经股动脉途径射频消融术建立beagle犬永久性房室传导阻滞模型

经股动脉途径射频消融术建立beagle犬永久性房室传导阻滞
模型
信鹏程;陈一和;李岳春;李进;张文武;林加锋
【摘要】Objective To establish a animal model of complete atrioventricular block (AVB) model. Methods After pacemaker implanted in 12 Beagle dogs , AVB was induced by interrupting His bundle conduction by radiofrequency ablation at the base of the aortic cusp from femoral artery in left ventricular ablation group (n=6) and at the Koch triangle from femoral vein in right ventricular ablation group (n=6). Animals were sacrificed 4 weeks after AVB was induced, then the pathological changes of myocardium were examined; and the success rate, complications and stability of model were compared between two groups. Results The success rate was higher, intraoperative complications were less, the time of operation and X-ray exposure was shorter in left ventricular ablation group than those in right ventricle ablation group (al P<0.05). Conclusion A-V block model has been successful y established with radiofrequency ablation from femoral artery in Beagle dogs with high success rate and low complications.% 目的探讨经股动脉途径射频消融术建立beagle犬永久性房室传导阻滞模型的可行性，并比较其与传统造模方法的利弊.方法将12只beagle 犬分成两组，预置起搏器后，左心室消融组(6只)经股动脉途径于主动脉窦下左心室间隔上部消融建立房室传导阻滞模型，右心室消融组(6只)经股静脉途径于koch三角处消融建立房室传导阻滞模型.两组以建立完全房室传导阻滞为终点.术后随访4周后处死动物，比较造模成功率、手术并发症及模型稳定性.结果左心室
消融组成功率大于右心室消融组，术中并发症小于右心室消融组，左心室消融组手术时间及X线曝光时间短于右心室消融组(均P<0.05)，两组模型稳定性差异无统计学意义(均P>0.05).结论经股动脉途径射频消融术建立beagle犬永久性房室传导阻滞模型较传统途径消融法成功率高且并发症少，在有条件的实验室和有经验的单位，可优先选用经股动脉射频消融术建立房室传导阻滞模型.
【期刊名称】《浙江医学》
【年(卷),期】2013(000)005
【总页数】5页(P330-333,340)
【关键词】房室传导阻滞;射频消融;beagle犬;疾病模型
【作者】信鹏程;陈一和;李岳春;李进;张文武;林加锋
【作者单位】325027 温州医学院附属第二医院心内科;325027 温州医学院附属第二医院心内科;325027 温州医学院附属第二医院心内科;325027 温州医学院附属第二医院心内科;325027 温州医学院附属第二医院心内科;325027 温州医学院附属第二医院心内科
【正文语种】中文
心律失常分为快速性心律失常和缓慢性心律失常，完全性房室传导阻滞是一种常见且严重的缓慢性心律失常，是由于遗传、感染、供血障碍、纤维化等原因导致自律细胞数量减少或传导功能障碍所致,目前缺乏有效的药物治疗，临床上常用的治疗手段是给患者植入起搏器，长期起搏会导致心脏结构重构与电重构[1-4]。

为了更好地研究房室传导阻滞的发病机制及评价各种干预措施的疗效,建立方便、简捷、可靠的动物模型是非常必要的。

目前国内外学者大多应用射频消融法制备，在预置
起搏器的情况下，经股静脉途径于右心室koch三角处希氏束行射频消融，建立完全性房室传导阻滞动物模型。

然而此种方法在消融过程中存在希氏束寻找困难，消融无应答且易并发室性心律失常等问题，导致成功率不高[5-8]。

我们在既往研究
的基础上对传统方法进行了改进，研究出一种建立房室传导阻滞的新方法——经
股动脉途径左心室主动脉窦下室间隔上部射频消融术，旨在探讨其可行性及成功率并比较其与传统方法制备房室传导阻滞模型的利弊。

1.1 材料健康beagle犬12只，雌雄不限，购于南京亚东实验动物研究中心[SCXK（苏）2011．0013]。

采用掷币法将犬随机分成两组：左心室消融组（6只），体重（18.87±1.54）kg；右心室消融组（6只），体重（18.62±1.38）kg。

饲养于温州医学院实验动物中心普通动物房，不锈钢笼单只饲养，室温
（20±5）℃，相对湿度（55±15）%。

以实验动物颗粒饲料（由北京科澳协力饲
料有限公司，批号：111204）喂养。

实验材料包括：戊巴比妥钠（上海西塘生物
科技有限公司，批号：20110615），永久起搏器导线（美国美敦力CapSureFixm Novus 5076主动导线），心外膜导线（美国美敦力Capsure
Epi4965心外膜导线），永久性心脏起搏器（美国美敦力InSync 8042 CRT），C 型臂心血管造影机（德国西门子公司），数字式十二道心电图机（深圳理邦精密仪器有限公司，SE．1200 Express），起搏器程控仪（美国美敦力9790），小动物呼吸机（DW-3000，淮北正华生物仪器设备有限公司），犬脑钠肽（BNP）ELISA试剂盒（上海希美生物科技有限公司，批号：NO502230）。

1.2 方法
1.2.1 术前准备实验动物术前禁食12 h，禁水4h。

3%戊巴比妥钠全身麻醉
（30mg/kg，腹腔注射），约半小时后达松口指征，必要时实验过程追加麻醉。

用剃毛机剪去犬前胸、后背、颈下及四肢内侧毛发，清洗消毒上述部位。

1.2.2 预置双心室同步化起搏器送入介入导管室，将其仰卧位固定于手术台上，背
部垫参考电极板，行气管插管,呼吸机辅助呼吸（SIMV模式，呼吸频率20次/min，潮气量10~20ml/kg，氧流量4~6L/min，吸入氧浓度40%~ 60%。

连接肢体导联，描记体表12导联心电图。

颈部常规消毒、铺巾，Seldinger法穿刺右上腔静脉，依次送入导引钢丝、7F静脉撕开鞘及CapSureFixm Novus 5076主动固定
导线，在X线引导下将主动固定导线经上腔静脉送至右心室心尖部,X线透视下导
线头端稳定后旋出导线（一般旋出15~16圈），随后在X线透视下部分撤出导丝，调整主动导线的张力。

导线参数检测:要求心室起搏阈值＜1.0V，R波振幅＞
5.0mV，心室起搏系统阻抗在400~1 000Ω。

然后缝扎固定右心室主动固定导线。

消毒胸部，经第5肋间左前外侧切口切开皮肤，逐层分离皮下组织及肋间肌后进胸，用拉钩扩大肋间隙以显露视野，此时将呼吸机潮气量调至8~10ml/kg，缝制心包吊床，于左心室侧后壁无血管区缝置Capsure Epi4965心外膜导线，关闭胸腔。

制皮下隧道将右心室主动固定导线引至开胸部位，在其皮下制作囊腔,将起搏
器与右心室主动固定导线及左心室心外膜导线尾端连接并置入囊袋内。

测试起搏功能是否良好，程控起搏参数（起搏模式VVI，起搏频率＞自身频率10~20次
/min），观察起搏器起搏功能状态，确定起搏功能状态良好后，缝合皮下组织及
皮肤。

实验过程中适当补液。

1.2.3 建立完全性房室传导阻滞动物模型双心室同步化起搏器植入成功并确定起搏功能良好后，将起搏器程控为VVI模式，频率60次/min，其他参数按机内原有
设置。

（1）左心室消融组：右侧腹股沟区常规消毒、铺巾，Seldinger法穿刺右
股动脉置入7F动脉鞘，经鞘置入7F黄靶温控消融导管（美国Biosence Webster公司），在X线透视下将消融导管逆行送到主动脉根部，先在无冠窦寻
找His电位，如有His电位可试行放电消融，如无冠窦未找到His电位，则跨主
动脉瓣将消融导管送入左心室主动脉根部位置，在左心室间隔上部往往可标测到最大His电位，寻找到A-H-V关系固定且“H”波最大时，预设温度60℃，能量
60W，阻抗80~150Ω进行试放电,放电10s内出现完全性房室传导阻滞（出现VVI起搏心律，A、V分离）为有效靶点并巩固放电60s，术后观察30min，房室传导功能未恢复，完全性房室分离持续存在（持续性VVI起搏心律）为成功标准。

若放电10s内未出现完全性房室传导阻滞，则重新标测，寻找靶点，直至找到有
效靶点，并完全阻断房室传导功能为止。

（2）右心室消融组：Seldinger法穿刺
右股静脉,置入7F动脉鞘，经鞘置入7F黄靶温控消融导管，在X线透视下将消融导管送入右心室，在邻近三尖瓣环右心室间隔中上部koch三角处标测His电位,
当寻找到A-H-V关系固定的“H”波时进行试放电（温度、能量、阻抗设置同左
心室消融组），其有效标准及消融终点与左心室消融组相同。

术中两组动物均经静脉注入肝素2 000U预防血栓（如手术时间超过1h，以后每小时追加500U），
所有手术过程均遵守无菌手术原则，术后拔出消融导管，压迫止血（股动脉途径需压迫半小时以上），然后各伤口贴无菌敷帖。

将起搏频率程控至130次/min，左心室领先10ms进行起搏。

手术结束后送回动物房进行饲养，每日监测犬的呼吸、心率、食欲、精神状态。

术后3 d内每天使
用青霉素针160万U肌肉注射预防感染。

每周至少记录体表心电图1次。

1.2.4 术后随访随访4周,分别在术前、术后2周、4周行超声心动图检查，测量
指标包括：左心室舒张末期内径（LVEDD）、左心室收缩末期内径（LVESD）、
舒张期室间隔厚度（IVSDD）、收缩期室间隔厚度（IVSSD）和左心室射血分数（LVEF），左心室短轴缩短率（FS），胸骨旁长轴切面测量左心房前后径（LAID）。

每周行心电图检查及起搏器程控，测量QRS时间、Q-T间期及Tp-e
间期，抽空腹血查血浆BNP浓度。

1.3 统计学处理采用SPSS 19．0统计软件及MicroSoft Excel软件，计量资料以表示，组间比较采用t检验,率的比较采用χ2检验。

2.1 起搏器的植入及三度房室传导阻滞动物模型的建立所有beagle犬均成功成功
植入起搏器，起搏器工作状态良好。

所有犬消融前均表现为窦性心律（图1A），心率（137.70±9.04）次/min。

共10只犬成功建立三度房室传导阻滞模型（图
1B）。

右心室消融组中，2只beagle犬在koch三角消融His电位（图1C）过
程中突发心室颤动（图1D），1只经抢救无效死亡，另1只抢救后存活（继续消融后因多次放电无效而终止实验），其余4只成功建立房室传导阻滞模型。

左心
室消融组中，6只均存活，其中1只在无冠窦内可见明显的His电位（图1E），
但消融放电无效，6只均在主动脉根部无冠窦下方的左心室间隔上部标测到最大的His电位（图1F）并消融成功，成功建立三度房室传导阻滞模型。

两组消融后心
率60次/min（VVI起搏心率）。

两组射频消融手术时间、X线曝光时间及出血量等比较见表1。

由表1可见，左心室消融组手术成功率大于右心室消融组，手术时间、试消融次数、X线曝光时间小于右心室消融组，出血量及术中并发症少于较右心室消融组（均P＜0.05）。

2.2 两组手术前后心电图特征、心脏超声参数及BNP的变化成功建立模型的10
只犬在4周的随访期内均为稳定的三度房室传导阻滞。

术后均无感染等并发症发生。

无厌食、气促，无颈静脉怒张、胸腔积液等心力衰竭症状与体征。

两组手术前后心电图特征、心脏超声参数及BNP的变化见表2。

由表2可见，两组术后2、4周内与术前相比在心率、体重、呼吸、心脏超声各指标、Q-T间期、BNP等方面差异均无统计学意义（均P＞0.05），而两组QRS时间、Tp-e间期术后2、4周较术前差异均有统计学意义（均P＜0.05）。

完全性房室传导阻滞是一常见的可导致严重后果的疾病，常导致心源性晕厥和猝死，严重者危及生命。

目前缺乏有效的药物治疗，长期起搏治疗可发生心脏电生理改变，继而出现组织学改变，造成心肌电重构和组织重构，导致恶性心律失常和猝死的发生率增加[1~4]。

自1981年Gonzalez等[6]首次报道经静脉途径在koch三角区域射频消融建立房室传导阻滞的动物模型以来，人们一直沿用此方法来建立缓慢型心率失常的动物模型，然而犬的His电位并不像人一样容易标测，我们在实践中发现此种方法存在His电位寻找困难，消融无应答且易并发室性心律失常等问题，导致成功率不理想[5,7-8]。

本课题组根据心脏传导系统的解剖结构，以及临床上经股动脉射频消融治疗左心室起源的室性心律失常（在无冠窦或其下方的室间隔上部可标测到His 电位）的经验，对传统的造模方法进行了改进，首次经股动脉途径射频消融建立了beagle犬永久性房室传导阻滞模型。

经实验我们证实这是一种安全可行的，成功率高、并发症较少的方法。

与传统的方法比较具有如下优点：（1）建立的是一种可长期存活稳定的符合临床病理生理状况的动物模型。

传统方法大多是用单腔起搏器或临时起搏器起搏，甚至不起搏，动物的生存时间较短，易较早地发生电重构和解剖重构，减少了动物的存活时间，而我们采用双心室同步化起搏，减少了起搏器综合征的发生，提高了动物生存质量，术后并发症少，模型比较稳定，可长期进行研究。

（2）左心室消融组成功率高于右心室消融组，手术时间短、X线曝光时间短于右心室消融组，术中并发症较右心室消融组少。

（3）本实验建立的不仅是一个永久性房室传导阻滞模型，还是一个心脏电生理重构模型。

心脏电生理重构是指由于激动频率和（或）激动顺序的变化导致心肌电生理特性的持续性改变，这种改变，主要表现在心肌复极时间延迟、动作电位时程延长、有效不应期离散度增加，以及心肌电生理异质性增加，电重构被认为是引起许多心脏疾病中重要的病理生理学机制之一[9]。

本实验中两实验组QRS时间、Tp-e间期等心电数据术后4周较术前均有显著性改变，说明犬起搏4周后已发生了心电异常。

（4）采用人用起搏器和起搏导线，整个操作过程和临床类似。

实验所用起搏器和起搏导线大部分为临床废旧品，经消毒后，回收利用，相对自制起搏器有较高的安全性和可靠性，又不增加经费负担。

本实验模型制备需要注意的问题：（1）操作过程应轻柔。

（2）
整个手术过程应做到无菌，以免造成起搏器囊袋感染、败血症，而导致动物死亡。

（3）对术者有一定的技术要求，应具有临床起搏器植入术及射频消融术经验。

（4）射频消融术中应注入肝素，预防血栓形成。

在动物实验中，用一种简便且成功率高的方法建立动物模型，可以节省人力物力，特别对于大型动物实验，显得尤为重要。

总之，经股动脉途径射频消融术较传统途径消融省时且成功率高,在有条件的实验室和有经验的相关人员配备下，可优先选用经股动脉射频消融术建立房室传导阻滞模型。

【 Abstract】 Objective To establish a animal model of complete atrioventricular block (AVB)model. Methods After pacemaker implanted in 12 Beagle dogs,AVB was induced by interrupting His bundle conduction by radiofrequency ablation at the base of the aortic cusp from femoral artery in left ventricular ablation group(n=6)and at the Koch triangle from femoral vein in right ventricular ablation group(n=6).Animals were sacrificed 4 weeks after AVB was induced,then the pathological changes of myocardium were examined;and the success rate,complications and stability of model were compared between two groups. Results The success rate was higher,intraoperative complications were less,the time of operation and X-ray exposure was shorter in left ventricular ablation group than those in right ventricle ablation group（all P＜0.05）. Conclusion A-V block model has been successfully established with radiofrequency ablation from femoral artery in Beagle dogs with high success rate and low complications.
【相关文献】
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