b细胞淋巴瘤患者外周血t淋巴细胞亚群的检测及与ki67的关系

文章编号：1671-8631（2015）11-0831-04
B细胞淋巴瘤患者外周血T淋巴细胞亚群的检测及与Ki67的关系
李美玲
（太原钢铁集团总医院，山西太原030003）
摘要目的：了解B细胞淋巴瘤患者外周血T淋巴细胞亚群、NK细胞的表达以及与Ki67的关系。

方法：选择B 细胞淋巴瘤患者32例，男18例，女14例，年龄36~62岁。

应用流式细胞仪（FCM）检测总T细胞，Ts，Th，NK细胞绝对值计数，并计算出Th/Ts值，对各种数据进行比较。

同时用免疫速率比浊法测定血清中免疫球蛋白。

据Ki67表达阳性率分为低表达组和高表达组，了解Ki67与免疫功能的关系。

结果：非霍奇金淋巴瘤（NHL）患者Th明显低于正常对照组，P<0.05；Ts低于正常对照组，P>0.05；总T细胞明显低于正常对照组，P<0.01；Th/Ts，NK均明显低于正常对照组，P<0.01。

Ki67高表达组Th，总T细胞，Th/Ts，NK细胞明显低于正常对照组，P<0.05；Ts明显高于正常对照组，P<0.05；Ki67低表达组Th，总T细胞，Th/Ts，NK细胞低于正常对照组，P<0.01；Ts高于正常对照组，但差异无统计学意义（P>0.05）。

结论：B细胞淋巴瘤患者存在细胞免疫抑制与紊乱，且基础免疫低下。

Ki67表达越高，免疫功能越低；反之，免疫功能越强。

关键词B细胞淋巴瘤；T淋巴细胞亚群；NK细胞；免疫球蛋白；Ki67增殖指数
中图分类号：R733.1 文献标识码：B
The detection of the subgroup of the blood T lymphocyte around the patient with B cell lymphoma and the relationship with Ki67
LI Mei-ling
（Taiyuan Iron and Steel Group General Hospital，Taiyuan030003，China）
Abstract Objective：To investigate the role of abnormal T lymphocyte subsets and natural killer cells，and to investigate their relationship of T lymphocyte subsets and Ki67proliferation index round the patient with B cell lymphoma.Methods：Select the32cases of patient with B cell lymphoma（male18cases，female14cases），aged36~62years old，apply the method of the fluid cell machine（FCM）to detect the T lymph cell and its subsets including total T，Th，Ts and counting of the absolute value of natural killer cells，and calculate the value of Th/Ts，make a comparison of various data.At the same time，using the immu-nization rate nephelometry to measure the immunoglobulin in the serum.It is divided into low expression group and high ex-pression group according to the positive rate of expression of Ki67，try to understand the relationship between Ki67and the im-mune function.Results：The Th of the patients with NHL is apparently lower than the normal contrast group（P<0.05）.The Ts is lower than the normal contrast group（P>0.05）.Total T is apparently lower than the normal contrast group（P<0.01）. Th/Ts and NK is apparently lower than the normal contrast group（P<0.01）.Th，total T，Th/Ts，NK cell in the high expres-sion group of Ki67are apparently lower than the normal contrast group（P<0.05）.The Ts of the high expression of Ki67is ap-parently higher than the normal contrast group（P<0.05）.Th，total T，Th/Ts，NK cell in the low expression group of Ki67are lower than the normal contrast group（P<0.05）.The Ts of the low expression of Ki67is higher than the normal contrast group （P>0.05）.Conclusion：The patient with B cell lymphoma has the cell immunity suppression and disorder，and the basic im-munity is low.The higher the expression of Ki67，the lower the immunity；conversely，the higher the immunity.
Key words B cell lymphoma；T lymphocyte subsets；natural killer cells；serum immunoglobulin；Ki67proliferation index
B细胞淋巴瘤原发于淋巴结或淋巴组织，是一类较为常见的非霍奇金淋巴瘤（non-Hodgkin lym-phoma，NHL），是具有高度异质性的恶性肿瘤。

近年来，许多国家淋巴瘤的发病率呈上升趋势［1］。

其发生发展与免疫功能抑制和损害有关。

随着研究的深入，越来越多证据表明T淋巴细胞及自然杀伤（NK）细胞参与NHL发病过程，免疫球蛋白在此过程中也存在异常。

Ki67增殖指数与免疫功能存在着一定的关系。

本文采用流式细胞术检测32例B细胞淋巴瘤患者外周血T淋巴细胞亚群，用免疫速率比浊法分析其中30例B细胞淋巴瘤患者血清中IgG，IgA 和IgM的变化，并依据Ki67增殖指数表达情况对其进行分组，以探讨B细胞淋巴瘤患者细胞免疫和体液免疫变化及与Ki67增殖指数的关系。

1 资料与方法
1.1 一般资料
·
138
·
临床医药实践2015年11月第24卷第11期
选择2007年1月—2011年12月收治的经病理组织学证实的B 细胞淋巴瘤32例，
男18例，女14例，年龄36~62岁。

按病理分型分类，弥漫性大B 细胞淋巴瘤18例，慢性淋巴细胞白血病/小细胞淋巴瘤4例，滤泡淋巴瘤3例，黏膜相关淋巴瘤（MALT ）3例，套细胞淋巴瘤4例；全部患者均排除第二肿瘤、其他血液系统疾病、免疫系统疾病、糖尿病、肝肾功能异常、感染等，依据Ki67增殖指数表达情况对其进行分组。

随机选取健康体检人员30例为对照组。

1.2 实验仪器及试剂单克隆三色抗体CD4-FITC /CD8-PE /CD3-
PE -Cy5、单克隆三色抗体CD3-FITC /CD16CD56-PE 购自美国Coulter 公司；Q -PREP 型破红仪，
EPICS ELITE ESP 型流式细胞仪为美国Beckman
Coulter 公司产品。

1.3 方法
用流式细胞仪（FCM ）检测T 淋巴细胞及其亚
群。

抽取静脉血2mL ，乙二胺四乙酸（EDTA ）抗凝。

取FCM 专用试管（Falcom 管）2支，分别加入单克隆三色抗体CD4-FITC /CD8-PE /CD3-PE -Cy5及CD3-FITC /CD16CD56-PE 5μL ，均加入30μL 抗
凝血，30μL PBS 缓冲液混匀，室温下，暗室避光孵育15min 。

荧光标记后通过破红仪使红细胞溶解，
1200rpm 5min ，弃去上清，500μL PBS 洗涤缓冲液
悬浮，
FCM 分别检测Th ，Ts ，总T 细胞和NK 细胞。

用免疫速率比浊法测定血清中免疫球蛋白的变化。

Ki67阳性表达均为棕黄色颗粒定位于细胞核。

判定标准：抗体阳性判断标准按阳性细胞率计分，在高倍显微镜下，选取阳性密度较高的区域，在高倍视
野下至少计数1000个肿瘤细胞中阳性细胞数，血管内皮阳性细胞不计在内。

Ki67阳性细胞数百分率用标记指数（1abeling index ，LI ）表示：LI =阳性细胞数/1000个肿瘤细胞ˑ100。

无明显阳性反应细胞或阳性细胞数<20%为低表达；阳性细胞数≥
20%为高表达。

1.4 统计学方法
采用SPSS17.0统计学软件进行分析，数据以珋x
ʃs 表示，各组均数间比较采用t 检验，采用χ2检验对免疫球蛋白异常减低发生情况进行分析。

2 结 果
2.1 NHL 患者T 淋巴细胞亚群比较
NHL 患者Th 明显低于正常对照组，t =0.036，P <0.05；Ts 低于正常对照组，但差异无统计学意义，t =0.353，P >0.05；Th /Ts 明显低于正常对照组，t =0.001，P <0.01；总T 细胞明显低于正常对照组，
t =0.003，P <0.01；NK 明显低于正常对照组，t =
0.001，P <0.01（见表1）。

表1 NHL 患者T 淋巴细胞亚群比例 珋x ʃs
组 别
Th 细胞（%）
（CD3＋CD4＋）
Ts 细胞（%）（CD3＋CD8＋）Th /Ts
总T 细胞（%）（CD3＋）NK 细胞（%）
［CD3-CD （16＋56＋）］
NHL 组32.49ʃ8.981）24.22ʃ8.50 1.16ʃ0.482）64.02ʃ13.162）9.87ʃ6.012）
对照组35.25ʃ5.1625.08ʃ4.34 1.40ʃ0.7069.98ʃ5.7914.91ʃ4.87
1）与对照组比较，P <0.05。

2）与对照组比较，P <0.01。

2.2 NHL 患者免疫球蛋白检测结果
NHL 患者组与对照组相比，IgG 水平低于对照
组，t =0.031，P <0.05；IgA 水平明显低于对照组，t =0.005，P <0.01；IgM 低于对照组，但差异无统计
学意义，t =0.425，P >0.05（见表2）。

表2 NHL 患者及正常对照组Ig 检测结果 珋x ʃs ，g /L
组 别
IgG
IgA
IgM
NHL 组9.34ʃ4.361） 1.04ʃ0.682）0.35ʃ0.21
对照组35.25ʃ5.1625.08ʃ4.34 1.40ʃ0.701）
与对照组比较，P <0.05。

2）与对照组比较，P <0.01。

2.3 NHL 患者T 淋巴细胞亚群与Ki67的关系
Ki67高表达组Th ，总T 细胞、Th /Ts 、NK 细胞明
显低于正常对照组，分别为t =0.021，t =0.002，t =0.001，t =0.001，均为P <0.05；Ki67低表达组Th ，总T 细胞，Th /Ts ，NK 细胞低于正常对照组，分别为t =0.035，t =0.012，t =0.001，t =0.002，均为P <
0.05；Ki67高表达组Ts 明显高于正常对照组，t =0.034，P <0.05；Ki67低表达组Ts 高于正常对照组，
t =0.458，P >0.05（见表3）。

3 讨 论
免疫系统有免疫监督功能，机体的免疫状态，尤
其是特异性细胞免疫，与肿瘤的发生、发展密切相关。

机体抗肿瘤免疫以T 淋巴细胞介导的细胞免疫
·
238· Proceeding of Clinical Medicine ，Nov.2015，Vol 24No.11
表3 NHL 患者T 淋巴细胞亚群与Ki67的关系 珋x ʃs
组 别Th 细胞（%）（CD3＋CD4＋）Ts 细胞（%）（CD3＋CD8＋）Th /Ts
总T 细胞（%）（CD3＋）NK 细胞（%）
［CD3-CD （16＋56＋）］
Ki67低表达组33.21ʃ4.321）40.22ʃ6.591） 1.28ʃ0.421）62.13ʃ5.621）10.45ʃ4.571）
Ki67高表达组31.56ʃ4.711）42.72ʃ8.201） 1.25ʃ0.381）60.72ʃ7.461）7.97ʃ5.711）对照组35.25ʃ5.1625.08ʃ4.34 1.40ʃ0.7069.98ʃ5.7914.91ʃ4.871）与对照组比较，P <0.05。

为主，NK 细胞在机体抗肿瘤过程中起着免疫监视、
杀伤靶细胞以及免疫调节等作用［2］。

T 淋巴细胞是
最重要的免疫细胞，T 淋巴细胞的变化可以反映细
胞免疫功能的状况［3］。

CD3＋细胞代表T 淋巴细胞
总数，
CD4＋细胞属于辅助淋巴细胞，主要功能是辅助诱导其他免疫细胞共同发挥抗肿瘤作用，还参与激活B 细胞、巨噬细胞、NK 细胞和细胞毒T 细胞，
起到协同抗肿瘤作用［4］
，包括Th1，Th2，Th3细胞，
其中Th1细胞分泌的细胞因子有IL -2，IFN -γ，
TNF ；Th2主要分泌IL -4，5，6，9，10，13；Th3细胞主要分泌β-TNF 。

Th1和Th2细胞分泌的细胞因子
具有增强和扩大其他免疫细胞的功能。

CD3＋，
CD4＋细胞减少必然导致免疫功能降低。

有研究显示［5］，抗肿瘤持续的免疫活性诱导有赖特异性
CD4＋T 淋巴细胞的存在，它不仅可以建立免疫记
忆，而且可以诱导其重新产生肿瘤反应性CD8＋T 淋
巴细胞。

本文NHL 患者的CD3＋，CD4＋细胞数均明
显低于正常对照组，差异有统计学意义；Th /Ts 比值降低，提示机体T 细胞亚群失衡，NHL 患者存在细胞免疫功能降低，与上述文献相符。

CD8＋T 细胞按其功能包括抑制性T 细胞和杀
伤性T 细胞，具有免疫抑制作用和杀伤靶细胞的功
能。

CD4＋、CD8＋T 细胞亚群及CD4＋T 细胞分泌的Th1和Th2细胞因子不仅直接介导细胞免疫功能，而且对机体免疫应答的调节着重要作用，它与NK
细胞、B 细胞介导的体液免疫一起构成了肿瘤免疫的主体。

CD8＋T 细胞可抑制CD4＋T 细胞和B 细胞功能，从而抑制细胞免疫反应和抗体形成，其增高有
利于肿瘤的持续增长［6］。

Hartmann 等［7］
对头颈部
肿瘤的研究发现，CD8＋T 细胞具有调节T 细胞活性的作用，反映了患者的细胞免疫功能，与许多实体瘤的生存期明显相关。

本文检测NHL 患者的CD8＋细胞数均明显低于正常对照组，差异无统计学意义，与文献不符，可能原因是NHL 患者为早期病例，免疫功能未受抑制；也可能与部分NHL 患者预后相对较好有关。

具体原因有待进一步证实。

NK 细胞具有产生直接细胞毒活性、分泌多种免
疫调节细胞因子以及介导抗体依赖性细胞毒作
用［8］
，可直接发挥抗肿瘤效应，并通过分泌细胞因子
来调节免疫应答，是机体免疫防御体系的第一道防
线
［9］。

NK 细胞数量的减少导致机体的免疫功能下降，往往是B 细胞淋巴瘤发展和发生远处转移的重要原因。

本文中NK 细胞降低，抗肿瘤作用减低，提示NHL 患者基础免疫功能存在缺陷，且易发生肿瘤
转移。

既往有研究发现［10］
，晚期实体瘤患者的细胞
免疫紊乱加重，提示细胞免疫状态在肿瘤的发生、发
展中起重要作用。

Rigg 等［11］
对大肠癌的研究证实，
当机体免疫状态降低时，CD4＋T 细胞减少，CD8＋T
细胞增多，NK 细胞明显低于正常人。

本文检测NK 细胞降低，差异有统计学意义，与文献报道一致，证
实NHL 患者存在基础免疫功能低下。

B 细胞淋巴瘤是来源于B 淋巴细胞的恶性肿瘤，其发生为单克隆性，所有的肿瘤细胞都来源于一个B 淋巴细胞，由于B 细胞表面有免疫球蛋白表达，所有肿瘤细胞表面都有相同的免疫球蛋白或免疫球蛋白超家族蛋白表达。

免疫球蛋白具有弱的免疫原性，对B 细胞淋巴瘤患者的肿瘤细胞的识别没有出现差异，一方面，免疫球蛋白的B 趋化作用能够加强细胞的免疫原性，另一方面，抗肿瘤负荷与免疫两者之间有可能出现差异。

推测其可能机制是淋巴瘤发生、发展过程损伤或者抑制了机体的免疫球蛋白分泌功能。

Pan-galis 等［12］回顾性统计了219例出现IgM 单克隆升高
的病例，其中130例为B 细胞疾病，84例淋巴浆细胞
样淋巴瘤/Waldenstrom 巨球蛋白血症，5例意义未明的单克隆免疫球蛋白增多症，其中130例B 细胞疾病中有125例低于正常水平。

但也有报道显示，免疫球蛋白在B 细胞淋巴瘤中呈上升趋势。

本文检测免疫球蛋白结果显示，NHL 患者免疫球蛋白均明显低于正常对照组，提示免疫球蛋白降低者也存在免疫功能降低，NHL 患者同样存在免疫功能降低。

Ki67抗原是一种与细胞增殖活性密切相关的核
蛋白，能准确反映细胞增殖状态，（下转第848页）
·
338· 临床医药实践 2015年11月第24卷第11期
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收稿日期：2015-07-20
（本文编辑：王作利）
作者简介：郭晓涛（1976—），女，河北省肃宁县人，主管护师，主要从事护理工作。

（上接第833页）
与肿瘤的发生、转移及预后密切相关，被认为是反映细胞增殖活性的理想指标。

检测Ki67表达水平可
作为判断细胞增殖状态和肿瘤恶性程度的指标［13］。

尹相丛等［14］对淋巴瘤患者、反应性增生淋巴组织及
正常淋巴结组织分析发现，随淋巴瘤恶性程度增高，
Ki67表达水平逐渐增高，说明Ki67是评估淋巴瘤肿瘤细胞增殖的良好指标，与淋巴瘤侵袭有关，对淋巴
瘤临床分型、组织分级具有一定参考价值。

近来的研究发现，多种人类恶性肿瘤组织中有Ki67的过度表达。

本研究结果显示，Ki67高表达者，机体免疫功能较低；Ki67低表达者，机体免疫功能相对较强，且随着Ki67增高，恶性度逐渐增加。

综上所述，总T ，Th ，Ts 细胞的数量变化以及Th /Ts 比值的变化均对B 细胞淋巴瘤的诊断、治疗、疗效观察、预后有重要意义。

肿瘤的恶性程度越高，
Ki67越高，免疫功能越差。

B 细胞淋巴瘤患者细胞及体液免疫功能紊乱，在疾病诊治过程中非常重要，因此要高度重视细胞及体液免疫功能状态，并监测
Ki67的水平，更好地指导临床诊治。

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收稿日期：2015-07-20（本文编辑：张荣梅）
作者简介：李美玲（1974—），女，山西省闻喜县人，硕士学位，副主任医师，主要从事血液风湿科临床工作。

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848· Proceeding of Clinical Medicine ，Nov.2015，Vol 24No.11
B 细胞淋巴瘤患者外周血 T 淋巴细胞亚群的检测及与
Ki67的关系
作者：李美玲， LI Mei-ling
作者单位：太原钢铁集团总医院,山西 太原,030003
刊名：
临床医药实践
英文刊名：Proceeding of Clinical Medicine
年，卷(期)：2015(11)
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