人脐静脉内皮细胞(HUVEC)分离培养仪器试剂和操作步骤

人脐静脉内皮细胞（HUVEC）分离培养仪器试剂和操作
步骤
溶液以及器材：
1、用RPMI-1640配I型胶原酶 0.1g/100ml
2、配三抗：
青霉素：100ku/L
链霉素：100ku/L
庆大霉素：100ku/L
3、培养液（M199＋ECGS[3ug/ml]＋15％胎牛血清）有EGF可以适当加点10ng/ml
4、大瓶生理盐水
5、广口瓶（脐带数＋1）
6、止血钳（脐带数×2＋2）
7、大针头数个（用于吸取生理盐水，胶原酶）
8、手术剪刀数把
使用前器械高温蒸气灭菌。

实验步骤：
1、去妇产科取当天新鲜脐带（广口瓶；生理盐水），试验前放入4度冰箱。

2、辨别脐带静脉（粗大的那根），顺着静脉瓣插入大针头，注入生理盐水，充分
冲洗脐静脉，至流出液体中无可见血液。

3、夹住脐带下端，从上端灌注0.1%的胶原酶，钳住脐静脉上端，37度孵育15分钟（已经足够）；如果消化液中出现絮状物，说明消化时间过长。

4、收集消化液，并用含小牛血清的RPMI-1640 冲洗脐静脉，冲洗液并入消化液中。

1000－1500转离心10分钟。

5、将细胞悬浮于培养液中（一根脐带一般可以一个培养瓶，如果细胞少就六孔板
一个孔），细胞不能太稀疏，否则生长缓慢。

6、正常情况下三天长满传代，正常的内皮细胞长满后如同卵石状，见下图。

【注意事项】
大家在用药的时候，药物说明书里面有三种标识，一般要注意一下：
1.第一种就是禁用，就是绝对禁止使用。

2.第二种就是慎用，就是药物可以使用，但是要密切关注患者口服药以后的情况，一旦有不良反应发生，需要马上停止使用。

3.第三种就是忌用，就是说明药物在此类人群中有明确的不良反应，应该是由医生根据病情给出用药建议。

如果一定需要这种药物，就可以联合其他的能减轻不良反应的药物一起服用。

大家以后在服用药物的时候，多留意说明书，留意注意事项，避免不良反应的发生。

本文到此结束，谢谢大家!。