PASM-Masson染色法在肾穿刺活检特殊染色中的应用与体会

PASM-Masson染色法在肾穿刺活检特殊染色中的应用与体
会
李敏;姚梅宏;曾玲;郑智勇
【期刊名称】《临床与实验病理学杂志》
【年(卷),期】2014(030)006
【总页数】2页(P693-694)
【关键词】PASM-Masson染色;特殊染色;肾穿刺活检
【作者】李敏;姚梅宏;曾玲;郑智勇
【作者单位】南京军区福州总医院病理科,福州350025;南京军区福州总医院病理科,福州350025;南京军区福州总医院病理科,福州350025;南京军区福州总医院病理科,福州350025
【正文语种】中文
【中图分类】R361.2
经皮肾穿刺活检病理诊断是当今肾脏病理学的重要组成部分，是肾脏疾病诊断必不可少的检查方法。

肾穿刺活检病理检查主要包括常规HE染色、特殊染色(PAS染色、PASM染色、Masson染色和刚果红染色)、免疫组化染色或免疫荧光染色以及电镜检查。

其中，特殊染色能直观地显示肾小球、肾小管、肾间质、血管及特殊蛋白的沉积等。

本科室总结20多年5万余例肾穿标本的染色经验，将PASM染色与Masson染色相结合［1］，简化步骤并取得优质的染色效果，有效提高临床标本的利用率，节省制片成本及劳动量，有助于临床病理诊断。

现将PASM-
Masson染色法在肾穿刺标本特殊染色中的应用及注意事项介绍如下。

1.1 材料南京军区福州总医院病理科每年共接收肾穿刺活检标本约4 000例，常
规行 HE、特殊染色(PAS、PASMMasson)、免疫组化染色及电镜检查。

1.2 试剂六胺银工作液的配制:蒸馏水20 ml+3%六次甲基四胺水溶液10 ml+5%硝酸银水溶液0.5 ml+5%四硼酸钠水溶液
2.5 ml，试剂现配现用(3%六次甲基四
胺水溶液和5%硝酸银水溶液于4℃冰箱保存)。

1.3 染色方法与步骤 (1)石蜡1 μm厚切片，常规脱蜡入水。

(2)2%过碘酸氧化15～20 min，流水稍洗，再用蒸馏水洗。

(3)浸入56～58℃预热的六胺银工作液
中30～40 min，20 min后将切片移入新的六氨银工作液中继续染色至组织着色，蒸馏水洗2 min×3次。

(4)0.2%氯化金水溶液调色1～2 min，显微镜下观察，至基膜呈明显黑色，蒸馏水洗2 min×3次。

(5)浸入0.25%硫代硫酸钠水溶液中1～2 min，自来水洗2 min×3次。

(6)Harrias苏木精染色5～10 min，自来水洗。

(7)1%盐酸水溶液分化数秒，自来水洗15 min。

(8)1%冰醋酸促染2～3 s，入Masson液染色5～8 min，立即流水洗;1%磷钼酸分化3～5 min，再用1%醋酸
水溶液2～3 s。

(9)0.1%固绿水溶液染色3～5 min，急入水稍洗。

(10)迅速吹干，中性树胶封固［2］。

肾小球鲍曼囊及毛细血管襻基膜呈棕黑色，弹力纤维及网状纤维呈黑色，细胞核呈蓝色，细胞质呈红色，细胞间质及胶原纤维呈绿色，免疫复合物呈红色，组织结构清晰，着色均匀(图1～4)。

在PASM-Masson染色过程中，需注意以下问题:(1)六胺银工作液应现用现配，
先将3%六次甲基四胺水溶液与5%硝酸银水溶液混合呈乳白色，瞬间透明，待染
色时再加入硼砂。

(2)硼砂不易溶于水，配液前将硼砂置于水浴箱中预热，充分溶
解后方可使用。

(3)切片1 μm厚为宜，切片太厚不宜观察基膜病变和组织结构。

(4)水浴箱温度不宜过高，控制在56～58℃最佳，使组织缓慢均匀着色。

(5)切片
浸入六胺银工作液后于56～58℃恒温箱水浴染色30～40 min(切片呈浅棕色)，要求显微镜下控制至肾小球基膜呈棕黑色，不宜着色过深，否则会影响后面的染色并加重基膜的显色。

为保持玻片背景干净，建议每0.5 h换液1次。

(6)注意控制六
胺银工作液浓度与染色时间，若适当提高六胺银工作液浓度，基膜染色相对清晰，但时间应稍缩短，否则可能出现非特异性着色;同样，工作浓度过高也会出现明显
的非特异性背景。

(7)适当延长组织在高碘酸中的氧化时间，可明显改善组织玻片
的背景着色。

(8)Masson染色作为衬染，应注意控制时间，以免影响染色的对比
效果。

(9)为使组织更好地体现固绿颜色，Masson液染色水洗后需用1%磷钼酸溶液分化数分钟。

(10)0.2%氯化金水溶液调色时，需备好蒸馏水，肉眼观察组织由
棕黄色变为灰色时，立即放入蒸馏水中终止调色，再用显微镜观察直至肾小球基膜呈黑色。

若染色偏淡，可重回六氨银工作液中继续着色。

(11)组织切片调色结束后，应浸入0.25%硫代硫酸钠水溶液中1～2 min。

根据组织着色的深浅控制分化时间，银着色深则延长时间，反之则缩短时间，以防染色变淡。

特殊染色是肾穿刺活检组织病理检查的重要组成部分之一，PASM-Masson染色
法的优点:(1)定位精确、结构清晰，对比明显的染色结果便于病理诊断医师同一视
野下观察肾小球、肾小管、肾间质、血管与沉积的特殊蛋白及免疫复合物;(2)因肾
穿刺组织小且少，将这两种特殊染色结合在一起，有效的提高标本利用率，同时节省制片成本，提高出片速度。

特殊染色是一项十分重要且程序复杂的工作，要求技术人员具备扎实的理论基础和丰富的实践经验，并且在操作的各个环节把握适度才能够制作出高品质的染色切片，为病理医师作出准确诊断提供可靠依据。

郑智勇，男，主任医师，硕士生导师，通讯作者。

E-mail:*****************【相关文献】
［1］冼志红，秦纯，丛文铭.重视特殊染色在肝脏活检病理诊断中的应用［J］.临床与实验病理学杂志，2013，29(4):424－7.
［2］余英豪，郑智勇.肾穿刺活检病理诊断彩色图谱［M］.福建:科学技术出版社，2008:63－70.。