GC法同时测定聚山梨酯80中5种挥发性杂质

Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｅｓｔａｂｌｉｓｈ ａ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｔｈｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｆｉｖｅ ｖｏｌａｔｉｌｅ ｉｍｐｕｒｉｔｉｅｓ ｉｎ ｐｏｌｙｓｏｒｂａｔｅ ８０．Ｍｅｔｈｏｄ Ｔｈｅ ｄｅｔｅｒｍｉ－ ｎａｔｉｏｎ ｗａｓ ｐｅｒｆｏｒｍｅｄ ｏｎ ａ ＧｓＢＰ－ＩＮＯＷＡＸ ｃｏｌｕｍｎ ｗｉｔｈ ＰＥＧ２００００（３０ ｍ×０．５３ ｍｍ×１．０μｍ）ａｓ ｓｏｌｉｄ ｐｈａｓｅ．Ｔｈｅ ｃｏｌｕｍｎ ｔｅｍ－ ｐｅｒａｔｕｒｅｓ ｗａｓ ５０ ℃ ａｔ ｂｅｇｉｎｎｉｎｇ，ａｎｄ ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ ｔｏ ２００ ℃ ａｔ ａ ｒａｔｅ ｏｆ ５ ℃·ｍｉｎ－１，ｍａｉｎｔａｉｎｅｄ ｆｏｒ １０ｍｉｎ；ｔｈｅｎ ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ ｔｏ ２３０ ℃ ａｔ ａ ｒａｔｅ ｏｆ ５０ ℃·ｍｉｎ－１ａｎｄ ｈｅｌｄ ｆｏｒ ２０ｍｉｎ．Ｔｈｅ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｓ ｏｆ ｔｈｅ ｉｎｊｅｃｔｏｒ ａｎｄ ｄｅｔｅｃｔｏｒ ｗｅｒｅ ｓｅｔ ａｔ ２００ａｎｄ ２５０ ℃，
ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｒｅｓｕｌｔ Ｆｉｖｅ ｖｏｌａｔｉｌｅ ｉｍｐｕｒｉｔｉｅｓ ｉｎ ｐｏｌｙｓｏｒｂａｔｅ ８０ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓｌｙ ｂｙ ｇａｓ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ．Ｔｈｅ ｃａｌｉｂｒａｔｉｏｎ ｃｕｒｖｅｓ ｗｅｒｅ ｌｉｎｅａｒ ｉｎ ｔｈｅ ｒａｎｇｅｓ ｏｆ ２．７－１７６．８μｇ·ｍＬ－１（ｒ＝０．９９９ ８），２．８－１４０．７μｇ·ｍＬ－１（ｒ＝０．９９９ ８），３．４－１６７．５μｇ·ｍＬ－１ （ｒ＝０．９９９ ９），４．７－２ ３４５μｇ·ｍＬ－１（ｒ＝０．９９９ ８），ａｎｄ ３．２－１６０．８μｇ· ｍＬ－１ （ｒ＝０．９９９ ９）ｆｏｒ ｅｔｈｙｌｅｎｅ ｏｘｉｄｅ，ｄｉｏｘａｎｅ，ｅｔｈｙｌｅｎｅ ｃｈｌｏｒｏｈｙｄｒｉｎ，ｅｔｈｙｌｅｎｅ ｇｌｙｃｏｌ ａｎｄ ｄｉｅｔｈｙｌｅｎｅ ｇｌｙｃｏｌ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅ ａｖｅｒａｇｅ ｒｅｃｏｖｅｒｉｅｓ ｗｅｒｅ １０４．３％ ，９１．３％ ，１０５．２％ ，９４．１％ ａｎｄ １０５．７％，ＲＳＤ ｗｅｒｅ ２．５％，２．８％，１．４％，３．０％ ａｎｄ ３．７％，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ Ｔｈｅ ｍｅｔｈｏｄ ｗｅｒｅ ｐｒｏｖｅｄ ｔｏ ｂｅ ａｃｃｕｒａｔｅ ａｎｄ ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ，ａｎｄ ｃａｎ ｂｅ ｕｓｅｄ ｆｏｒ ｔｈｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｖｏｌａｔｉｌｅ ｉｍｐｕｒｉｔｉｅｓ ｉｎ ｐｏｌｙｓｏｒｂａｔｅ ８０． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ｐｏｌｙｓｏｒｂａｔｅ ８０；ｖｏｌａｔｉｌｅ ｉｍｐｕｒｉｔｉｅｓ；ｇａｓ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ
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西 北 药 学 杂 志 ２０１５ 年 ７ 月 第 ３０ 卷 第 ４ 期
·药物分析·
ＧＣ 法同时测定聚山梨酯８０中５种挥发性杂质
李 莉，王佳宇，高山山，侯文珍，马长华＊ （北京中医药大学中药学院，北京 １００１０２）
摘要：目的 建立气相色谱法对聚山梨酯８０中的环氧乙烷、二氧 六 环、氯 乙 醇、乙 二 醇 和 二 甘 醇 ５ 种 挥 发 性 杂 质 进 行 同 时 检 测。 方法 采用气相色谱法，色谱柱固定相为 ＰＥＧ２００００ （ＧｓＢＰ－ＩＮＯＷＡＸ，３０ｍ×０．５３ｍｍ×１．０μｍ 弹 性 石 英 毛 细 管 柱）。 采 用 程 序升温，初温５０ ℃，以５ ℃·ｍｉｎ－１升温至２００ ℃，保 持 １０ ｍｉｎ，再 以 ５０ ℃ ·ｍｉｎ－１升 温 至 ２３０ ℃，保 持 ２０ ｍｉｎ。进 样 口 温 度 为 ２００ ℃，检测器温度为２５０ ℃。结果 同时测定了聚山梨酯８０中环氧乙烷、二氧六环、氯乙醇、乙二醇和二甘醇５种挥发性杂质， 线 性 范 围 分 别 为 ２．７～１７６．８μｇ·ｍＬ－１（ｒ＝０．９９９ ８），２．８～１４０．７μｇ·ｍＬ－１（ｒ＝０．９９９ ８），３．４～１６７．５μｇ·ｍＬ－１ （ｒ＝０．９９９ ９）， ４．７～２ ３４５μｇ·ｍＬ－１（ｒ＝０．９９９ ８）和３．２～１６０．８μｇ·ｍＬ－１（ｒ＝０．９９９ ９）；平 均 加 样 回 收 率 分 别 为 １０４．３％，９１．３％，１０５．２％， ９４．１％和１０５．７％，ＲＳＤ 分别为２．５％，２．８％，１．４％，３．０％和３．７％。结论 该 方 法 灵 敏、准 确，可 用 于 聚 山 梨 酯 ８０ 中 挥 发 性 杂 质的检测。 关 键 词 ：聚 山 梨 酯 ８０；挥 发 性 杂 质 ；气 相 色 谱 法 ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００４－２４０７．２０１５．０４．０１１ 中 图 分 类 号 ：Ｒ９２７．２ 文 献 标 志 码 ：Ａ 文 章 编 号 ：１００４－２４０７（２０１５）０４－０３６４－０４
成每１ｍＬ含氯乙醇５０μｇ、二醇８００μｇ、二氧六环５０μｇ、 二甘醇５０μｇ和环氧乙烷４４．２μｇ的对照品溶液。 ２．２ 供 试 品 溶 液 的 制 备 精 密 称 取 聚 山 梨 酯 ８０ ４ ｇ，置 于 １０ ｍＬ 量 瓶 中，加 无 水 乙 醇 定 容，摇 匀，配 制 成每１ｍＬ 含４００ｍｇ聚山梨酯８０的供试溶液。 ２．３ 色 谱 条 件 色谱柱固定相为 ＰＥＧ２００００ （ＧｓＢＰ－ ＩＮＯＷＡＸ，３０ｍ×０．５３ ｍｍ×１．０μｍ 弹性 石 英 毛 细 管 柱）。采用程序升温，初温５０ ℃，以５ ℃·ｍｉｎ－１升温至 ２００ ℃，保持１０ｍｉｎ，再以５０℃·ｍｉｎ－１升温至２４０℃，保 持２０ ｍｉｎ。 进 样 口 温 度 为 ２００ ℃，检 测 器 温 度 为 ２５０ ℃，分流比为１０∶１，进样 量 １μＬ，柱 压 力 恒 定 方 式，载气为氮 气 （９９．９９９％ ），柱 流 速 ３ ｍＬ·ｍｉｎ－１。 色 谱 图 见 图 １。
２．４ 线性范围 分 别 取 环 氧 乙 烷、氯 乙 醇、乙 二 醇、 二 甘 醇 、二 氧 六 环 对 照 品 适 量 ，加 无 水 乙 醇 依 次 稀 释 成
下列标准 溶 液：环 氧 乙 烷 ２．７，５．７，１１．１，２３．０，４４．２， ８８．４ 和 １７６．８μｇ·ｍＬ－１；氯 乙 醇 ３．４，６．７，１４．１，３０．２， ５５．３和１６７．５μｇ·ｍＬ－１；乙二醇４．７，４６．９，９３．８，１９７， ４２２，７７４和 ２ ３４５μｇ·ｍＬ－１；二 甘 醇 ３．２，６．４，１３．５， ２８．９，５３．１ 和 １６０．８μｇ·ｍＬ－１；二 氧 六 环 ２．８，５．６， １１．８，２５．３，４６．４和 １４０．７μｇ·ｍＬ－１。 取 １μＬ 进 样 分析，以各对照品峰面积积分值Ｙ 对进样质量浓度Ｘ 进行线性回归，计 算，结 果 见 表 １。 结 果 表 明，环 氧 乙 烷质量 浓 度 在 ２．７～１７６．８μｇ· ｍＬ－１ 范 围 内，氯 乙 醇质量浓度在３．４～１６７．５μｇ·ｍＬ－１范围内，乙 二 醇 质量浓度在４．７～２ ３４５μｇ·ｍＬ－１范 围 内，二 甘 醇 质 量浓度在３．２～１６０．８μｇ·ｍＬ－１的范围内，二 氧 六 环 质量浓度 在 ２．８～１４０．７μｇ·ｍＬ－１范 围 内 线 性 关 系 良好。
Ｆｉｇ．１ＧＣ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｍｓ Ａ．ｂｌａｎｋ ；Ｂ．ｓａｍｐｌｅ；Ｃ．ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ；１．ｅｔｈｙｌｅｎｅ ｏｘｉｄｅ；２．ｄｉ－ ｏｘａｎｅ；３．ｅｔｈｙｌｅｎｅ ｃｈｌｏｒｏｈｙｄｒｉｎ；４．ｅｔｈｙｌｅｎｅ ｇｌｙｃｏｌ；５．ｄｉｅｔｈ－ ｙｌｅｎｅ ｇｌｙｃｏｌ
表 １ 回 归 方 程 与 线 性 范 围
Ｔａｂ．１ Ｌｉｎｅａｒ ｒａｎｇｅ ａｎｄ ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ ｅｑｕａｔｉｏｎｓ ｏｆ ｃａｌｉｂｒａｔｉｏｎ
ｃｕｒｖｅｓ
图 １ 气 相 色 谱 图 Ａ．空白溶液；Ｂ．样品；Ｃ．对照品；１．环氧乙烷；２．二氧六 环；３． 氯 乙 醇 ；４．乙 二 醇 ；５．二 甘 醇
基 金 项 目 ：国 家 自 然 科 学 基 金 项 目 （编 号 ：８１２７４０７０） 作 者 简 介 ：李 莉 ，女 ，在 读 硕 士 研 究 生 ＊ 通信作者：马长华，男，教授，硕士生导师
明，对机体 神 经、细 胞 等 存 在 不 良 反 应 。 ［６－９］ 因 此，对 聚山梨酯８０中可能含有的该类潜在不良反应因素 的 监控，对于保证临床用药安全具有重要的意义。 由实 验结果可知，建立测定５种杂质的气相色谱方法简 便 灵 敏 ，结 果 准 确 ，重 复 性 好 。 １ 仪 器 与 试 药 １．１ 仪器 安捷伦气相色谱仪，型号 ７８９０Ａ（ＦＩＤ 检 测器，安捷伦 自 动 进 样 器 型 号 ７６８３Ｂ）；电 子 天 平 （上 海 越 平 科 学 仪 器 有 限 公 司 ，型 号 ＪＡ２００３）。 １．２ 试药 对 照 品：氯 乙 醇 （Ｓｉｇｍａ公 司 进 口 分 装， 规格１ ｍＬ ）；乙 二 醇 （上 海 源 叶 生 物 科 技 有 限 公 司， 规格５ｍＬ）；二氧六环（中国食品药品检定研究 院，规 格２００ｍｇ）；二甘醇（中国食品药品检 定 研 究 院，规 格 １００ｍｇ）；环氧乙烷（中 国 食 品 药 品 检 定 研 究 院，规 格 ５ｍＬ）。聚 山 梨 酯 ８０ （批 号 ２０５３５９Ｃ，日 本 ＮＯＦ 公 司；批 号 ２０１３０７０１，南 京 国 内 某 公 司 注 射 级 别；批 号 ＺＹ１３０９１１，上 海 国 内 某 公 司 药 用 级 别；批 号
聚山梨酯 ８０（Ｔｗｅｅｎ－８０，ｐｏｌｙｓｏｒｂａｔｅ ８０）是 一 种 非 离 子 型 表 面 活 性 剂 ，由 于 其 结 构 中 具 有 较 长 的 碳 链 结构，对亲脂性 药 物 有 较 好 的 助 溶 作 用，因 此 该 产 品 常被用 作 注 射 液 及 口 服 液 的 增 溶 剂 或 乳 化 剂 。 ［１－２］ 但 近 年 来 临 床 上 含 聚 山 梨 酯 ８０ 的 注 射 剂 多 有 不 良 反 应发生，如：因严 重 不 良 反 应 被 国 家 食 品 药 品 监 督 管 理 局 暂 停 使 用 的 鱼 腥 草 注 射 液 ，其 中 所 含 辅 料 聚 山 梨 酯 ８０ 就 是 引 起 不 良 反 应 的 重 要 原 因 之 一 。 ［３］ 据 豚 鼠、Ｂｅａｇｌｅ犬、食蟹猴、体外 ＲＢＬ－２Ｈ３细胞、人血清补 体等大量实验研 究 证 实，聚 山 梨 酯 ８０ 与 动 物 不 良 反 应的出现存在明显关系；聚山梨酯 ８０是一种聚合物， 稳 定 性 不 佳 ，其 含 有 的 杂 质 或 降 解 产 物 可 能 是 致 敏 的 主 要 原 因 ［４］，如 环 氧 乙 烷 、二 氧 六 环 、氯 乙 醇 、乙 二 醇 、 二甘醇等［５］，而该类物质在相关 药 理 学 研 究 中 已 被 证
ｈｔｔｐ：／／ＸＢＹＺ．ｃｂｐｔ．ｃｎｋｉ．ｎｅｔ
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２０１３０１０１，２０１３０４０１，２０１０１２０１，国 内 某 公 司）。 无 水 乙 醇 （色 谱 级 别 ，Ｆｉｓｈｅｒ公 司 ）。
２ 方 法 与 结 果 ２．１ 对照品溶液的制 备 精 密 吸 取 环 氧 乙 烷、氯 乙 醇、 乙二醇、二氧六环、二甘醇对照品，分别加无水乙醇配制
Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｆｉｖｅ ｖｏｌａｔｉｌｅ ｉｍｐｕｒｉｔｉｅｓ ｉｎ ｐｏｌｙｓｏｒｂａｔｅ ８０ｂｙ ＧＣ
ＬＩ Ｌｉ，ＷＡＮＧ Ｊｉａｙｕ，ＧＡＯ Ｓｈａｎｓｈａｎ，ＨＯＵ Ｗｅｎｚｈｅｎ，ＭＡ Ｃｈａｎｇｈｕａ＊ （Ｓｃｈｏｏｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｂｅｉｊｉｎｇ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｍｅｄｉ－ ｃｉｎｅ，Ｂｅｉｊｉｎｇ １００１０２，Ｃｈｉｎａ）