含乌头类生物碱药物的质量分析与评价

含乌头类生物碱药物的质量分析与评价
目的对含乌头类生物碱药物虎力散胶囊中的乌头碱限量进行检查并测量其含量，评价分析其药物质量。

方法采用薄层色谱法对虎力散胶囊中乌头碱限量进行检查，利用HPLC法测定其乌头碱含量。

结果该薄层色谱法斑点清晰，分离度好，虎力散胶囊的3个批次限量检查均符合质量要求；乌头碱在0.87～4.26μg/mL范围，进样量与峰面积具有良好的线性关系（Y=9789.45X+7892.45，r=0.997）且精密性（RSD=0.65%）、重现性（RSD=0.78%）、稳定性（RSD=0.58%）与回收率（100.21%，平均RSD值为1.05%）较好。

结论两种法简便、快速，能够对虎力散胶囊药物质量检测与控制提供科学依据。

标签：薄层色谱法；高效液相色谱；虎力散胶囊；乌头碱；含量
虎力散胶囊具有驱风除湿、行瘀、消肿定痛的功效，其中含有乌头碱药物成分。

乌头碱具有强心、抗炎镇痛等多种药理活性，但也具有强毒性[1]。

为了对药物质量进行检测与控制，其乌头碱含量是关键的指标。

为了保障含乌头类生物碱药物虎力散胶囊剂的质量及患者用药安全，本文薄层色谱法对其乌头碱限量检查，利用HPLC法测定其乌头碱含量，对其进行药物质量分析与评价，报道如下。

1 仪器与试药
1.1仪器BSA223S-CW赛多利斯电子天平（北京晨曦勇创科技有限公司），ZF-2型三用紫外仪（上海市安亭电子仪器厂），KQ-600DB数控超声波清洗机（河南兄弟仪器设备有限公司），电热恒温水浴锅（龙口市先科仪器公司），LC-l0A VP 高效液相色谱仪、SPD10A VP检测器、LCsolution液相工作站均为岛津公司产。

1.2试药虎力散胶囊（云南运河药业有限公司，批号110238、090904、110102），乌头碱对照品（中国药品生物制品检定所，批号110720-200410），三乙胺、甲醇为色谱纯（Fisher公司），水为高纯水，硅胶G（青岛海洋化工厂），二氯甲烷、环己烷、二乙胺等试剂均为分析纯。

2 薄层色谱方法与结果
2.1溶液制备虎力散胶囊供试品溶液精密3批样品各0.5g，放置于50ml 碘量瓶中，加氨水2mL摇匀，使药物充分溶解，加乙醚20mL低温超声提取0.5h，滤过，对残渣加乙醚20mL低温超声提取0.5h，合并提取液，调pH值到9，合并乙醚液低温挥干，残渣用二氯甲烷溶解，制成0.5g/mL供试品溶液。

对照品溶液的制备精密称定乌头碱对照品5mg，放置于10ml容量瓶中，加二氯甲烷至10ml 刻度线处制成对照品溶液溶液0.5 mg/mL。

2.2薄层展开及结果根照薄层色谱法[2]《中国药典》2005年版一部附录ⅥB 试验，分别吸取3种腰息痛胶囊供试品溶液各10μL及对照品溶液5μL，点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯-二乙胺（12：8：1）为展开剂，展开，取出，晾干，观察在紫外光灯（365 nm）、稀碘
化铋钾试液+碘蒸汽熏蒸下图示。

结果紫外光下，乌头碱无斑点，3种供试品的在斑点位置、大小、颜色基本相同，这说明供试品相近（如图1）；稀碘化铋钾试液+碘蒸汽熏蒸下的图像更加清晰，对照品出现斑点，位置于供试品不同，符合限量要求（如图2）。

3 HPLC方法与结果
3.1色谱条件Kromasil C18色谱柱（250mm×
4.6mm，5um），以甲醇-0.1%三乙胺（70：30）为流动相，检测波长230nm，流速为1ml/min，柱温25℃，分离度均大于1.5，理论塔板数均不低于3000。

3.2供试品溶液、阴性对照溶液与对照品溶液的制备称取虎力散胶囊适量约2.5g，置250ml具塞锥形瓶，精密加乙醚50 mL及10%氨溶液2.5mL，摇匀，静置1h后过滤。

残渣用乙醚洗涤，洗至乌头碱沉淀反应，过滤，然后回收及合并濾液，于35℃水浴减压旋转蒸干乙醚及氨，残渣加入甲醇溶解，转移至10 mL 量瓶中，并加甲醇稀释至刻度，即为供试品溶液[3]。

阴性对照溶液的制备是按处方比例，配置不含乌头碱的溶液，按照供试品溶液方法制备。

精密称取乌头碱对照品适量，加甲醇制成1mL含35ug的溶液，即得对照品溶液。

在3.1的色谱条件下，分别测定对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液的色谱图（如图3～5）。

3.3线性关系的考察精密量取乌头碱对照品储备溶液2，8，10，20μL，注入高效液相色谱仪，测定其峰面积积分值。

以进样量X（μg）为横坐标，以Y 表示峰面积，绘制标准曲线，可得Y=9789.45X+7892.45，r=0.997，线性范围：0.87～
4.26μg/mL，进样量与峰面积具有良好的线性关系。

3.4精密度试验精密取乌头碱对照品溶液，按照相同的条件重复进样6次，10μl/次。

测得乌头碱的RSD值为0.65%。

3.5重复试验精密取同一批号的供试品溶液（批号110238）测定6次，进样12μL，测定峰面积值并计算含量值。

结果乌头碱含量的RSD值为0.78%，重复性良好。

3.6稳定试验精密吸取同一批号的供试品溶液（批号110238）10uL，重复进样6次，4h/次，测得乌头碱峰面积RSD分别为0.58%，说明供试品溶液在48h 内基本稳定。

3.7加样回收试验取已知含量的本品（批号110238）3g、4g、5g各3份，按照3.2中的供试品溶液制备方法制备，按照3.1的色谱条件测定乌头碱的含量，结果9次测定的平均回收率为100.21%，平均RSD值为1.05%，回收率良好。

3.8样品测定根据3.2方法制备样品及对照品溶液，精密吸取样品及对照品溶液各15uL，注入高效液相色谱仪对四批样品讲行测定（见表1）。

3 讨论
虎力散胶囊收载于《卫生部药品标准·中药成方制剂》第十册，由制草乌、三七、断节参、白云参等药材组成，其中含有制草乌等毒性药材。

《中华人民共和国药典》中对虎力散胶囊等药物的乌头碱限量做出了明确的规定，因为含有制草乌等毒性药材中的毒性主要来自乌头碱，口服乌头碱2 mg即可以致成人死亡[1-3]。

一般来说，乌头碱含量是虎力散胶囊质量的重要指标。

目前对其乌头碱限量的研究较少，本文采用薄层色谱法对虎力散胶囊的乌头碱含量进行研究。

结果显示，虎力散胶囊的三种样品相近，符合我国乌头碱的限量要求。

另外，稀碘化铋钾试液+碘蒸汽熏蒸下的图像较紫外线的图像更加清晰可见，可用于乌头碱的限量研究。

利用HPLC法测定药物中成分的含量研究较多，但是其在虎力散胶囊乌头碱含量较少。

本文利用HPLC法测定虎力散胶囊乌头碱含量实验，其设计科学合理，实验的精密性、稳定性、重复性及回收率均达到实验要求的标准。

本文测的虎力散胶囊中的乌头碱含量为0.68%～0.69%，含量较低稳定，符合要求。

参考文献：
[1]王东青，张亚丽.应高度重视乌头类中药的毒副作用[J].国医论坛，2009，24（2）：37-38.
[2]招荣鑑，孙亦群，彭彤.祛风通络散中大黄与两面针的薄层色谱鉴别及酯型生物碱的限量检查[J].时珍国医国药，2006，17（7）：1258-1259.
[3]凌志敏，李娟，曾翠梅等.虎力散胶囊的质量标准研究[J].中莲为导最，2009，4（15）：85-87.。