植物精油对嗜水气单胞菌和无乳链球菌的抑菌效果

智特奇专栏
植物精油对嗜水气单施菌和
无乳裢球菌的抑菌故果
♦作者：欧阳海燕沈兆艳吕勇吴世林
♦单位:广州智特奇生物科技股份有限公司
摘要:本研究旨在通过在细菌培养基中添加不同浓度的植物精油产品“智然香”和抗敌素，接种嗜水气单胞菌和无乳链球 菌，探求植物精油产品“智然香”和抗敌素对两种水生致病菌的最低抑菌浓度。

试验方法：采用琼脂平板法，在培养基中添加不 同浓度的植物精油产品“智然香”和抗敌素，分别接种嗜水气单胞菌和无乳链球菌，测定植物精油产品“智然香”和抗敌素对细 菌的抑制效果和最低抑菌浓度。

结果表明：植物精油产品“智然香”和抗敌素对嗜水气单胞菌的最低抑菌浓度分别为2%和 0.7%,对无乳链球菌的最低抑菌浓度分别为4.6%和1%。

植物精油产品“智然香”可以以较小浓度抑制嗜水气单胞菌的生长，可 用于嗜水气单胞菌感染引起的水生动物疾病预防和控制。

关键词:植物精油；抗敌素；嗜水气单胞菌；无乳链球菌；最低抑菌浓度
[中图分类号]S816.7 [文献标识码]A[文章编号]1005-8613(2019)11-0023-03
目前水产动物病害防治主 要依赖抗生素、抗寄生虫药及消 毒剂等化学药物，常引起细菌耐 药性、环境污染及水产品中药物 残留等问题。

免疫防治虽是水产 动物疾病控制的有效途径，但我 国渔用疫苗研发及应用相对滞 后，目前只有4个水产动物疫 苗获国家新兽药证书，其中仅珠 江水产研究所研发的草鱼出血病活疫苗和嗜水气单胞菌灭活疫苗分别于2011年和2012年 被批准生产使用，可用商品化渔 用疫苗数量极其有限，远不能满 足水产动物疫病防治的需求。

因此，水产养殖中亟需安全高效、天然无残留的饲用抗生素替代
品。

至今报道具有潜在应用前景
的水产用抗生素替代品有中草
药（Reverter等，2014)、唾菌体
(Li等，2017)、卵黄免疫球蛋白
(J i n等，2013)和植物精油
(Thanigaivel 等，2〇丨5)等。

植物精油又称挥发油，广泛
存在于芳香植物中，现已知的植
物精油超过3000种，其中约有
300余种已广泛应用于食品、制
药和香料等行业（Bakkali等，
2008)。

植物精油的高效抗菌作
用已被视为潜在的伺用抗生素
替代品，主要研究方向集中在畜
禽方面。

近来研究发现植物精油
同样能有效防治水产动物细菌
性疾病、水霉病和寄生虫病，且
能增强鱼非特异性免疫力，提高
鱼类生产性能，并在尼罗罗非鱼
(Rattanchaikunsopon 等，2〇〇9;
Rattanchaikunsopon 等，2010b)、
瞻胡子站（Thomas等，2013)、金
鱼(Ku mar等，2012)等养殖中取
得了显著成效。

本试验选取广州智特奇生
物科技股份有限公司的植物精
油产品“智然香”与市场上常用
的抗生素抗敌素，研究比较其对
嗜水气单胞菌、无乳链球菌的抑
菌效果，以期为水产养殖病害防
治提供参考。

• 23.
1试验设计与方法
1.1试验材料
抗菌剂：广州智特奇生物科 技股份有限公司的植物精油产品（智然香：植物精油总量> 3.5%，其中香芹酚>2.3%,百里 香酚多1.2%),市场上购买的抗 敌素。

供试菌株：嗜水气单胞菌、无乳链球菌，购自广东省微生物 研究所菌种保藏中心。

1.2试验仪器
恒温恒湿箱,上海新苗医疗 器械制造有限公司；S W-CJ-IG 型单人净化工作台，苏州净化设 备有限公司；D H G-9240A电热 恒温鼓风干燥箱,上海齐欣科学 仪器有限公司;不锈钢手提式蒸 汽灭菌锅，上海申安医疗器械 厂；F A2004电子天平（感量0.0001 g),上海舜宇恒平科学仪 器有限公司;酒精灯、培养皿、试 管、移液枪、接种环等。

1.3培养基
无乳链球菌：血平板（蛋白
胨l〇g，牛肉粉3g,氯化钠5g，
脱纤维羊血50 mL,琼脂15 g)，
嗜水气单胞菌:L B琼脂(蛋白胨
l〇g，牛肉膏粉3g，氯化钠5g,
琼脂15 g)溶于1000 mL水中，
121T：灭菌20 min，冷却待用。

1.4培养基的处理
在超净台内将灭菌后冷却
至60T左右的培养基倒入灭菌
好的培养皿，每个平皿5 m L,加
人智然香、抗敌素，嗜水气单胞
菌培养基中智然香的浓度为
1.7%、2%、
2.3%、2.6%，抗敌素的
浓度为 0.6%、0.7%、0.8%、0.9%、
0.1%;无乳链球菌培养基智然香
的浓度为 3.4%、3.7%、4%、
4.3%、4.6%，抗敌素的浓度为
0.6%、0.7%、0.8%、0.9%、1%，混
合均勾，冷却凝固备用。

1.5菌悬液的配制
从经过活化的菌体斜面上
挑取一环菌体接种至相应的液
体培养基中，放人恒温振荡培养
箱培养至对数生长期。

分别吸取
以上培养时间的供试菌液0.5
m L,加人无菌水稀释到10M06
cfu/m L j t保存待用。

1.6菌液接种
每个平皿加入25g L嗜水
气单胞菌、无乳链球菌菌液，利
用涂布棒将菌液涂布均匀，放人
培养箱371培养并观察菌体的
生长情况，细菌生长完全被抑制
时所对应最低药物浓度即为
M I C。

继续培养24 h,观察菌体的
生长情况，无细菌生长的最低样
品浓度即为M B C值。

2结果与分析
2.1智然香、抗敌素对嗜水
气单胞菌的抑菌效果
智然香、抗敌素对嗜水气单
胞菌的抑菌效果如表1、表2所
示，“+”代表有细菌生长，“一”代
表完全无细菌生长。

由表1可
知，智然香浓度为1.7%时有细
菌生长，2%~2.6%均无细菌生
长，即智然香对嗜水气单胞菌的
表1智然香对嗜水气单胞菌的最低抑菌浓度测定结果
1.7% 2%
2.3% 2.6%
智然香+— — 一
表2抗敌素对嗜水气单胞菌的最低抑菌浓度测定结果
0.6%0.7%0.8%0.9% 1.0%
抗敌素+-———
表3智然香对无乳链球菌的最低抑菌浓度测定结果
3.4% 3.7%
4.0% 4.3% 4.6%
智然香++++—
表4抗敌素对无乳链球菌的最低抑菌浓度测定结果
0.6% 0.7% 0.8%0.9% 1.0%
抗敌素++++—• 24•
最低抑菌浓度为2%;抗敌素浓 度为0.6%时有细菌生长，0.7% ~1%时均无细菌生长，即抗敌素 对嗜水气单胞菌的最低抑菌浓度为0.7%。

2.2智然香、抗敌素对无乳链球菌的抑菌效果
智然香、抗敌素对无乳链球 菌的抑菌效果如表3、表4所7K。

由表3可知，智然香浓度为
3.4%〜
4.3%均有细菌生长，而
4.6%平皿中没有细菌生长，即智 然香对无乳链球菌的最低抑菌浓度为4.6%。

由表4可知抗敌 素浓度为〇.6%~0.9%均有细菌 生长，浓度为1%时没有细菌生 长,抗敌素对无乳链球菌的最低 抑菌浓度为1%。

3讨论
目前水产养殖病害损失比例中鱼类占很大部分，主要以细 菌性疾病为主，并且大多数是由 嗜水气单胞菌引起的鱼类细菌 性出血病。

嗜水气单胞菌是一种 革兰氏阴性短杆菌，普遍存在于 淡水、污水、淤泥、土壤和人类粪 便中，对水产动物、畜禽和人类 均有致病性，可引起多种水产动 物的败血症和人类腹泻，往往给 淡水养殖业造成惨重的经济损失(储卫华，2001)。

无乳链球菌 又称B簇链球菌，是革兰氏阳 性球菌，能引起新生儿脑膜炎、败血症、肺炎，以及奶牛乳腺炎，可感染多种水生动物(W a n g等，2017)。

近年来，随着水产养殖业 的发展，无乳链球菌已对多种海、淡水鱼类造成严重危害（刘 礼辉等，2015; Barony 等,2017)。

无乳链球菌最敏感的宿主是罗非鱼，在夏、秋季易爆发，该病传
染性强，幼鱼与成鱼的发病率达
10%~30%，死亡率 25%~80%(张
新艳，2008),给罗非鱼养殖业造
成了极大的经济损失。

鱼类爆发
细菌性疾病时，由于缺乏高效疫
苗，抗菌药物仍然是养殖基层防
控该病的首选，长期用药和滥用
药会加快细菌对某些抗生素产
生不同程度的耐药性，这也给水
产动物病害防控带来挑战，迫切
需要研发新型抗生素替代品来
防治水产养殖动物细菌性疾病。

植物精油因具有广谱抗菌
性已受到科学家的热切关注，其
不仅可以有效防止饲料保存过
程中青霉菌、曲霉菌等霉菌的滋
生，还能调控机体内大肠杆菌、
金黄色葡萄球菌、沙门氏菌等有
害菌的增长，目前植物精油已广
泛应用于水产动物疾病防治中。

Lee等(2009)发现，丁香精油对
海鱼弧菌、迟钝爱德华氏菌和嗜
水气单胞菌的最低抑菌质量浓
度为 0_015~0.062 /ig/m L，但该
研究未通过体内试验验证。

体内
试验证实,对罗非鱼腹腔注射迟
缓爱德华氏菌攻毒，日粮中添加
200mg/k g香芹酚，罗非鱼累积
死亡率由50%降至30%;而词喂
香芹酚与对伞花烃混合精油(各
为200 mg/kg)罗非鱼死亡率则
降至 0%(Rattanchaikunsopon 等，
2010a)。

同样的，用添加茶树油
的伺料伺喂银鲶鱼发现，50
A t IVL的茶树油可延长并治疗感
染嗜水气单胞菌鱼的寿命，治愈
率达 88%(Dos Santos 等，2017)。

另外Baldissera等(2017)利用茶
树油抵制嗜水气单胞菌的研究
发现，茶树油可通过影响胆碱能
系统，抑制炎症的方式来抵制嗜
水气单胞菌的感染，同时产生抗
氧化酶，如C A T和超氧化物歧化
酶，以清除过量的自由基，减轻
细菌引起的肝损伤。

而植物精油
对无乳链球菌的抑菌效果尚未
有相关研究报道。

本实验比较了植物精油产
品“智然香”和抗敌素对嗜水气
单胞菌和无乳链球菌的抑菌效
果，结果表明，智然香和抗敌素
对嗜水气单胞菌的最低抑菌浓
度分别为为2%和0.7%,对无
乳链球菌的最低抑菌浓度分别
为4.6%和1%,表明智然香对
嗜水气单胞菌的抑菌效果好于
无乳链球菌。

虽然智然香对嗜
水气单胞菌的最小抑菌浓度高
于抗敌素，但是智然香依然可
以以较小的浓度起到完全抑制
嗜水气单胞菌生长的作用，证
明智然香对嗜水气单胞菌具有
良好的抗菌效果，但体外抗菌
实验只能说明所试智然香与细
菌直接接触所产生的影响，而
对被细菌感染患病的动物的治
疗效果，仍需进行动物体内实
验才能证实。

4结论
植物精油产品“智然香”和
抗敌素对嗜水气单胞菌的最低
抑菌浓度分别为2%和0.7%,对
无乳链球菌的最低抑菌浓度分
别为4.6%和1%。

植物精油产品
“智然香”可以以较小浓度抑制
嗜水气单胞菌的生长，可用于嗜
水气单胞菌感染引起的水生动
物疾病预防和控制。

参考文献:（略）
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