关节炎患者血管内皮生长因子的检测及其临床意义

关节炎患者血管内皮生长因子的检测及其临床意义
李雪峰;宋雄英;甄志强;尚俊英
【摘要】目的：通过对类风湿关节炎（ rheumatoid arthritis，RA）和骨关节炎（ osteoarthritis，OA）患者血清及关节液的血管内皮生长因子（ vascular endothelial growth factor，VEGF）的检测，探讨VEGF在两种疾病中的鉴别意义。

方法采用酶联免疫吸附试验方法检测RA组（40例）、OA组（40例）血清及关节液中VEGF的含量。

结果 RA组血清VEGF含量（94.41±43.32）ng/L，明显高于OA组（35.60±17.08）ng/L，差异有统计学意义（ t=7.987，
P<0.001）；RA组关节液VEGF含量（188.26±90.76）ng/L，明显高于OA组（69.72±30.42）ng/L，差异有统计学意义（ t=7.832，P<0.001）；关节液中VEGF和血清中VEGF含量之间存在相关性（r=0.714，P<0.001）。

结论 VEGF 在RA患者体内高表达，可作为RA与OA鉴别的参考指标。

%Objective To detect quantity of vascular endothelial growth factor( VEGF)in synovial fluid and serum of pa-tients with rheumatoid arthritis and osteoarthritis,and explore the clinical significance. Methods Quantity of VEGF in the synovial fluid and serum was determined by ELISA. Results Quantity of VEGF in the serum and synovial fluid in RA cases (94. 41 ± 43.
32 ng/L,188. 26 ± 90. 76 ng/L)were significantly higher than those in OA cases(35. 60 ± 17. 08 ng/L,69. 72 ± 31 ng/L). The content of VEGF in the synovial fluid was higher than that in the serum,and correlation existed between the two indicators(r=0. 714,P<0. 001). Conclusion The content of VEGF of patients with RA is higher than that of patients with OA. The result
is expected to provide a new idea for the discrimination of these two diseases.
【期刊名称】《实用骨科杂志》
【年(卷),期】2014(000)007
【总页数】3页(P615-617)
【关键词】类风湿性关节炎;骨关节炎;血管内皮生长因子
【作者】李雪峰;宋雄英;甄志强;尚俊英
【作者单位】北京市丰台中西医结合医院骨科，北京 100072;北京市丰台中西医结合医院骨科，北京 100072;北京市右安门医院检验科，北京 100054;北京市石景山医院神经内科，北京 100043
【正文语种】中文
【中图分类】R684.3
类风湿关节炎(rheumatoid arthritis，RA)是常见的高发病及高致残性自身免疫性疾病，世界发病率约0.4%[1]。

RA是一种以炎性侵蚀性的滑膜炎为特征的慢性系统性疾病，新生血管形成、炎症细胞浸润和滑膜细胞增生是滑膜早期改变的标志，它们可进一步覆盖、侵蚀关节软骨、软骨下骨，最终导致了典型RA的关节破坏和畸形。

目前对RA的病理生理机制尚未完全阐明，但关节软骨表面侵袭性血管翳的形成是RA病理过程的中心环节却得到了一致公认[2]。

研究发现血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)是目前已知作用最强的促血管生成因子之一，在RA血管翳的形成中起关键作用[3]。

骨关节炎(osteoarthritis，
OA)系由于老年或其他原因(如创伤，关节的先天性异常、关节畸形等)引起关节软
骨的非炎症性退行性变及关节边缘骨赘形成，临床可产生关节疼痛，活动受限和关节畸形等症状。

二者往往都有关节肿胀、关节积液等，临床上常常根据受累关节的不同、是否伴有晨僵及类风湿因子等指标进行鉴别，并不困难。

但对于临床表现不典型RA且类风湿因子(rheumatoid factors，RF)阴性患者，往往容易误诊为OA。

本课题收集两种疾病患者血清及膝关节液，检测VEGF的含量，比较二者差异性，为RA与OA的鉴别诊断提供新的理论依据，并进一步证实VEGF在RA血管翳的形成中的重要作用。

1 资料与方法
1.1 一般资料
1.1.1 研究对象 RA组标本源于2010年8月1日至2013年12月31日期间就诊我院伴有膝关节积液的RA患者中，收集RA患者的外周血及膝关节积液待测。

从我院RA患者中随机抽取40 例，其年龄在23～78 岁之间；平均年龄为
(53.80±13.45) 岁；其中男性10 例，女性30 例。

同时，随机抽取我院骨关节炎
伴膝关节积液40 例患者作为对照组，即OA组，收集OA患者的外周血和膝关节滑液待测。

OA组年龄在24～82 岁之间；平均年龄为(56.60±12.12) 岁；其中男性12 例，女性28 例，收集OA患者的外周血及膝关节液待测。

1.1.2 入选标准 RA符合美国风湿病学会1987年RA诊断标准[4]；OA符合中华
风湿病学会推荐的膝骨关节炎的诊断标准[5]，且合并膝关节腔积液；理解并愿意
参加此项研究，愿意签署知情同意书。

1.1.3 排除标准合并急性感染、肿瘤及其他自身免疫性疾病的；合并有心、肺、脑等其他重要脏器严重病变的；近半年内使用过免疫抑制剂。

1.2 实验方法
1.2.1 标本采集所有受试对象均采集膝关节关节液和清晨空腹静脉血各3 mL，2 h
内静置凝固后离心法取上清，将其置于-80℃冰箱保存，同批检测VEGF。

1.2.2 VEGF检测采用酶联免疫吸附测定法检测血清及关节液VEGF水平，严格按照试剂盒(购于武汉博士德生物工程有限公司，批号：253864906)说明书要求操作。

1.3 统计学处理计量资料用表示，组间比较用t检验；计数资料组间比较用χ2检验；线性相关探讨血清与关节液VEGF的相关性。

2 结果
2.1 年龄与性别构成 RA组平均年龄为(5
3.80±13.45) 岁，OA组平均年龄为(56.60±12.12) 岁，两组年龄差异无统计学意义(t=0.978，P=0.331)。

RA组和OA组性别构成无统计学差异(χ2=0.251，P=0.616)。

2.2 VEGF含量的测定 RA患者血清VGEF含量(94.41±4
3.32) ng/L，明显高于
OA组(35.60±17.08) ng/L的含量，差异有统计学意义(t=7.987，P<0.001)。

RA 患者关节液VGEF含量(188.26±90.76) ng/L，明显高于OA对照组的含量(69.72±30.42) ng/L，差异有统计学意义(t=7.832，P<0.001)。

2.3 关节液及血清中VEGF含量的关系关节液中VEGF含量与血清中VEGF含量
具有较强的相关性(r=0.714，P<0.001)(见图1)。

3 讨论
RA是一种以关节软骨侵蚀为主要表现的全身性自身免疫性疾病，其病理特征为关节滑膜的慢性炎症及血管翳的形成，并出现关节软骨和骨的破坏，引起关节畸形和功能障碍。

全球总发病率为0.4%，男女之比为1︰2.5，以30～50 岁为发病高峰。

我国RA患病率约为0.2%～0.4%[6]。

目前RA的诊断标准，大多仍沿用1987年美国风湿病学会的诊断标准：关节内或周围晨僵持续至少1 h；至少同时有3个关节软组织肿胀或积液；腕、掌指、近端指间关节区中至少1个关节区肿胀；对称
性关节炎；有类风湿结节；血清RF阳性；X线片至少有骨质疏松和关节间隙狭窄。

符合以上7项中的4项者可诊断为RA，其敏感性为91%～94%，特异性为
89%[7]。

鉴于以上分类标准，对于典型病例诊断并不困难，但对于不典型及早期RA易出现误诊或漏诊。

如未给予有效治疗，2年关节侵蚀破坏率达75%，以后病情逐渐加重可造成永久残疾。

因此早期诊断、早期治疗至关重要。

图1 血清VEGF和关节液VEGF的相关性
1994年Fava首先通过免疫组织化学的方法检测发现RA患者的滑膜组织中有VEGF蛋白表达。

VEGF作为血管新生的重要诱导剂，在介导RA滑膜血管新生时炎症病理发展过程中具有十分重要的作用，被认为是重要的促血管生成因子之一[8]。

同时也为RA临床病理诊断和治疗提供了重要的参考，程畸等[9]临床病例分析结果表明RA患者滑膜液中VEGF的表达水平比正常人和骨性关节炎患者滑膜组织中的VEGF都要高。

Ballara等[10]研究发现RA早期血清VEGF和第1年放射学破坏程度间存在明显相关性，放射学破坏小于平均值的患者其血清VEGF浓度水平要低。

这些结果提示高VEGF水平与RA的发病，新生血管的形成及病情进展有密切联系。

Byzova等[11]体外模型研究表明VEGF能诱导内皮细胞的增殖和迁移。

同时，VEGF还能激活纤溶酶原激活物及其抑制剂，促进蛋白酶和间质胶原酶的分泌，导致细胞基质的降解，利于血管的新生和分化，形成血管翳，后者能引起骨、软骨和关节的破坏，导致不可逆的关节功能丧失。

VEGF增强血管通透性，血浆纤维蛋白原的外渗能形成纤维蛋白凝胶，暂时性地允许和支持新生血管的内向性生长，利于血管形成[12]。

同时外渗的血管收缩因子和凝血因子能侵蚀软骨基质，造成关节的破坏和慢性炎症的形成，加重RA的临床症状，导致关节畸形和强直。

研究表明VEGF是联系各种炎性因子的枢纽，直接促进滑膜组织新生血管形成，增强血管通透性，在RA的滑膜血管翳的形成中起关键作用。

本研究发现RA患者血清及关节液中VEGF高表达，进一步证实了VEGF在RA疾病发生发展中的重要作用。

OA是一种慢性进行性骨关节病，临床表现以关节疼痛肿胀、僵硬和功能障碍为主
要症状。

OA的发病机制尚不明确，软骨细胞的免疫机制可能参与了关节的病理骨化进程[13]。

本实验在OA患者血清及关节液中检测到VEGF的表达，提示VEGF 在OA疾病的发展过程中扮演着某种特殊的角色，与Bonnet等[14]报道一致。

在临床工作中，对于典型的RA患者鉴别诊断并不困难，但对于不典型RA如血清阴性，不伴有小关节对称性肿痛，无明确晨僵，仅表现为膝关节疼痛肿胀者，往往诊断为骨关节炎，导致误诊误治，错失了RA的治疗时机，最终导致膝关节软骨不可逆损伤，不但增加了医疗成本，而且给患者造成极大痛苦。

作为临床工作者，不得不谨慎对待每一位“膝关节疼痛”患者。

本实验表明RA患者血清及关节液中VGEF含量明显高于OA患者，差异具有统计学意义，在血清阴性，难以鉴别的患者当中，VEGF含量的测定可以成为鉴别诊断的参考指标，我们还证实关节液中VEGF含量明显高于血清中，并且二者有相关性，检测关节液中的VGEF可能比血清更敏感可靠。

鉴于本课题样本量较小，参考值的确定还有待于大样本实验的支持。

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