lok AS, Gastroenterology, 2001; 120:1828-1853
病毒感染的持久性及耐药性
病毒高复制 高变异率
(wild-type)
Lamivudine and YMDD variant HBV
Y
Nucleotides
V/I
reduced
affinity
Lamivudine
weak inhibition ss (-) DNA
D D HBV polymerase
(variant)
病毒耐药性的诊断
表型耐药－在治疗期间血清病 毒DNA水平上升
2002年欧洲肝病会议信息（二）2002.4.
西班牙
Adefovir 治疗CHB 及 对LAM耐药变异的体内外试验
Inhibition of lamivudine-Resistant HBV by Adefovir in Cell Culture Assay
Mutation Wide type
V521L L528M M552I L528M + M552V V521L + L528M + M552V
11
10.5
0 1 23 100
2 19
30
13.6
0 1 18 100
3 21
02
8.7
6 0 11
65
4 21
00
0
0 20 0
100
5 17
03
15
20 0 0
0
张欣欣等 瑞金医院
YMDD变异对临床的影响
张欣欣等 瑞金医院
YMDD变异对临床的影响
张欣欣等瑞金医院
Country Method
Emergence of YMDD variants does not necessarily equate to clinical resistance
YMDD变异检测结果
编号
治疗前
治疗48周
YMDD
YIDD YVDD
变异株百 分比(%)
YMDD
YIDD
变异株百 YVDD 分比(%)
1 17
(Restriction fragment length polymorphism) • Real-time PCR • Molecular beacons • DNA chip
LightCycler Detection Formats
Mutation Analysis
Mismatch
Perfect
Treated with ADV for Up to 72 Weeks
Median Decrease
in
Duration of ADV
No. of
HBV DNA
Therapy 24 weeks
patients* 106
(Log10 c/ml ) - 3.6
48 weeks
46
- 4.4
72 weeks
high affinity
M D
D
ss (-) DNA
HBV polymerase (wild-type)
Lamivudine and wild-type HBV(二)
Y
Nucleotides
high affinity
M D
Lamivudine
inhibition
ss (-) DNA
D
HBV polymerase