复方黑芝麻胶囊调节免疫功能作用的实验研究

复方黑芝麻胶囊调节免疫功能作用的实验研究
陆海鹏;李彬
【摘要】目的:研究复方黑芝麻胶囊对免疫功能的调节作用.方法:通过足趾肿胀厚度法测定迟发型变态反应、ConA刺激淋转颜色反应法测定T淋巴细胞增殖功能、乳酸脱氢酶法测定NK细胞活性、半数溶血值测定法测定血清溶血素,并且通过抗体生成细胞的测定、碳廓清指数的测定以及小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验以探讨复方黑芝麻胶囊调节免疫功能作用.结果:经口给予低剂量(6.5 mg/kg)的复方黑芝麻胶囊,与对照组比较,能降低正常小鼠的足趾肿胀厚度(22.3%,P<0.01),提高NK细胞活性(62.2%,P<0.05)、血清溶血素水平(17.1%,P<0.05)、抗体生成细胞数量(5.3%,P<0.05)、碳廓清吞噬指数(15.9%,P<0.05)和巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力(24.4%,P<0.05).结论:复方黑芝麻胶囊具有增强免疫的功能,但其功能与其剂量有很大关系.
【期刊名称】《云南中医中药杂志》
【年(卷),期】2010(031)004
【总页数】3页(P50-52)
【关键词】复方黑芝麻胶囊;免疫调节;实验研究
【作者】陆海鹏;李彬
【作者单位】广西民族医院,广西,南宁,530001;广西昌洲天然产物开发有限公司,广西,南宁,530023
【正文语种】中文
【中图分类】R285.5
复方黑芝麻胶囊是制何首乌、黑芝麻、黑木耳、酸枣仁、麦门冬、桑椹等8味食用或药食两用药材组成的中药复方制剂,具有改善睡眠、调节机体免疫力的作用,临床应用疗效可靠,现将其调节免疫力的实验报告如下。

1 材料和方法
1.1 药品及试剂复方黑芝麻胶囊由广西昌洲天然产物开发有限公司院提供,批号：20081201;1640完全培养基(过滤灭菌);Hepes;NaHCO3;谷氨酰胺(L-Glu);青霉素;链霉素;新生小牛血清;Hanks工作液(pH 7.2～7.4)(高压灭菌);吩嗪二甲酯硫酸盐(PMS);氧化型辅酶I(NAD+);乳酸锂;噻唑兰(M TT);刀豆素(ConA);碘硝基氯化四氮唑(INT);2%NP40;0.2mol/L盐酸-Tris缓冲液;YAC-1细胞;氰化钾;铁氰化钾;豚鼠血清(5只豚鼠混合);绵羊红细胞(SRBC);印度墨汁;戊巴比妥钠。

1.2 动物昆明种雌性二级小鼠,体重18～22g。

由广西医科大学动物中心提供,生产许可证号：2009A053。

1.3 仪器 752紫外分光光度计;NU-2500E型CO2培养箱;超净工作台;AE100电子天平;DT500电子天平;TDL-5离心机;KA-1000型台式离心机;生物显微镜;JY92-Ⅱ型超声波细胞粉碎机;螺旋测微器(0.01 mm);YXQG01型蒸汽消毒锅;细菌滤器(直径50mm 和35mm,0.2μ m 滤膜);CF-5000板式酶标仪;电热三用水箱;24孔平底培养板;96孔U形培养板;96孔平底测定板;8道加样器;秒表。

1.4 实验方法 (1)迟发型变态反应(DTH)—足趾肿胀厚度法[1];(2)T淋巴细胞增殖功能测定—ConA刺激淋转颜色反应法(MTT法)[2];(3)NK细胞活性的测定(乳酸脱氢酶法)[3];(4)抗体生成细胞的测定[3];(5)血清溶血素的测定(半数溶血值测定法)[4];(6)碳廓清指数的测定：碳廓清实验[2];(7)小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验[5]。

1.5 统计学处理实验结果采用SPSS13.0统计软件进行统计学处理。

数据均用均数
±标准差(±s)表示,采用方差分析,检验水准α=0.05。

2 结果
2.1 复方黑芝麻胶囊对正常小鼠体重、胸腺/体重、脾脏/体重的影响见表1。

表1 对正常小鼠免疫器官重量的影响(±s)组别剂量(mg/kg) n 体重(g)脾脏/体重(mg/g)胸腺/体重(mg/g)对照组0 12 34.1±2.8 5.29±0.46 2.96±0.49低剂量组6.5 12 33.2±3.0 4.95±0.70 3.02±0.41中剂量组13 12 33.1±3.1
5.13±0.88 3.40±0.44高剂量组 26 12 33.1±3.3 5.13±0.88 3.50±0.34
由表1可见,灌胃 28d后,与对照组相比,各剂量组体重、胸腺/体重、脾脏/体重差异均无显著性意义(P＞0.05)。

2.2 复方黑芝麻胶囊对正常小鼠迟发型变态反应的影响见表2。

表2 对正常小鼠足趾肿胀厚度的影响(±s)与对照组比较,*P＜0.01组别剂量(mg/kg) n 足趾肿胀厚度(mm)对照组0 12 0.62±0.08低剂量组 6.5 12 0.77±0.11*中剂量组13 12 0.80±0.12*高剂量组26 12 0.85±0.15*
由表2可见,灌胃正常小鼠受试药物28d后,与对照组相比,低、中、高剂量的足趾肿胀厚度分别提高 22.3%(P＜0.01)、33.3%(P＜0.01)、40.2%(P＜0.01)。

2.3 复方黑芝麻胶囊对正常小鼠脾淋巴细胞增殖能力的影响见表3。

表3 对正常小鼠脾淋巴细胞ConA增殖能力的影响(±s,λ=570nm)组别剂量(mg/kg) n 光密度差值对照组0 12 0.0075±0.0028低剂量组 6.5 12
0.0098±0.0044中剂量组13 12 0.0085±0.0036高剂量组 26 12
0.0080±0.0025
由表3可见,灌胃正常小鼠受试药物8d后,与对照组相比,低、高剂量组分别提高经Con A诱导的脾淋巴细胞增殖能力31.1%(P＞0.05)、5.1%(P＞0.05)、3.9%(P＞0.05)。

2.4 复方黑芝麻胶囊对正常小鼠NK细胞活性的影响见表4。

表4 对正常小鼠N K细胞活性的影响(±s)与对照组比较,*P＜0.05组别剂量组(mg/kg) n NK细胞活性值对照组 0 12 34.7±16.3低剂量组 6.5 12
56.3±27.0*中剂量组13 12 48.1±23.4高剂量组26 12 40.4±17.1
由表4可见,灌胃正常小鼠受试药物28d后,与对照组相比,低剂量的NK细胞活性提高62.2%(P＜0.05)。

2.5 复方黑芝麻胶囊对正常小鼠抗体生成细胞的影响见表5。

表5 对正常小鼠PEC的影响(±s)与对照组比较,*P＜0.05组别剂量(mg/kg) n PFC(lg空斑数/全脾细胞)对照组0 12 4.69±0.26低剂量组 6.5 12
4.94±0.25*中剂量组13 12 4.87±0.47高剂量组26 12 4.80±0.12
由表5可见,灌胃正常小鼠受试药物28d后,与对照组相比,低剂量组的 PFC提高5.3%(P＜0.05)。

2.6 复方黑芝麻胶囊对正常小鼠血清溶血素水平的影响见表6。

表6 对正常小鼠血清HC50水平的影响(±s)与对照组比较,*P＜0.05组别剂量(mg/kg) n HC50对照组0 10 116.1±27.1低剂量组 6.5 10 136.0±7.4*中剂量组13 10 130.1±6.8高剂量组26 10 128.6±15.6
由表6可见,灌胃正常小鼠受试药物28 d后,与对照组相比,低剂量组的 HC50提高17.1%(P＜0.05)。

2.7 复方黑芝麻胶囊对正常小鼠碳廓清能力的影响见表7。

表7 对正常小鼠碳廓清的影响(±s)与对照组比较,*P＜0.05组别剂量(mg/kg) n 碳廓清吞噬指数α对照组0 10 4.35±0.87低剂量组6.5 10 5.04±0.43*中剂量组 13 10 4.86±0.59高剂量组26 10 4.62±0.33
由表7可见,灌胃正常小鼠受试药物28d后,与对照组相比,低剂量组的碳廓清指数提高15.9%(P＜0.05)。

2.8 复方黑芝麻胶囊对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验(半体内法) 见表8。

表8 对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬能力的影响(±s)与对照组比较,*P＜0.05组别剂量(mg/kg) n 吞噬率吞噬指数对照组0 10 18.6±4.1 0.226±0.052低剂量组6.5 10 25.4±4.1* 0.304±0.055*中剂量组13 10 27.6±6.0* 0.334±0.081*高剂量组26 10 33.6±7.3* 0.346±0.101*
由表8可见,受试药物高、中、低剂量组吞噬率、吞噬指数与正常对照组比较差异有显著性意义(P＜0.05)。

说明受试药物在6.5 mg/kg/d、13.0mg/kg/d、
26.0mg/kg/d(相当于人体推荐摄人量的 l0倍、20倍、40倍)的剂量时,均具有增强小鼠腹腔巨噬细胞吞噬能力的作用。

3 讨论
复方黑芝麻胶囊中制何首乌不同提取物能抑制小鼠脾脏淋巴细胞增殖及ConA诱导的T淋巴细胞增殖;制何首乌多糖可显著提高正常小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬百分率和吞噬指数,促进溶血素及溶血空斑形成,促进淋巴细胞转化。

黑芝麻中的芝麻素具有广泛的生物活性,可以直接作用于组织器官,发挥其优异的抗氧化能力,是黑芝麻抗氧化功效的最主要成分[6]。

黑木耳多糖可明显促进小鼠脾细胞产生IL-2水平,间接增强体液免疫应答[7]。

麦门冬能够提高D-半乳糖模型大鼠SOD活性,补充体内抗氧化剂的不足,进而增加机体总抗氧化能力,拮抗自由基对生物的损伤[8]。

黑桑堪鲜果和原汁能有效拮抗HC对小鼠的免疫抑制作用,帮助处于免疫低下状态的小鼠调节和恢复免疫功能,促进脾脏增重,提高体液免疫和非特异性免疫功能,使之恢复正常水平[9]。

本实验结果表明,经口给予低剂量(6.5 mg/kg)的复方黑芝麻胶囊,与对照组比较,能降低正常小鼠的足趾肿胀厚度,提高NK细胞活性、血清溶血素水平、抗体生成细胞数量、碳廓清吞噬指数和巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力提示复方黑芝麻胶囊具有增强免疫的功能,其功能与其剂量有很大关系。

参考文献：
[1]金宗濂.功能食品评价原理及方法[M].北京：北京大学出版社,1995：83～85.
[2]薛彬.免疫毒理学实验技术[M].北京：北京医科大学—中国协和医科大学联合出版社,1995.
[3]袁崇刚.褪黑激素对免疫机能的影响[J].中国老年学杂志,1995,15(6)：376.
[4]陆海鹏.肝康宁抗炎免疫作用研究[J].现代医药卫生,2009,25(3)：370～371.
[5]蔡华芳.美保口服液对小鼠免疫功能的影响[J].医药导报,2007,26(6)：585～587.
[6]余泽高,王彩霞,赵胜祥.黑芝麻愈伤组织的诱导及分化的初步研究[J].长江大学学报,2005,2(11)：73～75.
[7]张秀娟,于慧茹,耿丹,等.黑木耳多糖对荷瘤小鼠细胞免疫功能的影响研究[J].中成药,2005,27(6)：691～693.
[8]徐慧宇,于刚,张易水,等.中药麦门冬对大鼠红细胞免疫功能及抗衰老作用的研究[J].中医药学报,2001,29(1)：46～47.
[9]杨小兰.桑堪对小鼠免疫功能和果蝇衰老过程的影响[J].山西食品工业,2001,(3)：2～3.。