肾茶中有机氯农药残留的分析研究

肾茶中有机氯农药残留的分析研究
杨安明;刘靖平;闫玉鑫
【摘要】建立了肾茶中8种有机氯农药残留的气相色谱分析方法.随机抽取样品,通过三种有机溶剂(石油醚、丙酮、乙醇)和三种提取方法(加热回流、索氏提取、超声提取)提取后,经浓硫酸磺化,用气相色谱法对有机氯农药残留进行定性定量分析.结果表明8种有机氯农药在1～250 ng·mL-1浓度范围内呈良好线性关系,平均加样回收率在79％～112％,相对标准偏差(RSD)小于10％.几种提取方法中以采用索氏提取法且乙醇为提取溶剂时提取率最高,所购肾茶样品中检测到γ-BHC和δ-BHC农药残留,但农药的检出量远低于《中国药典》中有机氯农药残留的标准.所建立的方法快速、准确、灵敏,适合肾茶中多种有机氯农药的检测.
【期刊名称】《云南师范大学学报（自然科学版）》
【年(卷),期】2016(036)003
【总页数】4页(P49-52)
【关键词】肾茶;气相色谱;有机氯农药;残留量
【作者】杨安明;刘靖平;闫玉鑫
【作者单位】云南师范大学职业技术教育学院,云南昆明650092;云南师范大学职业技术教育学院,云南昆明650092;云南师范大学职业技术教育学院,云南昆明650092
【正文语种】中文
【中图分类】X839.2
肾茶，为唇形科肾茶属植物，又名“猫须草”，傣医认为其清香、苦、凉，具有清火解毒、利尿排石、降尿酸、抗菌及消炎作用[1-3].肾茶主要产于我国云南南部、
广西南部、广东等地区，而云南的肾茶相对于其他地区更为有名，民间流传着“世界肾茶看中国，中国肾茶看傣族，傣族肾茶看版纳”的说法.西双版纳种植的肾茶
多以人工栽培为主，农药的使用也十分频繁，因此农药残留不容忽视，它直接关系到患者的身体健康.
有机氯农药杀虫效果明显,是上世纪80年代前用量最大的杀虫剂，主要包括滴滴涕(DDT)、六六六(BHC)、五氯硝基苯(PCNB)等.由于使用时间长、范围广、用量大，虽已禁用多年，但因其稳定性高、半衰期长，不易降解和代谢，长期积存于植物和土壤中，至今在中草药、茶叶、土壤、果蔬中检出率仍比较高[4-6].因此，监测中
药材中有机氯农药残留并制定出相关残留的标准非常重要.报道的有机氯前处理方
法较多[7]，2010年药典规定了9有机氯农药的前处理和检测方法[8].在调研文献
的基础上，实验样品前期处理采用了3种溶剂(乙醇、石油醚、丙酮)和3种提取方法(超声提取法、索氏提取法、加热回流法)，研究并确定了测定肾茶中有机氯农药残留的气相色谱条件，并对样品中有机氯农药残留进行分析研究.
1.1 主要仪器
GC2014型气相色谱仪(日本岛津公司)，AUW220D 电子天平(日本岛津公司)，超声清洗器(上海科导超声仪有限公司)，旋转蒸发仪(东京理化)，DLSB-20L/20 ℃低温冷却液循环泵(巩义予华仪器有限公司)，TG16-W台式微量高速离心机(湖南湘
仪仪器有限公司).
1.2 药材
肾茶中药材购买于昆明市螺蛳湾药材市场.
1.3 主要试剂
农药对照品(正己烷溶解，100 μg·mL-1)购于sigma公司(纯度>98%)，乙醇、石
油醚、丙酮、正己烷(分析纯，国药集团化学试剂有限公司)，氯化钠(分析纯，天津科密欧化学试剂有限公司)，硫酸钠(优级纯，天津科密欧化学试剂有限公司)，硫酸(分析纯，重庆川东化工有限公司).
2.1 色谱条件
弹性石英毛细管柱rtx-1(30 m×0.32 mm×0.25 μm)，ECD检测器，进样口温度275 ℃，柱子程序升温，检测器温度285 ℃，进样量1 μL，不分流进样.程序升温方法：初始温度120 ℃，每分钟升温8 ℃至250 ℃，保持3 min，再每分钟升温10 ℃至280 ℃，保持10 min.载气为高纯度氮(99.99%)，电流1 nA.在此条件下对照品、样品中各农药出峰顺序见图1及图2.图1中各个保留时间下的农药成分见表2.
2.2 对照品混合储备液的制备
用正己烷将浓度均为100 μg·mL-1的α-BHC、β-BHC、γ-BHC、δ-BHC、P.P′-DDT、O.P′-DDT、P.P′-DDD、P.P′-DDT分别制成浓度均为5 μg·mL-1的单标储备液.精密量取上述各单标储备液5 mL置100 mL容量瓶中，用正己烷定容至刻度，得各成分浓度均为250 ng·mL-1的混合溶液，作为对照品混合储备液.
2.3 供试品溶液的制备
参考《中国药典》2010年版第一部制备方法[8]：取样品于60 ℃干燥4 h，剪碎.取约2 g(共9份)，精密称定，分别按照表1所用仪器、溶剂和方法提取1 h，全部样品浓缩至30 mL，放冷，用相应溶剂补足减失重量，然后加NaCl 6 g，超声10 min，如分层，取上项至50 mL锥形瓶中加适量NaSO4放置4 h，于40 ℃水浴上减压浓缩至近干，加少量正己烷如前反复操作至提取溶剂除净，用正己烷溶解并转移至10 mL具塞刻度离心管中，加入正己烷至6 mL刻度线.小心加入硫酸
1 mL，振摇1 min，离心(3 000转/分)10 min.量取上清液
2 mL，过滤即得.
2.4 线性关系考察
精密量取“2.2”项下的对照品混合储备液，各0、0.2、1、2、10和50 mL于6个50 mL容量瓶中，用正己烷定容至刻度，制成每毫升含有0、1、5、10、50和250 ng的对照品溶液.从中分别取1 μL注入气相色谱仪.以各色谱峰的峰面积为纵坐标，浓度为横坐标，计算回归方程和相关系数.有机氯农药混合对照品溶液在0-250 ng·mL-1线性关系良好，如表2.
2.5 检测限
按照上述供试品制备的方法制备不含药材的空白溶液，精密吸取空白溶液、浓度为1 ng·mL-1的有机氯混合对照品溶液各1 μL注入气相色谱仪，测得8种有机氯农药的最低检测限均在0.01×10-6～0.05×10-6范围内.
2.6 精密度试验
取50 ng·mL-1的对照品混合液连续进6次，方法精密度的峰面积RSD(%)值分别为：α-BHC:1.36、β-BHC：1.92、γ-BHC：1.12、δ-BHC：1.85、P.P′-DDT：1.64、O.P′-DDT：1.17、P.P′-DDD：0.98、P.P′-DDT：1.95，结果显示该方法的精密度符合要求.
2.7 重复性试验
按照“2.3”项下的索氏提取法(乙醇为溶剂)进行提取，制得供试品溶液6份，平行测定肾茶药材中有机氯的残留量，结果肾茶中的α-BHC、β-BHC、γ-BHC、δ-BHC、P.P′-DDT、O.P′-DDT、P.P′-DDD、P.P′-DDT峰面积RSD(%)值均<5.0%,表明该方法具有一定的重复性且重复性符合要求.
2.8 稳定性试验
取50 ng·mL-1的对照品混合溶液在0、6、12、18、24和48 h进行测定，方法稳定性的峰面积RSD(%)值分别为：α-BHC：1.62%、β-BHC:1.54%、γ-BHC:2.16%、δ-BHC:2.25%、P.P′-DDT:1.68%、O.P′-DDT:2.21%、P.P′-DDD：1.24%、P.P′-DDT:2.15%，结果显示该方法的稳定性符合要求.
2.9 加样回收实验
按照“2.3”项下的索氏提取法(乙醇为溶剂)进行提取，制得供试品溶液6份，分
别加入50 ng·mL-1对照品，分别取1 μL注入气相色谱仪中，测得含量并计算回
收率，RSD(%)值均<10.0%，结果如表2.
2.10 样品测定
将肾茶药材按上述供试品溶液的制备方法进行处理，平行处理2次，取1 μL注入气相色谱仪中，每份样品测定3次，结果分析见表3.
实验建立了肾茶中有机氯农药六六六(BHC)和滴滴涕(DDT)残留量的弹性毛细血管
气相色谱分析方法.从样品的测定分析结果看，肾茶药材中有机氯农药BHC的2种异构体均有检出，总量在25 ng·mL-1(=0.025 mg/L)以下，远小于国家药典规定
的限量BHC≤0.20 mg/L的要求.说明西双版纳产肾茶使用的安全性较高.
2010版《中国药典》中规定了有机氯类农药残留量的测定方法，方法中供试品的提取方法为加水20 mL浸泡过夜，精密加丙酮40 mL，称定重量，超声处理30
分钟.本实验通过对三种有机溶剂(石油醚、丙酮、乙醇)和三种提取方法(加热回流、索氏提取、超声提取)进行比较，发现采用索氏提取法且乙醇为提取溶剂时提取效
率较高，这可能是因为乙醇溶液不但有一定的脂溶性，而且对于干燥样品渗透性比较好.实验最开始农药混合对照品溶液用石油醚(60～90 ℃)配制，由于该溶液是混合的烃类化合物，在制作标准曲线时，浓度较低的1 ng·mL-1对照品溶液的谱图
干扰过多，后改用正己烷配制溶液，图谱明显较清晰.为今后研究其他中药材中的
有机氯农药残留提供了一定的参考.。