【小鼠超数排卵试验】小鼠超数排卵

【小鼠超数排卵试验】小鼠超数排卵
小鼠是一种使用最为广泛的实验动物，在发育生物学和生殖生物学研究方面，利用小鼠进行有关研究及探索许多理论和实践问题有许多便利之处。

小鼠对超数排卵反应，受体况、年龄、季节、营养状况、激素的种类、剂量等因素的影响。

由于影响因素很多，于是要对每只受体鼠处理后都得到预期的效果是比较困难的。

其影响的关键因素在于个体对药物的反应（敏感性）及年龄等。

我们采用四种方法对小鼠进行超排处理，目的是比较所用的超排效果，为研究山羊、奶牛的超数排卵，胚胎移植提供材料。

一、材料和方法
1.实验材料
1.1药品FSH（宁波第二激素厂），PMSG（宁波第二激素厂），LH （宁波第二激素厂），HCG（杭州动物药品厂）等。

1.2 实验动物雌性昆明白系性成熟小鼠20只（购自安医动物房）。

2.超排方案
将20只母分成4组，每组5只。

2.1方案一给每只小鼠腹腔注射10IU的PMSG，间隔48小时后，再腹腔注射10IU的HCG。

2.2 方案二给每只小鼠腹腔注射5IU的PMSG，间隔48小时后，再腹腔注射5IU的HCG。

2.3 方案三给每只小鼠注射FSH剂量为2IU、2IU、2IU、2IU、1IU、1IU、每次注射间隔12小时，在最后一次注射FSH后12小时，再腹腔注射10IU的LH。

2.4 方案四每次给小鼠注射FSH剂量为2IU、2IU、、1IU，每次注射时间间隔12小时，在最后一次注射FSH后12小时，再腹腔注射5IU的LH。

2.5 采卵最后一次注射激素后4-6个小时，处死小白鼠，剪开
皮肤，用眼科镊拉出小白鼠左右两侧子宫和卵巢，把输卵管与子宫、卵巢分离，找出输卵管的膨大部，将孵卵管移到培养皿中。

2.6 显微观察与卵母细胞计数在体视显微镜下，将沉浸在生理盐水中的输卵管的膨大部找出，用胚胎操作针将卵分离出来，再加入透明质算酶（HE液），过2~3分钟进行观察记数。

二、结果
1.各组超数结果
1.1按方案一超排的5只小白鼠，共回收卵母细胞189枚，平均每只回收卵37.8枚（见表1）
1.2 按方案二超排的5只小白鼠，共回收卵母细胞229枚，平均每只回收卵45.8枚（见表2）
1.3按方案三超排的5只小白鼠，共回收卵母细胞186枚，平均每只回收卵37.2枚（见表3）
表1 方案一超排小鼠的排卵数
表2 方案二超排小鼠的排卵数
表3 方案三超排小鼠的排卵数
1.4按方案四超排的5只小白鼠，共回收卵母细胞178枚，平均每只回收卵35.6枚（见表4）
表4 方案四超排小鼠的排卵数
2.左右两侧卵巢排卵数差异显著性检验
由表5可见|t|0.05（t0.05（8）=2.306，t0.05（8）=3.355），说明采用四种不同的超排方案左右侧卵巢排卵数没有显著差异。

3.两种药物组合间小鼠排卵数差异显著性检验
用PMSG+HCG法和FSH+LH方法对小鼠进行超排处理，采用不同的剂量间，小鼠排卵数没有显著性差异（差异显著性检验见表6）表5 左右侧卵巢排卵数差异显著性检验
表6 相同超排药品，不同剂量间，小鼠排卵数差异显著性检验
4.四种不同方案组间排卵数差异显著性检验
由表7可知，采用四种不同方案排卵数差异不显著（F0.05）。

表7 四种不同方案组间排卵数差异显著性检验
三、讨论
1.小鼠超排效果受季节、气温变化、激素剂量、批号、小鼠品种、年龄等因素的影响。

尽管试验的四种不同超排方案对小鼠的排卵差异不显著，但是本试验仍然可以表明：用高剂量的激素处理，反而得到了较低的排卵率。

剂量太小，则达不到超数排卵的目的；剂量太大，排卵率反而降低，因此处理所用的剂量应当适当。

在同等条件下，PMSG+HCG方法优于FSH+LH方法，一方面因为FSH半衰期短，在实际应用过程中要连续注射，而PMSG半衰期长，在实际应用中只要一次注射就可达到效果，节省了大量的时间、劳力；另一方面PMSG+HCG在价格上比使用FSH+LH便宜，因此在剂量相同的情况下，使用PMSG+HCG较好。

2.在小鼠超排过程中我们可将小鼠将年龄划分为成年鼠和青年鼠，成年鼠超排效果较理想，而青年鼠效果较差，因此在本次试验中小白鼠品种品系、类属几级、年龄、体况和体内激素水平都可影响超排效果。

3.季节因素对超排效果的影响：季节的更替，温度随之变化。

随着温度的降低，小鼠的超排和发情也在降低，因此影响超排效果。

4.人为因素对超排效果的影响：在操作时，激素的注射部位、注射方法、外科收集的方法及熟练程度等对超排效果有直接影响，因此在做超排实验时，事先应确定自己或别人已经使用过的相关数据或方法。