胶束增敏分光光度法测定谷物中赖氨酸

文章编号:1674-9146(2016)03-0108-03
赖氨酸,化学结构式为H 2NCH 2CH 2CH 2CH 2CH
(NH 2)COOH ,是构成蛋白质的基本单位,是组成人体蛋白质的21种氨基酸之一。

赖氨酸是白色或
近白色自由流动的结晶性粉末,几乎无臭,263~264℃熔化并分解。

赖氨酸的作用包括建立肌肉组
织,从创伤或受伤恢复,并帮助更有效吸收钙。

它还有助于身体产生抗体,酶和激素。

赖氨酸补充剂也用于治疗疱疹病毒爆发。

谷物及饲料通常用赖氨酸含量的高低作为食物蛋白生理价值的一个指标[1-2]。

目前检测赖氨酸含量的方法主要有染料结合法、毛细管电泳法、气质联用法、紫外分光光度法、高效液相色谱法等[3-5]。

染料结合法灵敏度较高,可检测到微量蛋白,操作简便、快迅,试剂配制简单,重复性好,但干扰因素多,误差大,颜色会转移。

紫外分光光度法灵敏、快速、不消耗样品,但是核酸类物质有影响。

高效液相色谱法稳定、准确、良好,但耗费时间长。

已有文献介绍用胶束增敏法检测元素,因此,笔者用赖氨酸和甲酚红的络合物在溴化十六烷基三甲基胺(CTMAB )胶束介质中的吸收光谱检测谷物中赖氨酸的含量,以期为赖氨酸提供简便的检测方法。

1实验部分1.1实验试剂及仪器
实验所使用的试剂均为分析纯,实验用水为二
次蒸馏水。

所用仪器包括UV-2800荧光光谱仪,HH-S 型恒温水浴锅和Water Proof pH 计。

1.2实验方法
1.2.1工作曲线绘制及回收率和精密度测试
准确配制浓度为10μg/mL 赖氨酸溶液,物质的量浓度为1.0×10-4mol/L 的甲酚红溶液和物质的量浓度为0.1mol/L 的CTMAB 溶液待用。

然后用移液管分别移取不同体积(0.2mL ,0.4mL ,0.6mL ,0.8mL ,1.0mL ,1.2mL ,1.4mL )的待用赖氨酸溶液于10mL 的比色管中,并依次编号;在各比色管中依次加入1mL 的甲酚红溶液和1mL 的CTMAB
溶液,用二次蒸馏水稀释至刻度;在75℃恒温水浴中保温10min ,流水冷却至室温;以相应的空白试剂为参比,用紫外可见分光光度计分别测定各溶液在583nm 处的吸光度。

回收率试验和精密度试验方法同上。

1.2.2样品测定
将小米,大米和陈小米粉碎,过60目筛子,分别放入广口瓶中,加入沸程60~90℃的石油醚使其淹过粉面,浸泡8h 并不时搅拌以脱脂。

过滤后用石油醚淋洗沉淀若干次,弃去滤液。

干粉晾在滤纸上,置阴凉通风处吹去石油醚[6]。

分别称取60mg 脱脂后的小米,大米和陈小米粉面放入50mL 容量胶束增敏分光光度法测定谷物中赖氨酸
张宝红,胡国胜
收稿日期:2015-10-12;修回日期:2016-01-25
作者简介:张宝红(1989-),男,山西长治人,在读硕士,主要从事蛋白质及氨基酸研究,E-ma il :ws ry7091@ 。

(中北大学材料科学与工程学院,山西
太原
030051)
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表4
谷物中赖氨酸相对量
瓶中,加几滴无水乙醇,使样品湿润,分别再加入10mL 0.25%氢氧化钠,在40℃下振荡30min ,或在室温下放置6~15h 之后摇动15~30s ,然后加二次蒸馏水至刻度,摇匀,即成样品液[7]。

样品处理
完后,测定方法同上。

2实验结果与讨论2.1
工作曲线的绘制
根据设定的实验方法,得出以水为溶剂,最大吸收波长583nm ,pH 值为7.0,CTMAB 用量为1.0mL ,甲酚红C 甲酚红为1.0×10-5mol
·L -1时为实验最优条件。

按最优实验条件测得不同质量浓度条件下的赖氨酸吸光度(实验数据见表1),以赖氨酸浓度为横坐标,吸光度值为纵坐标,绘制赖氨酸工作曲线(见图1)。

由图1可知,赖氨酸质量浓度在0.2~1.4μg/mL 范围内,满足工作曲线方程:A =0.06821c +0.06614;相关系数R 2=0.9927。

赖氨酸和甲酚红的络合物在溴化十六烷基三甲基胺(CTMAB )胶束介质中的吸收光谱,结果表明该络合物在胶束介质中,吸
收值显著增强,稳定性也得到很大提高。

2.2
回收率的测定
按照最优条件,根据设计的实验方法进行回收率的测定,测定结果见表2。

韩素琴等[8]利用胶束增敏法测定赖氨酸含量,研究表明赖氨酸与甲酚红在水溶液中可形成紫色络合物,溴化十六烷基三甲基胺(CTMAB )对该络合物有显著的增敏增稳作用。

据此建立了胶束增敏光度法测定赖氨酸含量的新方法,方法的线性范围为0.028~0.175μg/mL ,检出限为0.015μg/mL 。

该法可用于药物制剂中赖氨酸含量的测定,回收率在98.0%~101.7%之间。

由表2可知,本次实验的回收率为94.8%~109%,平均回收率为101%,说明方法有较高的准确度。

与先前研究工作相比,进一步说明用胶束增敏光度法测定赖氨酸含量准确度较高。

2.3精密度的测定
选取赖氨酸浓度为0.8μg/mL 平行测定7次,精密度实验结果见表3。

精密度是表示测量的再现性,是保证准确度的先决条件。

精密度通常以算术平均差、极差、标准差或方差来量度。

根据表3实验数据,由实验数据的算术平均差得出胶束增敏分光光度法测定谷物中赖氨酸的精密度RSD 为0.0285,说明本实验方法有较好的重复性。

2.4样品测定
在最优实验条件下,按设计得实验方法对谷物中大米、小米和陈小米中赖氨酸相对量进行测定,测定结果见表4。

由表4得出,大米、小米和陈小米中的赖氨酸相对量分别为2.318%,1.633%, 1.487%。

通过本次实验可以看出,CTMAB 对甲酚红与赖氨酸生成的荷移络合物有明显的增敏作用,最大吸收波长明显红移,吸光度明显增大,反应体系稳定、灵敏;用分光光度法测定该结合体系操作简单,方法灵敏,成本低;测定准确、回收率好。

表3
精密度
(μg/mL )
图1
赖氨酸工作曲线
质量浓度/μg ·mL -1表1
赖氨酸质量浓度及其对应吸光度(μg/mL )
表2
赖氨酸回收率实验结果
Study on Dynamic Properties of Undisturbed Loess Under Dynamic Torsional
Shear Test
Shang Hong-shi
(School of Science,Lanzhou University of Technology,Lanzhou 730050China )
Abstract :Lanzhou undisturbed loess is divided into dry pattern,wet pattern and saturated pattern according to original water content.The three patterns are studied by using torsional shear apparatus.The constitutive relationship between dynamic stress and dynamic strain,the dynamic shear modulus,and the dynamic properties of the damping ratio are studied.The study indi-cates that the curve for dynamic stress and dynamic strain of the three patterns is a hyperbolic curve.
The dynamic shear
modulus of the three patterns under the different consolidation will be decreasing with the increase of dynamic strain,and the size will be smaller.Under the same consolidation,the order of maximum dynamic shear modulus is that,dry pattern>wet
pattern>saturated pattern,the damping ratio of undisturbed loess is generally between 0.2to 0.3,and the relationship between
damping ratio and dynamic strain is linear.
Key words :undisturbed loess;dynamic property;dynamic torsional shear test;dynamic stress-strain relationship;dynamic shear modulus;dynamic damping ratio
Determination of Lysine in Cereals Using Micellar Sensitization Spectrophotometry
Zhang Bao-hong ,Hu Guo-sheng
(College of Materials Science
and Engineering,North University of China,Taiyuan 030051China )
Abstract :
In this paper,
micellar sensitization spectrophotometry is used to determine lysine content in cereals.The study
shows that lysine and cresol red can form purple complex in aqueous,and spectrophotometric signal is enhanced and stabi-
lized by CTMAB.Based on this,micellar sensitization spectrophotometry is established to determine the lysine content.The results show that the method has higher selectivity and sensitivity for the determination of lysine content in cereals.Key words :lysine;cetyl trimethyl ammonium bromide(CTMAB);cresol red;spectrophotometry 3
结论
本实验对甲酚红与赖氨酸作用的荷移络合物进行分析研究,确定了胶束增敏分光光度法测定谷物中赖氨酸最佳测定条件:以水为溶剂,最大吸收波长583nm ,pH 值为7.0,CTMAB 用量为1.0mL ,甲酚红C 甲酚红为1.0×10-5mol
·L -1时,且该实验具有较好的准确性和重复性,为下一步的研究工作奠定了良好的基础。

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(责任编辑
石俊仙)
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