尿素酶-过氧化物酶法
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尿素酶-过氧化物酶法
尿素酶-过氧化物酶法是一种用于检测尿素含量的化学反应方法。
其原理是利用尿素酶将尿素分解成氨和二氧化碳,然后利用过氧化物酶将氨转化成过氧化氢。
最后,通过测量反应体系中过氧化氢的含量,可以确定尿素的含量。
具体操作步骤如下:
1. 样品中加入尿素酶,在37℃下反应15分钟,使尿素分解成氨和二氧化碳。
2. 加入酚试剂,然后在37℃下反应15分钟,使酚与氨反应生成粉红色的亚酚。
3. 加入过氧化物酶,在室温下反应15分钟,使过氧化氢与亚酚反应,粉红色消退。
4. 在505nm波长下测量吸光度。
由于样品中其他成分不会干扰吸光度的测量,因此可以计算出尿素的含量。
需要注意的是,该方法仅适用于检测样品中的尿素含量,而不适用于检测尿素之外的其他含氮化合物。
此外,反应体系的酸碱度和温度等因素也会影响方法的灵敏度和准确性。
因此,在操作过程中需要注意控制这些因素。