银杏达莫联合脂必泰胶囊对小鼠心肌缺血模型的保护性研究

银杏达莫联合脂必泰胶囊对小鼠心肌缺血模型的保护性研究李健
【摘要】目的:探讨银杏达莫联合脂必泰胶囊对小鼠心肌缺血模型的保护作用.方法:建立小鼠心肌缺血模型,将随机分模型组、银杏达莫组以及联合组,每组10只,另选取10只正常小鼠作为对照组.对照组和模型组给予尾部静脉注射生理盐水.银杏达莫组给予银杏达莫尾部静脉注射,联合组在银杏达莫组的基础上再给予脂必泰.观察并比较各组用药后小鼠血清中的乳酸脱氢酶(LDH)、血清肌酐酸(CK)、丙二醛(MDA)以及超氧化物歧化酶(SOD)并记录心电图ST段.结果:银杏达莫组及联合组可明显抑制小鼠心电图ST段抬高,可显著抑制小鼠血清LDH和CK的增加,降低MDA含量,明显升高SOD活性及NOS活性,同时减轻异丙肾上腺素诱导的心肌病理损伤.结论:银杏达莫联合脂必泰对小鼠心肌损伤具有保护作用,其机制可能与增加NOS、SOD活性、抑制MDA含量和血清LDH、CK活性增加有关.%Objective; To study the cardioprotective effects of the peptides from the velvet antler of Ginkgo bilobate extract and Zhibitai on acute ischemic myocardial injury in rats. Method; The ischemia model was made by using subcutaneous of isoproterenol in mice. And it was will randomly divided into three groups.
10 normal mices were select as control group. The control group and the model group were given intravenous saline. The Ginkgo bilobate extract group was given Ginkgo bilobate extract of mo tail vein injection, the joint group were given Zhibitai on the basis of Ginkgo bilobate extract group. The ischemic size, ST elevation ,serum levels of creatine kinase(CK) ,lactate dehydrogenase (LDH) , nitric oxide synthetase (NOS) , superoxide dismutase (SOD) ,maondialdehyde (MDA) , and levels of SOD, MDA in
myocardial tissue were measured. Result; The Ginkgo bilobate extract group and joint group also inhibited Iso-induced mice of ST segment of ECG, and significantly reduced the increases of LDH and CK activity in mice serum , remarkably the content of MDA, SOD activity and NOS activity, and also significantly ameliorated myocardial ischemic injury. Conclusion; VAP exerts significant cardioprotective effects against acute ischemic myocardial injury in mice. The mechanism may be related to the increase in activity of NOS and SOD,the reduction of MAD content ,LDH and CK activation.
【期刊名称】《中国中医基础医学杂志》
【年(卷),期】2013(019)002
【总页数】3页(P154-155,173)
【关键词】银杏达莫;脂必泰胶囊;小鼠;心肌缺血
【作者】李健
【作者单位】山东中医药大学附属医院药学部,济南250011
【正文语种】中文
【中图分类】R285.5
缺血性心脏病属中医学“胸痹”范畴，是目前引发突然死亡的主要原因之一，严重威胁人类健康。

近年来，中药在心肌缺血保护方面显示出良好的前景。

银杏达莫是银杏叶提取物，能有效地扩张脑血管、抑制血小板聚集、增加脑血流量、促进脑血
液循环，抗氧化、清除自由基、缓解缺血、缺氧和舒张血管平滑肌等药理作用［1］。

今年药理研究发现［2］，其能升高大鼠超氧化物歧化酶、降低丙二醛含量。

近年研究发现［3］，脂必泰能有效地调脂，还能改善血管内皮功能，但目前未见关于银杏达莫在心肌缺血保护作用的详细研究。

本研究拟在异丙肾上腺素诱发的小鼠心肌缺血模型上，探讨银杏达莫联合脂必泰对心肌缺血的保护作用及作用特点，为临床用药提供实验依据。

1 材料与方法
1.1 药品与试剂
盐酸异丙肾上腺(ISO)(上海禾丰制药有限公司，批号6E2011);银杏达莫注射液(山
西普德药业有限公司，批号20110120);脂必泰(成都地奥九泓制药厂，批号101126);生理盐水(四川科伦药业股份有限公司)。

磷酸肌酸激酶(CK)试剂盒、乳酸脱氢酶(LDH)、一氧化氮合酶(NOS)试剂盒均购于北京中生生物工程公司;超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)试剂盒购自南京建成生物工程研究所。

1.2 仪器
ECG-651型心电图仪(上海光电医用电子仪器有限公司)、721分光光度计(上海第
三分析仪器厂)、CLSM共聚焦激光扫描显微镜(德国Zeiss公司)。

1.3 动物
SPF级昆明种小鼠40只，雌雄各半，体质量18!23g，平均体质量20.8±2.4g，
购于山东中医药大学实验动物中心(许可证号SCXK(鲁)20070004)。

1.4 模型建立及分组
入组小鼠均在实验前记录Ⅱ导联心电图，剔除ECG异常者，并将其随机分为对照组、模型组、银杏达莫组以及联合组。

对照组和模型组小鼠给予10mg·kg－1NS，银杏达莫组给予1ml/d腹腔注射，联合组在银杏达莫组基础上给予4.8mg·kg－1。

5min给予20mg·kg－1盐酸异丙肾上素，连续2d皮下注射ISO。

第2天注射3%
戊巴比妥钠ip麻醉后，仰卧位固定，记录ISO注射前及注射15min后记录1次Ⅱ导联测定ST段J点上移值。

2h后去眼球采血备用。

将血样3000r/min离心15min后取血清，血清CK、LHD含量按照比色法测定，血清SOD活性采用黄嘌呤氧化酶法测定，血清MDA含量按照硫代巴比妥酸法测定，以上测定均按试剂盒说明书进行操作。

取血后立即处死小鼠取出心脏，剪去心室置于4%多聚甲醛中进行病理组织学检查。

1.5 统计学处理
运用SPSS17.0分析所得数据，一般资料用均数±标准差(±s)表示，采用单因素方差分析进行组间比较，各组间样本采用t检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果
2.1 对异丙肾上素诱发小鼠心肌缺血的影响
2.1.1 对心肌缺血小鼠心电图ST段影响表1显示，与对照组相比，异丙肾上素皮下注射后，模型小鼠的心电图ST段明显抬高(P＜0.01)。

银杏达莫组及联合组能明显抑制异丙肾上素诱导的小鼠心电图ST段的抬高(与模型组相比均P＜0.01)，且2组比较差异有统计学意义(P＜0.05)。

表1各组小鼠心肌缺血ECG、血清CK、LDH、MDA、SOD及NOS的影响(±s)注:与对照组比较:1)P＜0.001，2)P ＜0.01;与模型组比较:3)P ＜0.001，4)P ＜0.01，5)P ＜0.05组别例数 ST段抬高(mV) CK(U"L－1) LDH(U"L－1) MDA(μmol"L－1) SOD(U"mL－1) NOS(KU"g－1)对照10 0.04±0.01 234.56±101.18 361.34±131.35 5.83±1.38 323.95±20.36 0.87±0.09模型10 0.74±0.381) 572.49±113.241)623.19±127.121) 11.42±1.731)
226.91±19.271) 0.59±0.072)银杏达莫10 0.51±0.233)
375.31±108.133)519.28±121.474) 7.13±1.343) 334.27±23.284)
1.10±0.134)联合10 0.38±0.164) 338.58±10
2.544)462.71±11
3.945)
6.06±1.255) 39
7.16±30.213) 1.65±0.113)
2.1.2 对心肌缺血小鼠血清LDH、CK、SOD、MDA及NOS的影响表1显示，与对照组相比，模型组血清LDH、CK及MDA均明显升高(P＜0.01)，而血清SOD和NOS明显降低(P＜0.01)。

与模型组相比，银杏达莫组及联合组均可提高
心肌缺血小鼠血清SOD活性及NOS活性，降低MDA含量，抑制血清LDH和CK的增加(P＜0.01)。

2.2 对异丙肾上素诱发心肌缺血小鼠心肌损伤程度的影响
图1显示，对照组小鼠心肌组织未见病理形态改变。

模型组小鼠缺血心肌呈萎缩、断裂状，部分心肌纤维胞浆呈凝固性坏死，部分呈溶解性坏死，心肌间炎症细胞浸润明显。

与模型组相比，银杏达莫组及联合组小鼠心肌组织病理损伤程度均有所减轻，且联合组小鼠心肌组织病理改变情况明显优于银杏达莫组，仅见少量心肌纤维萎缩和少量炎症细胞浸润。

3 讨论
心血管疾病是临床常见病、多发病，随着社会人口的老年化，其发病率呈上升趋势。

心肌缺血为心血管常见疾病，长期心肌缺血会导致心肌梗死以及心细胞坏死。

异丙肾上腺素皮下注射可加快心率，使心肌收缩力增强，增加心肌耗氧量，造成心肌细胞缺血，是一种常用的动物实验性心肌缺血模型［4］。

心电图变化是心肌缺血模型成功与否的最直观的指标［5］。

本研究结果显示，在异丙肾上腺素皮下注射后，模型组小鼠心电图ST段明显抬高，给予银杏达莫和银杏达莫联合脂必泰能明显抑制小鼠心电图ST段的抬高，且银杏达莫组与联合组明显比较差异有统计学意义(P ＜0.05)。

提示银杏达莫对小鼠心肌缺血损伤具有一定保护作用，脂必泰能提高银
杏达莫的心肌缺血保护作用。

图1 各组用药对异丙肾腺上素诱发心肌缺血小鼠心肌损伤程度情况比较
LDH、CK是心肌缺血时心肌细胞受损程度的重要标志［6］。

氧自由基形成过多
可导致膜脂质过氧化加强，改变膜通透性及流动性，使心肌细胞的功能、结构发生改变，是心肌缺血发生的主要机制之一［7］。

MDA含量可间接反映细胞受自由
基损伤的程度。

SOD活性高低可间接反映机体清除氧自由基的能力［8］，NOS
是一种分布于血管内皮细胞、神经细胞、中性粒细胞和巨噬细胞等含铁的单氧化酶［9］。

本研究结果显示，在异丙肾上素皮下注射后，模型组小鼠血清LDH、CK
及MDA均明显升高，而血清SOD和NOS明显降低(P＜0.01)。

银杏达莫组及联合组均可提高心肌缺血小鼠血清SOD活性及NOS活性，降低MDA含量，抑制
血清LDH和CK的增加(P＜0.01)，进一步提示银杏达莫联合脂必泰抗心肌缺血作用。

通过EN染色可显示，心肌组织的病理变化可微观地观察心肌损伤程度［10］。

本研究结果显示，与模型组相比，银杏达莫组及联合组小鼠心肌组织病理损伤程度均有所减轻。

联合组仅见少量心肌纤维萎缩和少量炎症细胞浸润，其小鼠心肌组织病理改变较银杏达莫组明显减轻，提示银杏达莫联合脂必泰可明显减轻心肌组织病理损伤程度，其原因可能与脂必泰改变血管内皮功能有关。

综上所述，银杏达莫联合脂必泰对小鼠心肌损伤具有保护作用，其机制可能与增加NOS、SOD活性，抑制MDA含量和血清LDH、CK活性增加有关。

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