纤维素酶辅助提取菜籽多糖

1．酶法提取步骤：
取1.0 g菜籽粕→加入80%乙醇初步脱除色素及单糖（料液比为1:10,进行2次，此次离心为3600r/min,15min）→加入蒸馏水，调节pH后加入纤维素酶（改变pH、料液比及加酶量）→在一定温度下反应一定时间（改变温度及时间）→沸水浴5min灭酶→调节溶液pH至中性→离心（4200r/min，20min），取上清液→加入等体积的10%三氯乙酸除蛋白，静置过夜→离心（4200r/min，20min），取上清液→真空浓缩→加入3倍体积无水乙醇沉淀多糖，静置一段时间（30min）→离心（4200r/min，20min），取沉淀→多次洗涤（95%乙醇，一般只洗一次）→复溶于蒸馏水水，定容→采用苯酚-硫酸法测定多糖含量
多糖含量的测定
把上述经离心的沉淀加水复溶,定容至100mL,取5mL,再定容至50mL（在我们做的单因素中就不稀释10倍了）。

取1mL此溶液至具塞试管,加蒸馏水补足2mL,再各加5%苯酚1mL（取1mL 80%的苯酚溶液，加入15mL蒸馏水,即为5%的苯酚溶液）,混匀,迅速加入5mL浓硫酸,立刻摇匀。

放置30min,于490nm处测定吸光度。

2．单因素实验条件的确定：
加酶量：0.2 0.5 0.8 1 3 5 10 20
pH：3.5 4.0 5.0 5.5 6.0
时间：0.5 1 2 3 4
温度：40 50 55 60 70
料液比：10 20 30 40 50
3．实验分组：
3.1 加酶量
pH=5 温度55 料液比1:30 时间2 加酶量0.2 0.5 0.8 1 3 5 10 20
3.2 时间
pH=5 温度55 料液比1:30 加酶量时间0.5 1 2 3 4
3.3 料液比
pH=5 温度55 加酶量时间料液比10 20 30 40 50
3.4 温度
pH=5 加酶量时间料液比温度40 50 55 60 70
3.5 pH
加酶量时间料液比温度pH=3.5 4.0 5.0 5.5 6.0
加酶量的计算：
如加酶量为1%，则有表示向100g菜籽粕中加入1mL的复合植物水解酶（Novozymes Viscozyme L）
若现有1.0g菜籽粕，则加酶量
0.2% ：2μL
0.5% ：5μL
0.8% ：8μL
1.0% ：10μL 3.0% ：30μL 5.0% ：50μL 10.0%：100μL 20.0%：200μL。