HBV-ACLF患者血清Beclin1、LC3-Ⅱ的表达水平及其临床意义

ＨＢＶ ＡＣＬＦ患者血清Ｂｅｃｌｉｎ１、ＬＣ３ Ⅱ的
表达水平及其临床意义
罗羽鸥，杨晓玲，李　川
（四川大学华西医院肝脏外科，四川成都６１００４１）
ＤＯＩ：１０．１１７４８／ｂｊｍｙ．ｉｓｓｎ．１００６－１７０３．２０２０．０４．０１１收稿日期：２０１９ １２ ０９；修回日期：２０２０ ０１ １９基金项目：四川省科技厅项目（编号：２０１９ＹＪ０１４９）
作者简介：罗羽鸥（１９８４—），女。

Ｔｅｌ：１５２０８１７３４１１；Ｅ ｍａｉｌ：ｈｕａｎｇ＿２０１９０７２６＠１６３．ｃｏｍ
摘要：目的　探究乙型肝炎相关性慢加急性肝衰竭（ＨＢＶ ＡＣＬＦ）患者血清自噬相关蛋白（Ｂｅｃｌｉｎ１）、微管相关蛋白１轻链３ Ⅱ（ＬＣ３ Ⅱ）的表达水平及其与ＨＢＶ ＤＮＡ载量、肝病严重程度及预后的关系。

方法　回顾性分析２０１６年１月至２０１９年１月本院诊治的１０２例ＨＢＶ ＡＣＬＦ患者（研究组）和同期入院健康体检的志愿者６８名（对照组）的临床资料，酶联免疫吸附法检测血清Ｂｅｃｌｉｎ１、ＬＣ３ Ⅱ表达水平，比较两组血清Ｂｅｃｌｉｎ１、ＬＣ３ Ⅱ的表达水平，并分析研究组不同预后的患者血清Ｂｅｃｌｉｎ１、ＬＣ３ Ⅱ表达水平、ＨＢＶ ＤＮＡ载量、肝病严重程度［终末期肝病模型（ＭＥＬＤ）评估］，分析血清Ｂｅｃｌｉｎ１、ＬＣ３ Ⅱ的表达水平及其与ＨＢＶ ＤＮＡ载量、肝病严重程度的关系。

结果　研究组血清Ｂｅｃｌｉｎ１、ＬＣ３ Ⅱ表达水平明显高于对照组（Ｐ＜０．０５），研究组存活者血清Ｂｅｃｌｉｎ１、ＬＣ３ Ⅱ表达水平、ＨＢＶ ＤＮＡ载量、ＭＥＬＤ评分、Ｔｂｉｌ与死亡者比较明显降低，差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）；二元Ｌｏｇｉｓｔｉｃ回归分析显示Ｂｅｃｌｉｎ１、ＬＣ３ Ⅱ表达水平、ＨＢＶ ＤＮＡ载量、肝脏严重程度是ＨＢＶ ＡＣＬＦ患者预后的影响因素（Ｐ＜０．０５）。

偏相关分析提示血清Ｂｅｃｌｉｎ１、ＬＣ３ Ⅱ水平与ＨＢＶ ＤＮＡ载量、ＭＥＬＤ评分均呈明显的正相关（Ｐ＜０．０５）。

结论　ＨＢＶ ＡＣＬＦ患者血清Ｂｅｃｌｉｎ１、ＬＣ３ Ⅱ的表达水平呈明显升高趋势，且Ｂｅｃｌｉｎ１、ＬＣ３ Ⅱ的表达水平与ＨＢＶ ＤＮＡ载量、肝脏严重程度呈明显的正相关，积极监测ＨＢＶ ＡＣＬＦ患者Ｂｅｃｌｉｎ１、ＬＣ３ Ⅱ水平或可为疾病预后评估提供参考。

关键词：ＨＢＶ ＡＣＬＦ；　Ｂｅｃｌｉｎ１；　ＬＣ３ Ⅱ；　ＨＢＶ ＤＮＡ载量；　相关性中图分类号：Ｒ５１２．６＋２ 文献标识码：Ａ
ＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎＬｅｖｅｌｓｏｆＳｅｒｕｍＢｅｃｌｉｎ１ａｎｄＬＣ３ ＩＩｉｎＰａｔｉｅｎｔｓ
ｗｉｔｈＨＢＶ ＡＣＬＦａｎｄＴｈｅｉｒＣｌｉｎｉｃａｌＳｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅｓ
ＬＵＯＹｕｏｕ，ＹＡＮＧＸｉａｏｌｉｎｇ，ＬＩＣｈｕａｎ
（ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＬｉｖｅｒＳｕｒｇｅｒｙ，ＷｅｓｔＣｈｉｎａＨｏｓｐｉｔａｌ，ＳｉｃｈｕａｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈｅｎｇｄｕ６１００４１，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＯｂｊｅｃｔｉｖｅＴｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌｓｏｆｓｅｒｕｍａｕｔｏｐｈａｇｙ ｒｅｌａｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎ（Ｂｅｃｌｉｎ１）ａｎｄｍｉｃｒｏｔｕｂｕｌｅ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎ１ｌｉｇｈｔｃｈａｉｎ３ ＩＩ（ＬＣ３ ＩＩ）ｉｎｐａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈｈｅｐａｔｉｔｉｓＢｖｉｒｕｓａｓｓｏｃｉａｔｅｄａｃｕｔｅ ｏｎ ｃｈｒｏｎｉｃｌｉｖｅｒｆａｉｌｕｒｅ（ＨＢＶ ＡＣＬＦ），ａｎｄｔｈｅｉｒｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｓｗｉｔｈＨＢＶ ＤＮＡｌｏａｄ，ｔｈｅｓｅｖｅｒｉｔｙｏｆｌｉｖｅｒｄｉｓｅａｓｅａｎｄｔｈｅｐｒｏｇｎｏｓｉｓ．ＭｅｔｈｏｄｓＴｈｅｃｌｉｎｉｃａｌｄａｔａｏｆ１０２ｐａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈＨＢＶ ＡＣＬＦ（ｔｈｅｓｔｕｄｙｇｒｏｕｐ）ｗｈｏｗｅｒｅａｄｍｉｔｔｅｄｔｏｔｈｅｈｏｓｐｉｔａｌｂｅｔｗｅｅｎＪａｎｕａｒｙ，２０１６ａｎｄＪａｎｕａｒｙ，２０１９ａｎｄ６８ｈｅａｌｔｈｙｖｏｌｕｎｔｅｅｒｓ（ｔｈｅｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ）ｗｈｏｒｅｃｅｉｖｅｄｈｅａｌｔｈｅｘａｍｉｎａｔｉｏｎｄｕｒｉｎｇｔｈｅｓａｍｅｐｅｒｉｏｄｗｅｒｅｒｅｔｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙａｎａｌｙｚｅｄ．ＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌｓｏｆｓｅｒｕｍＢｅｃｌｉｎ１ａｎｄＬＣ３ ＩＩｗｅｒｅｃｏｍｐａｒｅｄｂｅｔｗｅｅｎｔｈｅｔｗｏｇｒｏｕｐｓ．ＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌｓｏｆｓｅｒｕｍＢｅｃｌｉｎ１ａｎｄＬＣ３ ＩＩ，ＨＢＶ ＤＮＡｌｏａｄａｎｄｓｅｖｅｒｉｔｙｏｆｌｉｖｅｒｄｉｓｅａｓｅ［ＭｏｄｅｌＦｏｒＥｎｄＳｔａｇｅＬｉｖｅｒＤｉｓｅａｓｅ（ＭＥＬＤ）］ｉｎｐａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈｄｉｆｆｅｒｅｎｔｐｒｏｇｎｏｓｉｓｉｎｔｈｅｓｔｕｄｙｇｒｏｕｐｗｅｒｅａｎａｌｙｚｅｄ．ＰａｒｔｉａｌｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔａｎａｌｙｓｉｓｗａｓｐｅｒｆｏｒｍｅｄｔｏａｎａｌｙｚｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌｓｏｆＢｅｃｌｉｎ１ａｎｄＬＣ３ ＩＩａｎｄｔｈｅｉｒｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｓｗｉｔｈＨＢＶ ＤＮＡｌｏａｄａｎｄｓｅｖｅｒｉｔｙｏｆｌｉｖｅｒｄｉｓｅａｓｅ．ＲｅｓｕｌｔｓＴｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌｓｏｆＢｅｃｌｉｎ１ａｎｄＬＣ３ ＩＩｉｎｔｈｅｓｔｕｄｙｇｒｏｕｐｗｅｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｈｉｇｈｅｒｔｈａｎｔｈｏｓｅｉｎｔｈｅｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ（Ｐ＜０．０５）．ＴｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌｓｏｆＢｅｃｌｉｎ１ａｎｄＬＣ３ ＩＩ，ＨＢＶ ＤＮＡｌｏａｄ，ＭＥＬＤｓｃｏｒｅａｎｄＴＢｉｌｏｆｓｕｒｖｉｖｏｒｓｉｎｔｈｅｓｔｕｄｙｇｒｏｕｐｗｅｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｈｉｇｈｅｒｔｈａｎｔｈｏｓｅｏｆｔｈｅｄｅａｔｈｇｒｏｕｐ（Ｐ＜０．０５）．Ｍｕｌｔｉｖａｒｉａｔｅｌｏｇｉｓｔｉｃｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ
６
８５ＬａｂｅｌｅｄＩｍｍｕｎｏａｓｓａｙｓ＆ＣｌｉｎＭｅｄ，Ａｐｒ．２０２０，Ｖｏｌ．２７，Ｎｏ．４
ａｎａｌｙｓｉｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌｓｏｆＢｅｃｌｉｎ１ａｎｄＬＣ３ ＩＩ，ＨＢＶ ＤＮＡｌｏａｄａｎｄｔｈｅｓｅｖｅｒｉｔｙｏｆｌｉｖｅｒｄｉｓｅａｓｅｗｅｒｅｔｈｅｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃｆａｃｔｏｒｓｏｆｐａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈＨＢＶ ＡＣＬＦ（Ｐ＜０．０５）．ＰａｒｔｉａｌｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎａｎａｌｙｓｉｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｌｅｖｅｌｓｏｆｓｅｒｕｍＢｅｃｌｉｎ１ａｎｄＬＣ３ ＩＩｗｅｒｅｐｏｓｉｔｉｖｅｌｙｃｏｒｒｅｌａｔｅｄｗｉｔｈＨＢＶ ＤＮＡｌｏａｄａｎｄＭＥＬＤｓｃｏｒｅ（Ｐ＜０．０５）．ＣｏｎｃｌｕｓｉｏｎＴｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌｓｏｆＢｅｃｌｉｎ１ａｎｄＬＣ３ ＩＩｉｎｐａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈＨＢＶ ＡＣＬＦａｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｅｌｅｖａｔｅｄ，ａｎｄｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌｓｏｆＢｅｃｌｉｎ１ａｎｄＬＣ３ ＩＩａｒｅｐｏｓｉｔｉｖｅｌｙｃｏｒｒｅｌａｔｅｄｗｉｔｈＨＢＶ ＤＮＡｌｏａｄａｎｄｔｈｅｓｅｖｅｒｉｔｙｏｆｌｉｖｅｒｄｉｓｅａｓｅ．ＡｃｔｉｖｅｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇｔｈｅｌｅｖｅｌｓｏｆＢｅｃｌｉｎ１ａｎｄＬＣ３ ＩＩｉｎｐａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈＨＢＶ ＡＣＬＦｃｏｕｌｄｐｒｏｖｉｄｅａｒｅｆｅｒｅｎｃｅｆｏｒｔｈｅｅａｒｌｙｄｉａｇｎｏｓｉｓａｎｄｐｒｏｇｎｏｓｉｓａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ＨＢＶ ＡＣＬＦ；　Ｂｅｃｌｉｎ１；　ＬＣ３ ＩＩ；　ＨＢＶ ＤＮＡｌｏａｄ；　Ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ
乙型肝炎相关性慢加急性肝衰竭（ｈｅｐａｔｉｔｉｓＢｖｉｒｕｓ ｃｈｒｏｎｉｃｐｌｕｓａｃｕｔｅｌｉｖｅｒｆａｉｌｕｒｅ，ＨＢＶ ＡＣＬＦ）是我国最常见肝衰竭类型之一，是指在慢性乙型肝炎（ｃｈｒｏｎｉｃｈｅｐａｔｉｔｉｓＢ，ＣＨＢ）或乙型肝炎相关肝硬化（ｈｅｐａｔｉｔｉｓＢｒｅｌａｔｅｄｌｉｖｅｒｃｉｒｒｈｏｓｉｓ，ＨＢＶ ＬＣ）的基础上短期内急性加重引起的，可表现为极度乏力，黄疸急剧加深，凝血功能障碍等［１］。

目前对其治疗尚无特效药，病死率高达６０％～８０％［２］，早期诊断和病情评估成为ＨＢＶ ＡＣＬＦ救治的关键。

乙肝病毒的脱氧核糖核酸（ｈｅｐａｔｉｔｉｓＢｖｉｒｕｓ ｄｅｏｘｙｒｉｂｏｎｕｃｌｅｉｃａｃｉｄ，ＨＢＶ ＤＮＡ）是ＨＢＶ感染最直接、特异性和灵敏性均较高的指标，ＨＢＶ ＤＮＡ载量越高提示病毒传染性越强［３］。

近年来自噬成为学术界研究的焦点，自噬相关蛋白Ｂｅｃｌｉｎ１与Ｐ１３Ｋ、Ａｔｇ１４聚集为三聚体复合物，三聚体复合物会不断招募有关核心蛋白以启动自噬，在自噬延长阶段，于Ａｔｇ４的参与下ＬＣ３前体被加工成ＬＣ３ Ｉ（有脂溶性），而在Ａｔｇ７与Ａｔｇ３作用下ＬＣ３ Ｉ将与ＰＥ结合以形成微管相关蛋白１轻链３ Ⅱ（ｌｉｇｈｔｃｈａｉｎ３ Ⅱ，ＬＣ３ Ⅱ），Ｂｅｃｌｉｎ１、ＬＣ３ Ⅱ是目前临床中评估机体自噬水平的常用指标，有研究发现自噬在慢性肝炎、酒精性脂肪肝以及肝硬化等肝脏疾病的病理过程中起到重要作用［４ ５］。

但目前国内关于ＨＢＶ ＡＣＬＦ患者血清Ｂｅｃｌｉｎ１、ＬＣ３ Ⅱ表达水平及其与ＨＢＶ ＤＮＡ载量、肝病严重程度及预后关系的研究尚处于初步探索阶段，为此本文展开临床回顾性分析，旨在为ＨＢＶ ＡＣＬＦ的早期诊治提供参考。

材料和方法
１　一般资料
回顾性分析２０１６年１月至２０１９年１月本院诊治的１０２例ＨＢＶ ＡＣＬＦ患者（研究组）和同期入院健康体检的志愿者６８名（对照组）的临床资料。

研究组１０２例，男性６８例、女性３４例，年龄４２．２±２．３岁，对照组６８名，男性４５例、女性２３例，年龄４３．０±２．４岁。

两组一般资料比较差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５），有一定可比性。

纳入标准：①临床资料和随访资料完整；②参照《慢性乙型肝炎治疗共识修订》［６］、《肝衰竭诊疗指南》［７］标准诊断为ＨＢＶ ＡＣＬＦ；③健康志愿者既往无肝炎、肝衰竭及肝硬化等疾病史，且未携带乙肝病毒、身心健康。

排除标准：①合并艾滋病毒感染或其他类型病毒交叉感染；②存在遗传代谢性肝病或药物性肝损害及自身免疫性疾病；合并恶性肿瘤；存在心、肝及肾等重要脏器障碍。

２　方法
（１）临床资料采集：收集入组研究对象性别、年龄、实验室指标［总胆红素（ｔｏｔａｌｂｉｌｉｒｕｂｉｎ，ＴＢｉｌ）、丙氨酸转氨酶（ａｌａｎｉｎｅｔｒａｎｓａｍｉｎａｓｅ，ＡＬＴ）、天冬氨酸转氨酶（ａｓｐａｒｔａｔｅｔｒａｎｓａｍｉｎａｓｅ，ＡＳＴ）］、白蛋白（ａｌｂｕ ｍｉｎ，ＡＬＢ）、凝血功能指标［凝血酶原时间（ｐｒｏｔｈｒｏｍ ｂｉｎｔｉｍｅ，ＰＴ）、活化部分凝血酶时间（ａｃｔｉｖａｔｅｄｐａｒｔｉａｌｔｈｒｏｍｂｉｎｔｉｍｅ，ＡＰＴＴ）］等。

（２）血清Ｂｅｃｌｉｎ１、ＬＣ３ Ⅱ的表达水平检测：采集入组研究对象静脉血５ｍＬ，常规离心后采集血清留存于ＥＰ管中低温保存待测，酶联免疫吸附法检测血清Ｂｅｃｌｉｎ１、ＬＣ３ Ⅱ表达水平，试剂盒及抗人Ｂｅｃｌｉｎ１单克隆抗体、抗人ＬＣ３ Ⅱ单克隆抗体均购自江莱生物科技公司。

（３）ＨＢＶ ＤＮＡ载量检测以及肝病严重程度评估：借助于美国ＡＢＩ ７３００荧光聚合酶链反应仪检测研究组患者ＨＢＶ ＤＮＡ载量（检测下限为１０００ｃｏｐｉｅｓ／ｍＬ），试剂盒由湖南圣湘生物科技公司提供；肝脏损伤严重程度采用终末期肝病模型（ｍｏｄｅｌｏｆｅｎｄ ｓｔａｇｅｌｉｖｅｒｄｉｓｅａｓｅ，ＭＥＬＤ）评估，ＭＥＬＤ评分＝３．８ｌｎＴＢｉｌ（ｍｇ／ｄＬ）＋１１．２ｌｎ（ＩＮＲ）＋９．６ｌｎＣＲＥ＋６．４×病因（酒精性或胆汁性为０，其他为１），最后所得数值取整数。

３　观察指标
①研究组、对照组血清Ｂｅｃｌｉｎ１、ＬＣ３ Ⅱ表达水平比较；②研究组不同预后者血清Ｂｅｃｌｉｎ１、ＬＣ３ Ⅱ表达水平、ＨＢＶ ＤＮＡ载量、ＭＥＬＤ评分比较，随访资料显示研究组患者入院后３个月６７例存活，３５例死亡，比较不同预后患者入组即刻的Ｂｅｃｌｉｎ１、ＬＣ３ Ⅱ表达水平、ＨＢＶ ＤＮＡ载量、ＭＥＬＤ评分；③血清
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８
５
标记免疫分析与临床　２０２０年４月第２７卷第４期
Ｂｅｃｌｉｎ１、ＬＣ３ Ⅱ水平与ＨＢＶ ＤＮＡ载量、ＭＥＬＤ评分的相关性分析。

４　统计学处理
采用ＳＰＳＳ２０．０软件分析处理数据，两组血清Ｂｅｃｌｉｎ１、ＬＣ３ Ⅱ表达水平以ｘ±ｓ表示，组间比较采用独立样本ｔ检验，性别差异采用χ２或Ｆｉｓｈｅｒ检验，血清Ｂｅｃｌｉｎ１、ＬＣ３ Ⅱ表达水平与ＨＢＶ ＤＮＡ载量、ＭＥＬＤ评分间的关系采用Ｐｅａｒｓｏｎ分析，二元Ｌｏｇｉｓｔｉｃ回归分析ＨＢＶ ＡＣＬＦ患者预后的影响因素。

以Ｐ＜０．０５为差异有统计学意义。

结 果
１　研究组、对照组血清Ｂｅｃｌｉｎ１、ＬＣ３ Ⅱ表达水平比较
研究组血清Ｂｅｃｌｉｎ１、ＬＣ３ Ⅱ表达水平明显高于对照组（Ｐ＜０．０５），见表１。

研究组ＨＢＶ ＤＮＡ载量为３．９２±１．１６ｃｏｐｉｅｓ／ｍＬ，ＭＥＬＤ评分为８４．７８±８．９９分。

表１　研究组、对照组血清Ｂｅｃｌｉｎ１、ＬＣ３ Ⅱ表达水平
比较（ｎｇ／ｍＬ，ｘ±ｓ）
组别Ｂｅｃｌｉｎ１ＬＣ３ Ⅱ研究组（ｎ＝１０２）１１．３５±２．６５６８．５７±５．７６
对照组（ｎ＝６８）８．１４±１．０４４５．４２±３．９８ｔ值９．５０５２８．８５４
Ｐ值＜０．００１＜０．００１
２　不同预后者血清Ｂｅｃｌｉｎ１、ＬＣ３ Ⅱ表达水平、ＨＢＶ ＤＮＡ载量、ＭＥＬＤ评分及一般资料
比较
研究组存活者血清Ｂｅｃｌｉｎ１、ＬＣ３ Ⅱ表达水平、ＨＢＶ ＤＮＡ载量、ＭＥＬＤ评分、Ｔｂｉｌ与死亡者比较明显降低，差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５），两组其他指标比较差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５），见表２。

二元Ｌｏｇｉｓｔｉｃ回归分析提示，Ｂｅｃｌｉｎ１、ＬＣ３ Ⅱ表达水平、ＨＢＶ ＤＮＡ载量、肝脏严重程度是ＨＢＶ ＡＣＬＦ患者预后的影响因素（Ｐ＜０．０５），见表３。

表２　不同预后者血清Ｂｅｃｌｉｎ１、ＬＣ３ Ⅱ、ＨＢＶ ＤＮＡ载量、ＭＥＬＤ评分及一般资料比较（ｘ±ｓ）
组别
Ｂｅｃｌｉｎ１
（ｎｇ／ｍＬ）
ＬＣ３ Ⅱ
（ｎｇ／ｍＬ）
ＨＢＶ ＤＮＡ载量
（×１０３ｃｏｐｉｅｓ／ｍＬ）
ＭＥＬＤ评分
（分）
ＴＢｉｌ
（μｍｏｌ／Ｌ）
ＡＬＴ
（Ｕ／Ｌ）
ＡＳＴ
（Ｕ／Ｌ）
年龄
（岁）
存活者（ｎ＝６７）９．２０±１．８２６５．４１±４．４１３．７１±１．２４７９．２５±８．１４２９９．１６±５６．１２３６２．１４±８９．２５３２２．６５±８４．１６４１．９８±２．２４死亡者（ｎ＝３５）１３．４１±２．９１７１．５６±５．８２４．６５±１．０１９０．１４±１０．０６３９８．１４±６５．１８２９９．３５±５９．２６２５８．９９±５２．４８４２．４１±２．６８ｔ值８．９６９５．９７６３．８６２５．９０７７．９９６１．６７６１．７５４０．８６０Ｐ值＜０．００１＜０．００１＜０．００１＜０．００１＜０．００１０．０９７０．０８３０．３９２组别性别（男／女）ＡＬＢ（ｇ／Ｌ）ＰＴ（ｓ）ＡＰＴＴ（ｓ）尿素（ｍｍｏｌ／Ｌ）血清肌酐（μｍｏｌ／Ｌ）存活者（ｎ＝６７）４８／２９２０．０１±２．５３１６．９８±１．６３４８．６４±４．３６１０．７４±１．０９７８．９９±９．０１
死亡者（ｎ＝３５）２０／１５１９．６５±１．６３１７．０６±１．７８５０．３４±５．０９１１．０８±１．１５７９．６５±８．２４χ２值／ｔ值０．２７２０．７６２０．２２８１．７６４１．４６８０．３６１Ｐ值０．６０２０．４４８０．８２００．０８１０．１４５０．７１９
表３　ＨＢＶ ＡＣＬＦ患者预后影响因素的二元Ｌｏｇｉｓｔｉｃ回归分析
变量βＷａｌｄχ２Ｐ值ＯＲ（９５％ＣＩ）
Ｂｅｃｌｉｎ１０．５２１７．２６９０．００７２．１０１（１．２４７～３．８５２）
ＬＣ３ Ⅱ０．６１９５．９３２０．０１５１．９３３（０．９０１～２．４２５）ＨＢＶ ＤＮＡ载量０．３２１６．１６９０．０１３１．１０２（１．０１６～１．３８２）
肝脏严重程度０．５１９７．８８２０．００５１．４３３（１．０１２～２．２３８）
３　血清Ｂｅｃｌｉｎ１、ＬＣ３ Ⅱ水平与ＨＢＶ ＤＮＡ载量、ＭＥＬＤ评分的相关性分析
Ｐｅａｒｓｏｎ相关分析（如分析血清Ｂｅｃｌｉｎ１与ＨＢＶ ＤＮＡ载量的关系时需控制ＬＣ３ Ⅱ水平、ＭＥＬＤ评分的影响）提示血清Ｂｅｃｌｉｎ１、ＬＣ３ Ⅱ水平与ＨＢＶ ＤＮＡ载量、ＭＥＬＤ评分均呈明显的正相关（ｒ＝０．４３４、０．６６１；ｒ＝０．４００、０．４４３，Ｐ＜０．０５），见表４和图１～图４。

表４　血清Ｂｅｃｌｉｎ１、ＬＣ３ Ⅱ水平与ＨＢＶ ＤＮＡ载量、
ＭＥＬＤ评分的相关性分析
组别
ＨＢＶ ＤＮＡ载量ＭＥＬＤ评分
ｒ值Ｐ值ｒ值Ｐ值Ｂｅｃｌｉｎ１０．４３４＜０．００１０．６６１＜０．００１ＬＣ３ Ⅱ０．４００＜０．００１０．４４３＜０．００１
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５ＬａｂｅｌｅｄＩｍｍｕｎｏａｓｓａｙｓ＆ＣｌｉｎＭｅｄ，Ａｐｒ．２０２０，Ｖｏｌ．２７，Ｎｏ．４
图１　血清Ｂｅｃｌｉｎ１水平与ＨＢＶ ＤＮＡ
载量的相关性图２　血清Ｂｅｃｌｉｎ１水平与ＭＥＬＤ
评分的相关性
图３　血清ＬＣ３ Ⅱ水平与Ｈ
ＢＶ ＤＮＡ载量的相关性讨 论
据统计ＨＢＶ ＡＣＬＦ患者发病三个月内病死率约
为４３．１％，较其他慢性病死亡率高１５倍［８］
，本病发病与感染ＨＢＶ病毒密切相关，研究指出ＨＢＶ ＤＮ
Ａ
图４　血清ＬＣ３ Ⅱ水平与Ｍ
ＥＬＤ评分的相关性载量越高预示患者死亡风险越高，而ＭＥＬＤ可有效
预估Ｈ
ＢＶ ＡＣＬＦ患者短、中期的病死率，其评分越高患者预后越差［９］
；近年来随着国内外学者对自噬研究的不断深入，研究证实自噬在诱导细胞死亡、维持细胞内环境稳态中的作用至为重要，其中定位于染色体１７ｑ２１的Ｂｅｃｌｉｎ１编码蛋白，是最早发现参与自噬过程中的抑癌基因，文献报道Ｂｅｃｌｉｎ１与多种辅因
子相结合以调节Ｖ
ｐｓ ３４活性，最终形成Ｂｅｃｌｉｎ１ Ｖｐｓ３４ Ｖｐｓ１５三聚体从而启动自噬，目前Ｂｅｃｌｉｎ１被
视为启动自噬过程的有效标志物［１０ １１］
；ＬＣ３ Ⅱ是一种位于自噬双层膜上的有关蛋白，研究发现ＬＣ３ Ⅱ是参与自噬体延长及伸展的关键蛋白，其与Ｂｅｃｌｉｎ１
一样是现阶段反映自噬水平的最常用指标［１２］。

目前国内关于ＨＢＶ ＡＣＬＦ患者血清Ｂｅｃｌｉｎ１、ＬＣ３ Ⅱ水平与ＨＢＶ ＤＮＡ载量、肝脏严重程度的关系尚无统一定论，但我国对血清Ｂｅｃｌｉｎ１、ＬＣ３ Ⅱ水平、ＨＢＶ ＤＮＡ载量检测的技术较为成熟，因此本研究有一定可行性和临床指导意义。

本研究结果显示，研究组血清Ｂｅｃｌｉｎ１、ＬＣ３ Ⅱ表达水平明显高于对照组，提示ＨＢＶ ＡＣＬＦ患者自噬水平明显升高，ＨＢＶ ＡＣＬＦ发病中慢性炎症导致细胞内环境被改变，此外大量ＨＢＶ感染均可诱导细
胞内自噬的发生［１２］
，因而研究组血清Ｂｅｃｌｉｎ１、ＬＣ３
Ⅱ表达水平异常增高。

本研究还显示，
研究组中的存活者血清Ｂｅｃｌｉｎ１、ＬＣ３ Ⅱ表达水平、ＨＢＶ ＤＮＡ载量、ＭＥＬＤ评分、Ｔｂｉｌ与死亡者比较明显降低，且进一步二元Ｌｏｇｉｓｔｉｃ回归分析发现Ｂｅｃｌｉｎ１、ＬＣ３ Ⅱ表达水平、ＨＢＶ ＤＮＡ载量、肝脏严重程度是ＨＢＶ ＡＣＬＦ患者预后的影响因素，说明在ＨＢＶ ＡＣＬＦ患者中，自噬水平高低与ＨＢＶ ＤＮＡ载量、肝病严重程度及患
者死亡风险正相关［１３］。

而进一步相关分析提示，ＨＢＶ ＡＣＬＦ患者血清Ｂｅｃｌｉｎ１、ＬＣ３ Ⅱ水平与Ｈ
ＢＶ ９
８５标记免疫分析与临床　２０２０年４月第２７卷第４期
ＤＮＡ载量、ＭＥＬＤ评分均呈明显的正相关，表明ＨＢＶ ＡＣＬＦ患者ＨＢＶ ＤＮＡ载量越高、肝脏损伤程度越严重，机体自噬水平越高，ＨＢＶ ＤＮＡ载量越高表明病毒活跃性和传染性越强，而ＨＢＶ可诱导肝星状细胞变性坏死，引发细胞网状结构塌陷，随之肝脏正常结构将被破坏，加之肝脏损伤程度越高对其他的细胞组织血供的影响也越明显，导致机体自噬水平明显升高，表现为Ｂｅｃｌｉｎ１、ＬＣ３ Ⅱ水平越高［１４ １５］，因此ＨＢＶ ＡＣＬＦ患者血清Ｂｅｃｌｉｎ１、ＬＣ３ Ⅱ水平与ＨＢＶ ＤＮＡ载量、ＭＥＬＤ评分密切相关，为ＨＢＶ ＡＣＬＦ疾病诊断、病情评估和预后判断提供参考。

综上，ＨＢＶ ＡＣＬＦ患者Ｂｅｃｌｉｎ１、ＬＣ３ Ⅱ表达水平与ＨＢＶ ＤＮＡ载量、肝病严重程度紧密相关，Ｂｅｃｌｉｎ１、ＬＣ３ Ⅱ有望成为ＨＢＶ ＡＣＬＦ病情评估、预后判断的分子生物学标志物。

参考文献
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